使用3-羥基-3-甲基戊二?；?CoA合酶提高遺傳修飾植物的生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量的方法
【專利說(shuō)明】使用3-羥基-3-甲基戊二釀基-CoA合酶提高遺傳修飾植物的 生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量的方法
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用 本申請(qǐng)要求享有2013年6月19日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)61/836,739的優(yōu)先權(quán)，其 以其整體通過(guò)引用并入本文。
[0002] 序列表的并入 大小為14，640字節(jié)(在操作系統(tǒng)MS-Windows中測(cè)量的)并且在2014年4月16日創(chuàng)建的命 名為"56720-130938_SL.txt"的文件中含有的序列表同時(shí)被電子提交(使用United States Patent Office EFS-Web提交系統(tǒng))并且其以其整體通過(guò)引用并入本文。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明一般涉及植物改造領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及以有效提高生長(zhǎng)和/或種子 產(chǎn)量的量過(guò)表達(dá)一種或多種外源3-羥基-3-甲基戊二?；?CoA合酶1 (HMGS1)的遺傳改造 的植物以及提高遺傳修飾的植物的生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量的方法。
[0004] 發(fā)明背景 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中希望改善生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量，因?yàn)樽蚜４硎澄锏闹匾獊?lái)源(Jiao等， Nat. Genet.，42:541-544，2010)。為此目的，必須首先鑒定增加種子產(chǎn)量的關(guān)鍵基因。酶 3-羥基-3-甲基戊二?；?CoA合酶1 (HMGS1)和3-羥基-3-甲基戊二?；?CoA還原酶(HMGR) 參與甲輕戊酸（MVA)途徑（Lynen等，Biochem.Z. 330:269-295，1958; Ferguson Jr.和 Rudney， J. Biol.Chem.234:1072_1075， 1959; Rudney和Ferguson Jr. ， J. Biol.Chem.234:1076-1080, 1959; Lynen, Pure Appl.Chem.14:137-167, 1967; Stewart和Rudney, J. Biol.Chem.241:1222-1225, 1966; Balasubramanlam等， Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:1421-1425，1977)。除了HMGR，HMGS 也是哺乳動(dòng)物以及植物 中膽固醇合成的關(guān)鍵酶(Kimberly等，J. Biol.Chem.273:1349-1356，1998; Alex等， Plant J. 22:415-426，2000; Wang等，Plant Biotechnol.J. 10:31-42，2012)。在植物 中，研究最初聚焦在HMGR上，而后來(lái)才出現(xiàn)對(duì)HMGS的興趣（Bach, Lipids, 21:82-88， 1986; Alex等，Plant J. 22:415-426，2000; Ishiguro等，Plant Cell Physiol.51: 896-911, 2010; Hemmerlin等，Prog·Lipid·Res· 51:95-148，2012)。在芥菜（Brassica juncea)中，四個(gè)基因（BjHMGSl-BjHMGS4)編碼 HMGS(Alex 等，Plant J. 22:415-426， 2000)。對(duì)BjHMGSl的研究揭示了其定位在胞質(zhì)溶膠中并且其重組蛋白質(zhì)在大腸桿菌 (Escherichia coli)中的表達(dá)導(dǎo)致其晶體結(jié)構(gòu)被闡明（Nagegowda等，Biochem.J. 383: 517-527，2004 ; Nagegowda等，Planta 221:844-856，2005 ; Pojer等， Proc .Natl. AcacL Sci .USA 103:11491-11496，2006)。對(duì)擬南芥 hmgs 突變體的分析揭示了 HMGS參與絨氈層發(fā)育并影響花粉粒的育性（Ishiguro等，Plant Cell Physiol. 51:896-911，2010)。