Η-5)。根據(jù)這三個氫的化學(xué)位移和耦合常數(shù)可 以推出結(jié)構(gòu)中所存在的苯環(huán)為1，3，6-三取代。在13C-NMR譜中，共給出了 10個碳信號，結(jié)合 DEPT譜和1H-NMR譜得到：1個羰基，1個次甲基SC70.00(d，C-8)，1個連氧甲基SC56.50(q， C-10)，l個甲基SC22.28(q，C-9)。根據(jù)C-l，C-3位化學(xué)位移可以推斷C-l，C-3被羥基取代。 1H-1HCOSY譜圖提示有2個片段的存在:a: -CHCH-;b: -CHCH3-。
[0034] 分析排?(：譜并結(jié)合其氫譜、碳譜數(shù)據(jù)，6!11.40((1，1 = 7.2他，3!1，!1-9)與60 202.02 (8,07)、3〇 70.00((1，(：-8)相關(guān)，3!15.18(9，了 = 7.2!^，1!1，!1-8)與3〇 202.02(8，(：-7)相關(guān)， 表明〇6、〇8通過〇7相連4!13.91(8,3!1，!1-10)與5(： 149.37(8，(：-3)相關(guān)，表明(：-3、(：-10 通過氧相連4!17.56((1，了 = 8.4抱，1!1，!1-2)與5(： 153.79(8，(：-1)、5(： 149.37(8，(：-3)相關(guān)， 5!16.86((1(1，了=1.8,8.4抱，1!1，!1-4)與3(： 149.37(8，(：-3)、3(：125.15((1，(：-5)相關(guān)，進(jìn)一步 說明化合物中的苯環(huán)為為1，3,6_三取代。該化合物與丹皮酚比較，具有相類似的結(jié)構(gòu)，區(qū)別 在于C-8連了一個羥基和甲基。因此最終確定該化合物結(jié)構(gòu)關(guān)
經(jīng)過Scifinder檢索，沒有發(fā)現(xiàn)相關(guān)報道，表明此化合物為新化合物，命名為2-羥基-1-(2-羥基-4-甲氧基苯基）丙烷-1-酮（2_117(11'(?7-1-(2-117(11'(?7-4-11161:11(?7口1161171)口1'(^&11-1-one)。核磁數(shù)據(jù)見表1。
[0035] 表1化合物Frp50的氫譜和碳譜數(shù)據(jù)(MeOH)
[0036]
[0037]實施例3抗真菌活性測定
[0038]石膏樣小孢子菌是一類能夠引起淺層皮膚癬病的絲狀真菌，能夠?qū)е麦w癬、股癬、 甲癬、頭癬等，是臨床常見淺部致病真菌。近些年來藥用植物在治療皮膚病方面的作用備受 關(guān)注，尋求和利用天然藥用植物中的活性成分設(shè)計新型無毒治療皮膚病的藥物是一個重要 的研究方向。最小抑菌濃度(Minimuminhibitoryconcentration,MIC)是衡量抗菌藥物活 性大小的重要指標(biāo)，采用試管藥基法，不僅可以方便地判讀MIC值，而且簡便經(jīng)濟(jì)，容易操 作。
[0039]本實驗參考臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)推薦的《產(chǎn)孢絲狀真菌微量肉湯稀釋法 藥物敏感試驗方案》(M38-A2)研究分離得到的單體化合物的活性。
[0040] 1.試驗單體化合物
[0041]實施例1分離得到的式I化合物。
[0042] 2.試驗菌株
[0043]石膏樣小孢子菌菌株購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院南京皮膚病醫(yī)院。
[0044] 3.試驗儀器
[0045]
[0046] 4 ·試驗試劑
[0047]
[0049] 5.培養(yǎng)基的配制
[0050]在無菌條件下，取新鮮的改良型1640(含L-谷氨酰胺不含碳酸鹽)培養(yǎng)基1000mL， 用濃度為〇. 165mol/L的3-(N-嗎啉基)-丙磺酸緩沖液將培養(yǎng)基pH值調(diào)至7.0，然后用0.22μπι 的微孔濾膜過濾除菌并分裝，4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0051 ] 6.菌懸液的制備
[0052]在無菌條件下，取生長旺盛的石膏樣小孢子菌試管斜面加入無菌生理鹽水，用接 種環(huán)輕輕刮取培養(yǎng)基表面的絲狀培養(yǎng)物，投放到已做無菌處理的研缽中研磨，用血細(xì)胞計 數(shù)板計數(shù)，將菌懸液的濃度用改良1640液體培養(yǎng)基調(diào)整到0.5X103-2X103CFU/mL備用。 [0053] 7.試驗方法
[0054]藥敏板的制備
