來(lái)自sparc的癌排斥抗原肽以及含有該肽的藥物的制作方法
【專利說(shuō)明】
[0001] 本申請(qǐng)是原案申請(qǐng)日為2007年6月15日、原案申請(qǐng)?zhí)枮?00780022547.X(分案 申請(qǐng)?zhí)枮?01310236439.X)(國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/JP2007/062117)、發(fā)明名稱為"來(lái)自SPARC 的癌排斥抗原肽以及含有該肽的藥物"的專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及作為胃癌、胰腺癌和惡性黑素瘤（y7y-v)等高表達(dá)SPARC的癌 的癌癥疫苗有效的新型肽、以及含有該肽的腫瘤的治療和/或預(yù)防藥物。
【背景技術(shù)】
[0003] 與歐美相比，胃癌在日本或中國(guó)等亞洲各國(guó)罹患率高。由于健康診斷的普及以及 消化器官內(nèi)窺鏡器材或檢查技術(shù)的進(jìn)步，胃癌可以早期發(fā)現(xiàn)，患者人數(shù)正逐漸減少。但是， 仍然占日本人惡性新生物死亡原因的第二位，在死亡原因中所占比例仍高。胃癌中，彌漫性 (）胃癌與其它胃癌（腺癌）相比，在年輕人中發(fā)生，癌癥的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、腹膜轉(zhuǎn)移 傾向強(qiáng)，預(yù)后不良。彌漫性胃癌在診斷時(shí)大多已經(jīng)無(wú)法外科切除，即使可以切除，治療后的 復(fù)發(fā)率高，因此，確立新的治療方法是當(dāng)務(wù)之急。
[0004] 在日本，胰腺癌的死亡患者人數(shù)有增加傾向，2003年有21，148人因胰腺癌死亡。 胰腺癌占目前日本癌癥死亡原因的6. 8%，是僅次于肺癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌、肝癌的第五位。 分析世界人口統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，如果對(duì)年齡構(gòu)成不同的人群死亡率進(jìn)行比較時(shí)所使用的年齡調(diào)整 死亡率進(jìn)行計(jì)算，2000年，100, 000人中，男性中日本為8. 6人，而美國(guó)為7. 3人，英國(guó)為 6. 3-7. 0人；女性中，日本為4. 9人，而美國(guó)為5. 3人，英國(guó)為4. 8-5. 1人，與歐美相比具有 相同的水平。
[0005] 由2000年的年齡調(diào)整率（根據(jù)世界人口每100, 000人中）來(lái)看，男性中，日本為 8. 6,美國(guó)為7. 3,英國(guó)為6.3-7. 0 ;而女性中，日本為4. 9,美國(guó)為5. 3,英國(guó)為4.8-5. 1，與 歐美相比具有相同的水平。即使在圖像診斷得到發(fā)展的今天，整體日本患者的約四成是具 有遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移性的進(jìn)行性病例，并且發(fā)現(xiàn)為無(wú)法切除的局部進(jìn)行病例的狀態(tài)的患者較多。 1996年的診斷率中，胰腺癌患者整體的五年相對(duì)存活率為4. 3%，比以往的2-3%有增加傾 向，但是依然較低。關(guān)于胰腺癌的發(fā)生原因，顯示除吸煙、肥胖、飲食、飲酒、咖啡等生活習(xí)慣 之外，慢性胰腺炎或糖尿病、遺傳因素等各種因素與其相關(guān)。
[0006] 胰腺癌沒有特異性的癥狀，但有癥狀出現(xiàn)時(shí)大多已經(jīng)在發(fā)展。因此，患者整體的五 年存活率為5%以下，診斷后的預(yù)后極為不良。由于診斷困難，特別是在發(fā)達(dá)國(guó)家，作為癌癥 死亡原因疾病的頻率正在日益增加。目前是以外科切除為中心，采取了放射線治療、化學(xué)療 法等協(xié)同治療，但是仍沒有明顯的治療效果的改善，亟待建立新型的治療策略。
