一種用高效液相色譜分離純化奈馬菌素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種純化方法，特別是一種高效液相色譜法純化莫西菌素前體奈馬菌 素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著抗寄生蟲(chóng)藥需求的持續(xù)增長(zhǎng)，得到高純度高藥效的抗寄生蟲(chóng)藥物已是一種不 可或缺的技術(shù)需求。
[0003] 莫西菌素（Moxidectin)是一種新型的抗寄生蟲(chóng)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)第三代阿維菌素類(lèi)藥 物，其有更高的脂溶性和水溶性，在血漿中的代謝產(chǎn)物比其他阿維菌素類(lèi)的藥物如伊維菌 素、多拉菌素等高，其在體內(nèi)停留的時(shí)間長(zhǎng)，因而藥效持續(xù)更長(zhǎng)，可對(duì)牛、羊、駱駝安全注射 并預(yù)防體內(nèi)外寄生蟲(chóng)。若想高效生產(chǎn)莫西菌素必須首先得到高純度高回收率的奈馬菌素 (Nemadectin)。奈馬菌素經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾或者衍生，可以得到莫西菌素。
[0004] 奈馬菌素又名尼莫克汀，它是一種十六元大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)驅(qū)蟲(chóng)抗生素，由藍(lán)灰鏈霉菌 發(fā)酵生產(chǎn)，也是米爾貝霉素族的一員，同莫西菌素一樣可以用于治療牛羊等動(dòng)物體內(nèi)外寄 生蟲(chóng)。其具有殺蟲(chóng)譜廣、易降解、低殘留、無(wú)抗藥性、對(duì)人畜無(wú)害、環(huán)境污染少等優(yōu)點(diǎn)。奈馬菌 素藥學(xué)活性不如莫西菌素，高純度的奈馬菌素對(duì)高純度的莫西菌素的合成具有重要意義。
[0005] 奈馬菌素的分子式為C36H520s，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0006]
[0007] 奈馬菌素相對(duì)分子質(zhì)量小于2000,其疏水性較強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中易溶，可采用反相 液相色譜（RPLC)的方法制備。
[0008] 中國(guó)專(zhuān)利CN104193760A公開(kāi)了一種利用奈馬菌素發(fā)酵液提取奈馬菌素粗品的方 法，該方法主要采用板框過(guò)濾、閃蒸干燥、浸提、降膜濃縮、酸化、脫色處理、萃取、反萃取、吸 附、結(jié)晶等一系列物化過(guò)程，得到奈馬菌素粗品。但該過(guò)程步驟繁雜，且該專(zhuān)利并未涉及該 過(guò)程得到奈馬菌素的純度。
[0009] 中國(guó)專(zhuān)利CN103588784A公開(kāi)了一種制備高純度奈馬菌素的方法，該方法需要經(jīng) 過(guò)萃取、離子交換樹(shù)脂脫色、大孔吸附樹(shù)脂1吸附萃取液中的蛋白質(zhì)、多糖和色素等雜質(zhì)， 大孔樹(shù)脂2吸附、分離奈馬菌素等多個(gè)步驟才能使奈馬菌素從純度58% -59%的粗品達(dá)到 純度90%以上。
[0010] 在這些現(xiàn)有技術(shù)中，有的純化方案僅能得到純度較低的奈馬菌素粗品，產(chǎn)品的純 度不能達(dá)到后續(xù)高效生產(chǎn)莫西菌素的要求，因而需要進(jìn)一步提高其純度以滿足要求。有的 則工序復(fù)雜，須經(jīng)過(guò)脫色、萃取、吸附等諸多步驟，并且所用的淋洗液體積較多，有機(jī)溶劑比 例較大，成本較高，對(duì)人體和環(huán)境有一定影響，因而需要進(jìn)一步減少工序及有機(jī)溶劑的用 量，以達(dá)到環(huán)境友好、純度高、回收率高的奈馬菌素純品以滿足后續(xù)要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的目的是提供一種用高效液相色譜純化奈馬菌素的方法，不僅能達(dá)到高的 純度和回收率，而且流動(dòng)相使用量小，純化時(shí)間短，工藝步驟少，從而大大縮短生產(chǎn)周期。
