一種茯苓速生菌種及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及茯苓菌種生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種茯苓速生菌種的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 茯苓(學(xué)名：Poria cocos (Schw.) Wolf.)別稱：茯菟，茯靈，茯奪，伏苓、伏菟，松 腴，絳晨伏胎，云苓，茯兔，松薯、松木薯，松苓。藥用部位是多孔菌科真菌茯苓的菌核。具有 利水滲濕，健脾，安神的功效。還可以制作成粉狀用來(lái)女士愛(ài)好的美白面膜。分布區(qū)域：吉 林、安徽、浙江、福建、河南、湖北、廣西、四川、貴州、云南。古人稱茯苓為"四時(shí)神藥"，因?yàn)?它功效非常廣泛，不分四季，將它與各種藥物配伍，不管寒、溫、風(fēng)、濕諸疾，都能發(fā)揮其獨(dú)特 功效。茯苓味甘、淡、性平，入藥具有利水滲濕、益脾和胃、寧心安神之功用。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究： 茯苓能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，茯苓多糖有明顯的抗腫瘤及保肝臟作用。
[0003] 針對(duì)茯苓的良好的醫(yī)療及保健價(jià)值，自古以來(lái)，我們的祖先已對(duì)其進(jìn)行了許多的 開(kāi)發(fā)應(yīng)用，作為藥品應(yīng)用，它多與其他藥物配伍，眾多藥品、食品研制單位對(duì)其進(jìn)行了開(kāi)發(fā)， 目前市場(chǎng)上用作藥品的產(chǎn)品有桂枝茯苓丸、茯苓玉竹片、茯苓山藥片、茯苓多糖原粉、茯苓 多糖口服液、茯苓多糖復(fù)方制劑等，作為保健食品有茯苓餅、茯苓膏、螞蟻茯苓酒等。其市場(chǎng) 前景十分廣闊。
[0004] 茯苓的主要成份為β-茯苓聚糖（又稱"茯苓多糖"），約占干重的93%。茯苓 多糖為免疫增強(qiáng)劑，具有增強(qiáng)免疫、輔助化療、防治腫瘤、抗腫瘤等作用，已廣泛用作抗癌新 藥、 茯苓為喜溫真菌，適產(chǎn)于中國(guó)、東南亞、美洲、大洋洲等有松樹(shù)的山區(qū)地方。中國(guó)是茯苓 主產(chǎn)國(guó)，約占世界茯苓總產(chǎn)量的70%。近年來(lái)，我國(guó)年茯苓成品需求量在2萬(wàn)噸以上，年出 口量約為7000噸，且市場(chǎng)需求量呈現(xiàn)逐年遞增趨勢(shì)。但是，國(guó)內(nèi)外有關(guān)茯苓新型菌種選育 技術(shù)的研究尚顯不足；且菌種經(jīng)多年的繼代繁殖，出現(xiàn)自然變異，品種退化，菌株生命力下 降，苓體小，生物學(xué)效率下降，以及存在種植成功率、茯苓產(chǎn)量、茯苓質(zhì)量極低，而且資源緊 缺和生產(chǎn)成本高、經(jīng)濟(jì)效益低等問(wèn)題。因此，選育質(zhì)量更優(yōu)的茯苓新型菌種，提高茯苓種植 業(yè)的產(chǎn)量、質(zhì)量和產(chǎn)業(yè)效益，人們當(dāng)前迫切需要解決的是技術(shù)問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述問(wèn)題，一方面本發(fā)明實(shí)施例提供了一種茯苓速生菌種及其制備方 法，采用液體發(fā)菌培養(yǎng)、固態(tài)接種栽培，抗雜能力強(qiáng)，適應(yīng)性廣，結(jié)苓率高，有效地縮短了茯 苓的生長(zhǎng)周期，減少了雜菌的污染和白蟻的危害，具有優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、高抗等優(yōu)點(diǎn)； 另方面本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，茯苓速生菌種的主要性狀特征包括：1)菌種生產(chǎn) 周期短，菌絲體粗壯，白色，鎖狀聯(lián)合體明顯；在種植過(guò)程中接種方便，菌絲傳引快；2)結(jié) 苓早，產(chǎn)量高，苓體均勻結(jié)實(shí)，肉質(zhì)白色，苓皮薄，呈朱色；3)具有遺傳性狀穩(wěn)定、抗雜能力 強(qiáng)，質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)； 本發(fā)明的目的在于提供一種茯苓速生菌種的制備方法，包括如下步驟： 1) 母種的培養(yǎng)：擇其苓體均勻結(jié)實(shí)、色紅、苓皮薄、香氣濃郁、質(zhì)量好的野生茯苓，在 24-28°C條件下進(jìn)行組織培養(yǎng)，在氣溫24°C -26°C，空氣濕度70%-80%時(shí)，用無(wú)菌刀拔去茯 苓表皮，取一小片實(shí)體，分離菌核菌絲體進(jìn)行培養(yǎng)，得母種；，其中，所述組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基 含水量為55-60%，pH值5-6,組成中包括適宜茯苓生長(zhǎng)的碳源，所述的碳源選自蔗糖、葡萄 糖、氮源選自蛋白胨、氨基酸； 2) 菌絲體的提純、復(fù)壯：將母種接種于試管培養(yǎng)基中，置于恒溫箱內(nèi)，26-28Γ培養(yǎng) 7-10天，至菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基，擇其生長(zhǎng)狀況最優(yōu)者進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng)， 3) 所述菌絲體的培養(yǎng)、提純、復(fù)壯培養(yǎng)基的組成為馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖15g、 紅糖15g、磷酸二氫鉀I. 