一種自組裝多肽、其制備方法、其核酸復(fù)合物及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及細胞生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及細胞生物學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究所使用的試 劑。具體而言，本發(fā)明涉及一種自組裝多肽，其制備方法，其核酸復(fù)合物及用途。
【背景技術(shù)】
[0002] DNA或RNA片段插入體細胞或細胞系的過程即為細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)。細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)分 為化學(xué)方法與物理方法，物理法即電穿孔法，某些條件下可用，但易導(dǎo)致較高的細胞毒性， 化學(xué)法因其操作的簡便且價格低廉而發(fā)展迅速。
[0003] 化學(xué)法通常包括脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法（目前應(yīng)用最多的轉(zhuǎn)染方法，很多文獻中如無特意 標(biāo)明化學(xué)法即指脂質(zhì)體法）、磷酸鈣法、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)法。
[0004] 但是，脂質(zhì)體技術(shù)有其缺陷，脂質(zhì)體在血清存在的條件細胞轉(zhuǎn)染效率極低，而且對 細胞具有一定的毒性。在RNA、病毒，的轉(zhuǎn)染試驗中，因為RNA極其不穩(wěn)定，就造成了使用脂 質(zhì)體進行RNA轉(zhuǎn)染時效率較低。
[0005] 磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細胞簡單、實用，但有一定的局限性，對細胞有一定的選則性，平均 每個培養(yǎng)皿中約有10%的細胞捕獲了外源轉(zhuǎn)染DNA。
[0006] DEAE-葡聚糖介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染效率較高，但突變性也較高，不適用分離穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細 胞，DEAE-葡聚糖用于克隆基因的瞬時表達，不能使細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，它對BSC-1、CV-1、COS 等細胞系非常有效，但對其他類型的細胞轉(zhuǎn)染效果不理想。目前RNA轉(zhuǎn)染仍然需要不斷的 嘗試，對于不同的細胞系，轉(zhuǎn)染的效率往往不同，對于相同的細胞系，不同的轉(zhuǎn)染試劑結(jié)果 亦會不同，因此轉(zhuǎn)染過程中需要不斷的嘗試來達到較好的效果。
[0007] 目前RNA轉(zhuǎn)染已經(jīng)被應(yīng)用到各個領(lǐng)域中，比如說細胞信號轉(zhuǎn)到分析、冗余基因確 定、基因功能的檢測、基因治療和藥物研發(fā)。通常藥物研發(fā)需要靶標(biāo)辨別、靶標(biāo)驗證、治療與 開發(fā)、模式生物實驗、臨床治療幾個過程，新興的RNA介導(dǎo)RNAi成為了靶標(biāo)介導(dǎo)的最后一道 有力工序。
[0008] 為了提高轉(zhuǎn)染的效率，提高RNA的穩(wěn)定性是一個需要研究的課題。
[0009] 多肽作為一種生物物質(zhì)，具有生物利用度高，毒性小和特異靶向等良好的生理功 能越來越受到藥物創(chuàng)新研究者的青睞。但是多肽作為藥物在臨床上的應(yīng)用受到了其物理和 化學(xué)性質(zhì)的極大限制。多肽作為藥物輔助功能的應(yīng)用逐漸成為了新藥研制的熱點之一，多 肽的兩性特征使其通過細胞膜具有可能性，因此可能作為轉(zhuǎn)染的工具。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 因此，本發(fā)明的發(fā)明目的是針對目前的轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率低，轉(zhuǎn)染的核酸不穩(wěn)定 的不足，提供一種核酸轉(zhuǎn)染載試劑，從而提高核酸的穩(wěn)定性，并使轉(zhuǎn)染在血清存在下也能進 行。
[0011] 結(jié)合本發(fā)明的目的對本發(fā)明的各個方面逐一加以描述：
[0012] 在本發(fā)明的一個方面，提供了下述式I所示的序列的自組裝多肽：
[0013] GLffffX1X2WffX3X4WffX 5X6X7WffX8X9X 10X11X12X13 (n) X14
[0014] 式 I