[0007] 黑素瘤是被稱為惡性黑素瘤的皮膚癌的一種，其浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移傾向非常強(qiáng)，作為惡 性程度非常高的癌癥令人恐懼。構(gòu)成皮膚的細(xì)胞中有產(chǎn)生黑色素的細(xì)胞，將其稱為色素細(xì) 胞（黑素細(xì)胞），該細(xì)胞癌化則形成黑素瘤。由于環(huán)境破壞導(dǎo)致大氣中臭氣層的減少，從而 暴露于紫外線的時(shí)間增加，特別是在白人中發(fā)生黑素瘤的頻率正在增加。
[0008] 日本的黑素瘤發(fā)病人數(shù)是每10萬(wàn)人口有1. 5-2人左右，推測(cè)每年有大約1500 人-2000人發(fā)病。而在歐美，每10萬(wàn)人口有10多人以上發(fā)病，在澳大利亞，每10萬(wàn)人口有 20多人以上發(fā)病，被稱為世界第一高的發(fā)病數(shù)。僅此，在歐美或澳大利亞的人們對(duì)黑素瘤非 常關(guān)心，十分注意黑素瘤的發(fā)生。另外，另人吃驚的是，不管在外國(guó)、在日本，黑素瘤的發(fā)生 可見逐年增加的傾向。最近的調(diào)查中，日本由于該病導(dǎo)致的年死亡人數(shù)有450人左右。黑 素瘤在任何年齡均可發(fā)病，特別是40歲以上發(fā)病較多，60歲-70歲左右最多。兒童發(fā)病非 常少見，但不是沒有，最近在20-30歲左右的年輕人中間發(fā)病有增加傾向。性別區(qū)分中，沒 有特別傾向于哪方較多，在男女中均有發(fā)病。日本人容易發(fā)生黑素瘤的部位是足底（腳底 面）最多，約占三成左右。在足或手指的指甲部分也較多發(fā)生，這是日本人的特征。除此之 外與歐美人同樣，在身體、手、足、面部、頭等任何皮膚處均有發(fā)生。
[0009] 目前，黑素瘤的治療是實(shí)施外科療法、化學(xué)療法和放射線療法。但是，作為適合這 些治療方法以外的轉(zhuǎn)移癌癥或難治性癌癥的姑息性的治療方法，通過(guò)提高癌癥患者對(duì)癌的 免疫力來(lái)抑制癌癥的增殖的免疫療法受到關(guān)注，實(shí)際上已經(jīng)在部分患者中取得功效。
[0010] 另一方面，由于近年來(lái)分子生物學(xué)和腫瘤免疫學(xué)的發(fā)展，已經(jīng)了解到細(xì)胞毒性 (殺傷）T細(xì)胞和輔助T細(xì)胞識(shí)別下述蛋白質(zhì)分解得到的肽，顯示破壞癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)， 其中，所述蛋白質(zhì)經(jīng)由HLA分子介導(dǎo)，呈遞于癌細(xì)胞或抗原呈遞細(xì)胞的表面呈遞，在癌細(xì)胞 中特異性高表達(dá)。并且已經(jīng)鑒定了多種刺激攻擊上述癌的免疫反應(yīng)的的腫瘤抗原蛋白、以 及由其衍生的肽，抗原特異性腫瘤免疫療法的臨床應(yīng)用得到進(jìn)展。
[0011] HLA-Ι類分子在身體的所有有核細(xì)胞的表面表達(dá)，在細(xì)胞質(zhì)或核中產(chǎn)生的蛋白質(zhì) 在細(xì)胞內(nèi)分解得到的肽與所述的HLA-Ι類分子結(jié)合，在細(xì)胞表面表達(dá)。正常的細(xì)胞表面上， 來(lái)自正常的自身蛋白質(zhì)的肽與HLA-Ι類分子結(jié)合，免疫系統(tǒng)的T細(xì)胞并不識(shí)別、破壞該結(jié)合 分子。另一方面，癌細(xì)胞在形成癌癥的過(guò)程中大量表達(dá)在正常細(xì)胞中幾乎不表達(dá)，或者很 少表達(dá)的蛋白質(zhì)。上述在癌細(xì)胞中特異性高表達(dá)的蛋白質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分解形成肽，該肽與 HLA-Ι類分子結(jié)合、在癌細(xì)胞表面表達(dá)時(shí)，則殺傷T細(xì)胞識(shí)別該細(xì)胞，只破壞癌細(xì)胞。另外， 通過(guò)將上述癌特異性抗原或肽給予個(gè)體，不會(huì)對(duì)正常細(xì)胞施加危害，而可破壞癌細(xì)胞并抑 制癌癥的增殖。這被稱為使用癌特異性抗原的癌免疫療法。另外，HLA-II類分子主要在抗 原呈遞細(xì)胞的表面表達(dá)，其結(jié)合抗原呈遞細(xì)胞由細(xì)胞外攝取、在細(xì)胞內(nèi)分解形成的、來(lái)自癌 特異性抗原的肽，在細(xì)胞表面表達(dá)。識(shí)別該結(jié)合肽的輔助T細(xì)胞被活化，通過(guò)生成活化其它 免疫系統(tǒng)細(xì)胞的各種細(xì)胞因子，可以誘導(dǎo)或增強(qiáng)對(duì)腫瘤的免疫反應(yīng)。