[0055]分別準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量的單體化合物和灰黃霉素片粉末，加入一定體積的DMS0且 含量少于1%，配制成〇. 8mg/mL的儲備液，然后用改良后的1640液體培養(yǎng)基將儲備液按1:25 稀釋至2倍終濃度，S卩32yg/mL。用移液器分別取200yL已制備好的32g/mL的藥液加入96孔板 每一行的第1孔;第2-11孔分別加入lOOyL改良后的1640液體培養(yǎng)基；用移液器從第1孔取 lOOyL藥液注入第2孔，依次2倍稀釋至第10孔，并將從第10孔取的lOOyL藥液棄除，最終得到 1-10 孔藥液濃度分別為 32yg/mL、16yg/mL、8yg/mL、4yg/mL、2yg/mL、lyg/mL、0.5yg/mL，0 · 25yg/mL、0.125以8/1111^、0.0625以8/1]11^十個梯度濃度;然后1-11孔分別加入10(^1^菌懸液，第11孔 作為生長對照，第12孔加入200yL的改良1640液體培養(yǎng)基作為空白對照;每個樣品設(shè)三個重 復(fù)，每個樣品設(shè)生長對照和空白對照。
[0056]抑菌結(jié)果判定
[0057]將已接種菌懸液的藥敏板置于28(±1)°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7天后取出，單體化 合物對該菌種的MIC值為100%抑制生長的藥物濃度，即肉眼觀察澄清或未見生長。
[0058] 8.結(jié)果
[0059]為了尋找西藏大花黃牡丹根皮乙酸乙酯層中對石膏樣小孢子菌具有抗性的單體 化合物，我們利用從乙酸乙酯層組分分離得到的新單體化合物開展了對石膏樣小孢子菌抗 性試驗，試驗結(jié)果測定得知實施例1分離得到的式I化合物對石膏樣小孢子菌的MIC值為1μ g/mL，與對照品灰黃霉素ΜIC0.5μg/mL相比，說明該化合物對石膏樣小孢子菌有一定的抑 制作用。
【主權(quán)項】
1. 一種新化合物，其特征在于:結(jié)構(gòu)式如式I所示：2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新化合物，其特征在于:所述化合物為無色油狀，分子式 為C1QH12〇4,不飽和度為5。3. 權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 取干燥的西藏大花黃牡丹根皮粉碎后，加入95 %乙醇，室溫浸提24h，重復(fù)抽濾，50°C 減壓濃縮，利用乙酸乙酯進(jìn)萃取，將萃取液在50°C條件下減壓濃縮，得到干粉A; 2) 將干粉A與聚酰胺按質(zhì)量比1:4~5的比例混合，利用體積濃度為20%的甲醇水溶液 洗脫得到組分B; 3) 將組分B用硅膠拌樣，用石油醚和乙酸乙酯體積比為10:1的混合液洗脫，得到組分C; 4) 將組分C進(jìn)行硅膠柱色譜，用石油醚和丙酮體積比為6:1的混合液洗脫，得到組分D; 5) 將組分D繼續(xù)進(jìn)行凝膠柱色譜，用甲醇洗脫，分離純化得到式I單體化合物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟（1)中根皮與95%乙醇的質(zhì)量體 積比為1:10。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于:步驟(2)中干粉A與聚酰胺按質(zhì)量比1: 4.2的比例混合。6. 權(quán)利要求1所述式I化合物作為抗真菌藥物的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新化合物，所述化合物為無色油狀，分子式為C10H12O4，不飽和度為5，其結(jié)構(gòu)式如式為紫外光譜顯示該化合物紫外最大吸收在203nm。本發(fā)明還涉及該化合物的提取分離方法，利用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，并將萃取液分離、純化，得到本發(fā)明單體化合物。該化合物對抗真菌的活性作用，為開發(fā)抗真菌的藥物提供了先導(dǎo)化合物，對開發(fā)天然產(chǎn)物和植物藥的新用途具有重要意義。
【IPC分類】C07C49/84, C07C45/78, C07C45/79, A61P31/10
【公開號】CN105439843
【申請?zhí)枴緾N201510875204
【發(fā)明人】張彥龍, 趙丹丹, 黃悅, 曲宏悅, 江偉, 李建平, 曾偉民
【申請人】黑龍江大學(xué)
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2015年12月2日