[0015] (SEQ ID NO ：1)
[0016] 其中，X1 為 Lys 或 Arg ;
[0017] X2 為 Ala 或 Val 或者 Leu ;
[0018] X3 為 Lys 或 Arg;
[0019] X4 為 Ala 或 Val 或 Leu ;
[0020] X5 為 Lys 或 Arg ;
[0021] X6 為 Ser 或 Thr;
[0022] X7 為 Leu 或 Val ;
[0023] X8 為 Lys 或 Arg ;
[0024] X9 為 Lys 或 Arg ;
[0025] X1。為 Lys 或 Arg ;
[0026] X11 為 Lys 或 Arg 或 Leu ;
[0027] X12 為 Lys 或 Arg ;
[0028] X13 為 Lys 或 Arg ;
[0029] (n) X14 代表 η 個 X14，其中η為0或 1，X14 SAla;
[0030] 或該自組裝多肽在一個或多個位點上發(fā)生改變的變體多肽，及其上述自組裝多肽 或變體多肽在藥學(xué)上可接受的鹽、酯、醚或酰胺，或其混合物。
[0031] 通式I序列的自組裝多肽的特點為人工合成的含有23-24個氨基酸的多肽，N末 端為非極性氨基酸末端，同時C末端為極性氨基酸末端，中間W-W用以形成所需結(jié)構(gòu)。
[0032] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的方面，
[0033] X1 = Lys ；
[0034] X4 = Ala 或 Leu ;
[0035] X6 = Ser ；
[0036] X7 = Leu ；
[0037] X8 = Arg ；
[0038] X9 = Lys ；
[0039] X10 = Arg ；
[0040] X11 = Lys 或 Leu ;
[0041] X12 = Arg ；
[0042] X13 = Lys0
[0043] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選的方面，所述的自組裝多肽選自：
[0044] 自組裝多肽 1(SEQ ID NO :2):
[0045] GLffffKAffffKAffffKSLffffRKRKRKA ；
[0046] 自組裝多肽 2(SEQ ID NO :3):
[0047] GLffffKVffffKLffffKSLffffRKRLRKA ；
[0048] 自組裝多肽 3(SEQ ID NO :4):
[0049] GLffffKLffffKLffffKSLffffRKRKRKA ；
[0050] 自組裝多肽 4 (SEQ ID NO :5):
[0051] GLffffKLffffKLffffKSLffffRKRLRK 〇
[0052] 自組裝多肽 5 (SEQ ID NO :6):
[0053] GLffffKAffffRAffffKSLffffRKRKRKA ；
[0054] 自組裝多肽 6 (SEQ ID NO :7):
[0055] GLffffKVffffRLffffKSLffffRKRLRKA ；
[0056] 自組裝多肽 7(SEQ ID NO :8):
[0057] GLffffKLffffRLffffKSLffffRKRKRKA ；
[0058] 自組裝多肽 8(SEQ ID NO :9):
[0059] GLffffKAffffKAffffRSLffffRKRKRKA ；
[0060] 自組裝多肽 9(SEQ ID NO :10):
[0061] GLffffKVffffKLffffRSLffffRKRLRKA ；
[0062] 自組裝多肽 10(SEQ ID NO :11):
[0063] GLffffKLffffKLffffRSLffffRKRKRKA ;和
[0064] 自組裝多肽 11(SEQ ID NO : 12):
[0065] GLffffKLffffKLffffRSLffffRKRLRK。
[0066] 在本發(fā)明的進一步優(yōu)選的方面，所述的自組裝多肽選自：
[0067] 自組裝多肽 I =GLffffKAffffKAffffKSLffffRKRKRKA (SEQ ID NO : 2)，
[0068] 自組裝多肽 2 :GLffWKVffffKLffffKSLffffRKRLRKA(SEQ ID NO :3)，
[0069] 自組裝多肽 3 :GLffWKLffffKLffffKSLffffRKRKRKA (SEQ ID NO :4)，和
[0070] 自組裝多肽 4 :GLffWKLffffKLffffKSLffffRKRLRK (SEQ ID NO : 5);
[0071] 在本發(fā)明的更進一步優(yōu)選的方面，所述的自組裝多肽為自組裝多肽1 : GLffffKAffffKAffffKSLffffRKRKRKA(SEQ ID NO:2)。
[0072] 在本發(fā)明的另一個方面，提供了上述自組裝多肽，該自組裝多肽在一個或多個位 點上發(fā)生改變的變體多肽，上述自組裝多肽或變體多