[0012] 因此，如果可以開發(fā)以這些在癌中特異性高表達(dá)的抗原作為靶的免疫療法，則不 會(huì)對(duì)自身正常器官產(chǎn)生有害影響，可以形成只有效排除癌的治療法。還有望獲得無(wú)需其它 治療方法、對(duì)于任何晚期癌癥患者均可使用的治療方法。另外，將癌特異性抗原和肽制成疫 苗給予發(fā)生上述癌癥的風(fēng)險(xiǎn)較高的人群，可以預(yù)防癌癥的發(fā)生。
[0013] 本發(fā)明人首先使用cDNA微陣列對(duì)胃癌組織和正常組織中的基因組范圍的23, 040 種基因的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果，在20例彌漫性浸潤(rùn)性胃癌患者中有11例鑒定出，與正常胃 粘膜比較、在胃癌組織中以5倍以上（平均13萬(wàn)倍）高表達(dá)的基因一一富含半胱氨酸的酸 性分泌蛋白（Secretedproteinacidicandrichincysteine;SPARC)。（圖 1)SPARC 基因在正常的脂肪組織、乳腺、卵巢、脊髓、睪丸、子宮、胎盤等中可見輕度表達(dá)，與正常胃粘 膜比較，均為5倍以下的低表達(dá)（圖2)。
[0014] SPARC不僅是在彌漫性浸潤(rùn)性胃癌中高表達(dá)，在胰腺癌或黑素瘤中也高表達(dá)，這些 已經(jīng)有其它研究人員的報(bào)道。并且發(fā)明人發(fā)現(xiàn)：在黑素瘤患者的血清中有SPARC分泌，特別 可作為對(duì)黑素瘤早期發(fā)現(xiàn)有用的腫瘤標(biāo)志（日本特愿2004-303688 ;以及Clinical Cancer Research 11: 8079-8088, 2005)〇
[0015] SPARC是含有286個(gè)氨基酸的43 KD酸性分泌蛋白，富含半胱氨酸，在細(xì)胞分裂期 向核轉(zhuǎn)移。SPARC是通過(guò)調(diào)節(jié)胞外基質(zhì)蛋白與細(xì)胞的相互作用，來(lái)參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的蛋白 質(zhì)。在成骨細(xì)胞或血小板、創(chuàng)傷部位等中表達(dá)，由此認(rèn)為可能與組織的修復(fù)和重構(gòu)有關(guān)。還 有報(bào)道稱：在黑素瘤或骨肉瘤等癌癥、以及腫瘤的間質(zhì)細(xì)胞中高表達(dá)，并且SPARC的表達(dá)與 腫瘤的預(yù)后、浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移有關(guān)。
[0016]非專利文獻(xiàn)1 :IkutaY等人·，Clinical Cancer Research 11: 8079-8088， 2005. 專利文獻(xiàn)1 :特愿2004-303688。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0017] 本發(fā)明的要解決的課題在于：在作為彌漫性浸潤(rùn)性胃癌、胰腺癌和黑素瘤等高表 達(dá)SPARC的腫瘤的治療方法實(shí)施的外科療法、化學(xué)療法和放射線療法中，作為對(duì)治療困難 的轉(zhuǎn)移癌或難治性癌的姑息治療方法，開發(fā)通過(guò)增強(qiáng)癌癥患者對(duì)癌的免疫力來(lái)抑制癌的增 殖的免疫療法的方法。即，本發(fā)明要解決的課題在于：鑒定不會(huì)伴有對(duì)癌癥患者有害的情 況、可誘導(dǎo)對(duì)上述癌癥的強(qiáng)的免疫反應(yīng)的、來(lái)自癌癥特異性