[0012] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種用高效液相色譜純化奈馬菌素的方 法，所述方法是用苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)的微球?yàn)樯V填料，將奈馬菌素粗品溶液上樣 到色譜柱后，以酸性醇水溶液為流動(dòng)相洗脫吸附在填料上的奈馬菌素。
[0013] 優(yōu)選的，所述苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)的微球是UniPS30-300或者UniPS 40-300。
[0014] 優(yōu)選的，所述奈馬菌素粗品用甲醇水溶液或者乙醇水溶液溶解。
[0015] 優(yōu)選的，所述酸性醇水溶液流動(dòng)相為pH在2-3的乙醇和pH在2-3的酸溶液。
[0016] 優(yōu)選的，所述奈馬菌素粗品的純度在55% -70%。
[0017] 優(yōu)選的，所述流動(dòng)相洗脫吸附在填料上的奈馬菌素過(guò)程：先用68-72%的酸性乙 醇水溶液洗雜9-10個(gè)柱體積，然后再用78-80%的酸性乙醇水溶液洗脫目標(biāo)組分8-9個(gè)柱 體積，最后用90% -95%的酸性乙醇水溶液2個(gè)柱體積清洗殘留組分。
[0018] 優(yōu)選的，所述方法在裝柱和純化過(guò)程中的壓力均小于4Mpa。
[0019] UniPS30-300和UniPS40-300是苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)的聚合物微球，孔徑 300A、粒徑分別為30± 1. 5μm和40± 1. 5μm，具有高度的粒徑均一性。其作為色譜填料 具有耐酸堿、壽命長(zhǎng)、反壓低，并且載量高、分離效果好等優(yōu)點(diǎn)。
[0020] 在純化奈馬菌素時(shí)，以UniPS40-300作為色譜柱的固定相，只需要一步即可將奈 馬菌素粗品純度從65% -68%提高到90%以上，且回收率在70%以上，同時(shí)具有很好的脫 色效果。本分離純化方法兼顧了產(chǎn)品的純度和回收率，是一種非常實(shí)用、快速的分離純化奈 馬菌素的方法，適合工業(yè)化生產(chǎn)推廣。
[0021] 因此，本發(fā)明應(yīng)用苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)的微球UniPS30-300和UniPS40-300 為色譜填料，以酸性醇水溶液為流動(dòng)相洗脫吸附在填料上的奈馬菌素，不但能夠高純度和 高回收率地對(duì)奈馬菌素進(jìn)行分離純化，而且流動(dòng)相使用量小，純化時(shí)間短，工藝步驟少，從 而大大縮短生產(chǎn)周期。
【附圖說(shuō)明】
[0022] 圖1是實(shí)施例1中使用的色譜填料UniPS30-300的掃描電鏡圖片。
[0023] 圖2是實(shí)施例1中使用UniPS30-300分離純化奈馬菌素的制備圖。
[0024]圖3是實(shí)施例1中純化前的奈馬菌素粗品的HPLC分析圖譜。
[0025]圖4是實(shí)施例1中純化后的奈馬菌素的HPLC分析圖譜。
[0026] 圖5是按照實(shí)施例1中的方法純化奈馬菌素后的相關(guān)雜質(zhì)和目標(biāo)組分奈馬菌素隨 各收集餾分的含量變化趨勢(shì)圖。
[0027] 圖6是實(shí)施例2中使用的色譜填料Uni PS 40-300的掃描電鏡圖片。
[0028] 圖7是實(shí)施例2中使用UniPS 40-300分離純化奈馬菌素的制備圖。
[0029] 圖8是實(shí)施例2中分離純化前后奈馬菌素粗品與純品的HPLC色譜對(duì)比圖。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明并不限于這 些實(shí)施例。
[0031] 實(shí)施例1
[0032] 奈馬菌素的純化：采用（4. 6X250)mm的色譜柱，UniPS30-300(聚苯乙烯-二乙 烯基苯共聚體球粒徑30 ± 1. 5μm，蘇州納微科技有限公司）作為分離純化填料，裝柱體積 4.lml，用68-72%的酸性乙醇水溶液平衡處理柱子。流動(dòng)相A為pH值為2~3的鹽酸水 溶液，流動(dòng)相B為pH為2~3的乙醇，不同百分比的流動(dòng)相A和流動(dòng)相B配成洗脫時(shí)所用 的流動(dòng)相。奈馬