5g、硫酸鎂0. 75g、維生素 BI lg,，蛋白胨5g、水1000 mi (松木肩 汁)。其制備方法：包括下述步驟：（1)將馬鈴薯去皮，清選干凈，切成薄片，放入鍋中煮沸， 煮到熟而不爛的程度，篩網(wǎng)過(guò)濾，制得馬鈴薯汁，調(diào)節(jié)其PH值5. 5-6.5 ; (2)在制得的馬 鈴薯汁中加入培養(yǎng)基組成中的其它成份，加熱溶解后，分裝入試管后，在〇. 15公斤壓力下 高溫滅菌30分鐘，取出，冷卻，將其制成斜面培養(yǎng)基。在無(wú)菌條件下接入茯苓母種；得提純 母種， 4) 茯苓速生菌種的選擇：根據(jù)生物基因遺傳、誘導(dǎo)變異、和新品種的選育基本原理，針 對(duì)性地遴選茯苓速生菌種；其中，所述菌絲體的培養(yǎng)、提純、復(fù)壯的培養(yǎng)基組成為，馬鈴薯 200g、瓊脂20g、葡萄糖15g、紅糖15g、磷酸二氫鉀I. 5g、硫酸鎂0. 75g、維生素 BI lg，，蛋白 胨5g、水1000 mi (松木肩汁)。
[0006] 5)本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述菌絲體的培養(yǎng)、提純、復(fù)壯培養(yǎng)基的組成為， 馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖15g、紅糖15g、磷酸二氫鉀I. 5g、硫酸鎂0. 75g、維生素 Bl lg，，蛋白胨5g、水1000 mi (松木肩汁)。其制備方法：包括下述步驟：（1)將馬鈴薯去皮， 清選干凈，切成薄片，放入鍋中煮沸，煮到熟而不爛的程度，篩網(wǎng)過(guò)濾，制得馬鈴薯汁，調(diào)節(jié) 其pH值5. 5-6. 5 ; (2)在制得的馬鈴薯汁中加入培養(yǎng)基組成中的其它成份，加熱溶解后， 分裝入試管后，在0.15公斤壓力下高溫滅菌30分鐘，取出，冷卻，將其制成斜面培養(yǎng)基。 在無(wú)菌條件下接入茯苓母種； 6) 本發(fā)明在于提供一種茯苓速生菌種的一、二級(jí)液體的制備，其特征在于，所述方法 包括如下步驟： ⑴一級(jí)培養(yǎng)：在液體培養(yǎng)基中接入所述母種，培養(yǎng)7天，作為一級(jí)種子液； ⑵二級(jí)培養(yǎng)：將所述第一代種子液按培養(yǎng)基體積10% -15 %的接種量接入液體培養(yǎng)基 中，培養(yǎng)7天，作為二級(jí)種子液； 7) 本發(fā)明在于提供一種茯苓速生菌種的三級(jí)栽培種的制備，其特征在于，所述方法包 括如下步驟： 選用新鮮、干燥、無(wú)雜質(zhì)污染的松段木，其標(biāo)準(zhǔn)：長(zhǎng)15_18mm、直徑6-8 mm，經(jīng)太陽(yáng)暴曬 干燥后，要求嚴(yán)格滅菌、消毒，在無(wú)菌室無(wú)菌接種二級(jí)液體種；接種量為30 - 40%，培育溫度 為28 - 30°C，培育時(shí)間為4-8天，待菌絲長(zhǎng)滿后，得茯苓速生菌種； 8) 本發(fā)明的一種茯苓速生菌種其特征在于： (1) 菌種生產(chǎn)周期短，菌絲體粗壯，白色，鎖狀聯(lián)合體明顯；在種植過(guò)程中接種方便，菌 絲傳引快； (2) 結(jié)苓早，產(chǎn)量高，苓體均勻結(jié)實(shí)，肉質(zhì)白色，苓皮薄，呈朱色； (3) 具有遺傳性狀穩(wěn)定、抗雜菌能力強(qiáng)，質(zhì)量好，適應(yīng)能力強(qiáng)，均可四季種植等優(yōu)點(diǎn)； (4) 顯著提高了茯苓中的茯苓多糖等有效成分的含量。
[0007] 本發(fā)明實(shí)施例中，由傳統(tǒng)的固體制作改進(jìn)為液體培養(yǎng)，三級(jí)木肩種改進(jìn)為段木種， 加強(qiáng)了菌種遺傳過(guò)程的穩(wěn)定，控制了繁育階段的退化。能四季栽培，大幅度地調(diào)節(jié)了農(nóng)忙季 節(jié)的勞動(dòng)力，調(diào)整了氣候的高溫時(shí)節(jié)；有效地增強(qiáng)了茯苓的生產(chǎn)質(zhì)量，提高了茯苓種植的產(chǎn) 量，使茯苓產(chǎn)業(yè)達(dá)到高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)為目的。
【具體實(shí)施方式】
[0008] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式作進(jìn)一 步地詳細(xì)描述，但這并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0009] 1)-級(jí)母種的制作：選擇選擇苳體均勾結(jié)實(shí)、色紅、苳皮薄、香氣濃郁、質(zhì)量好的野 生茯苓，在24-28°C條件下進(jìn)行組織培養(yǎng)，在氣溫24°C -26°C，空氣濕度70%-80%時(shí)，用無(wú)菌 刀拔去茯苓表皮，取一小片實(shí)體，分離