近期已經(jīng)研究了野生型和突變體BjHMGSl (H188N、S359A和H188N/S359A)在轉(zhuǎn) 基因擬南芥中的過(guò)表達(dá)，其顯示轉(zhuǎn)基因擬南芥中BjHMGSl過(guò)表達(dá)上調(diào)固醇生物合成中的若 干基因，包括HMGR、SMT2、DWF1、CYP710A1和BR60X2，達(dá)到約11.3-26.8%的增加的固醇含量以 及提高的脅迫耐受性，如灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea)抗性和H2O2耐受性(Wang等， Plant Biotechnol.J. 10:31-42，2012)。然而，相同的研究顯示轉(zhuǎn)基因擬南芥中的 BjHMGSl過(guò)表達(dá)不導(dǎo)致植物生長(zhǎng)的任何明顯表型變化或種子產(chǎn)量的增加。當(dāng)BjHMGSl在擬南 芥中過(guò)表達(dá)時(shí)，僅更快的種子萌發(fā)是明顯的。
[0005] 需要具有提高的生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量(例如增加的莢果大小和種子數(shù)量)的遺傳修 飾植物和用于產(chǎn)生所述遺傳修飾植物的方法。本發(fā)明滿足該需要。
[0006] 發(fā)明概述 本文提供具有提高的生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量的轉(zhuǎn)基因植物。本文中還提供植物部分，包括 但不限于果實(shí)、葉、塊莖、種子、花、莖、根和其他解剖部分，其中表達(dá)HMGS1及其突變衍生物 (H188N、S359A和H188N/S359A)。此外，本文提供提高植物生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量的方法以及篩 選芥菜HMGS1的功能變體的方法。
[0007] 在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了被遺傳改造以相對(duì)于對(duì)照植物有效提高生長(zhǎng)和/或種 子產(chǎn)量的量過(guò)表達(dá)一種或多種外源HMGS1的轉(zhuǎn)基因植物/種子/后代。轉(zhuǎn)基因植物屬于前科 (Solanaceae family)，并且一種或多種外源HMGS1包含與SEQ ID N0:6至少77%相同的氨基 酸序列。
[0008] 在另一實(shí)施方案中，提供了提高植物生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量的方法。該方法包括遺傳 改造植物以相對(duì)于對(duì)照植物有效提高生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量的量過(guò)表達(dá)一種或多種外源 HMGS1。一種或多種外源HMGS1包含與SEQIDN0:6至少77%相同的氨基酸序列。
[0009] 在又一實(shí)施方案中，提供了篩選包含SEQ ID N0: 6中闡明的氨基酸序列的芥菜 HMGS1的功能變體的方法。該方法包括獲得被遺傳修飾以表達(dá)候選變體的植物細(xì)胞;從所述 植物細(xì)胞再生植物;和確定所述植物是否展示生長(zhǎng)和/或種子產(chǎn)量增加，由此確定所述候選 變體是否是芥菜HMGS1的功能等同物的步驟。
[0010] 附圖簡(jiǎn)述 圖1顯示了BjHMGSl轉(zhuǎn)化構(gòu)建體和對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草植物的所得聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分 析。圖（a)顯示了表明引物位置的轉(zhuǎn)化載體的概略圖。BjHMGSl野生型和突變體插入片段來(lái) 源于質(zhì)粒pBjl32 (H188N/S359A)、pBjl34 (wtBjHMGSl)、pBjl36 (S359A)和pBjl37 (Η188Ν)<ΧαΜν353:花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子;NOSpro:胭脂堿合酶(N0S)啟動(dòng)子;NOSter: N0S終止子;NPTII:編碼針對(duì)卡那霉素的抗性的新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶II基因；RB:T-DNA的右邊 界;LB: T-DNA的左邊界。35S: 35S啟動(dòng)子3 ' -端正向引物;ML264: BjHMGSl-特異的3 '-端反向 引物。圖（b)顯示了瓊脂糖凝膠分析，使用引物對(duì)35S/ML264根據(jù)PCR闡明了來(lái)自轉(zhuǎn)基因煙草 的預(yù)期1.65-kb BjHMGSl cDNA條帶;在本文中顯示了代表性株系。0E-wtBjHMGSl (泳道1-3);0E-H188N (泳道4-6);0E-S359A (泳道7-9);0E-H188N/S359A (泳道 10-12);陽(yáng)性PCR對(duì) 照(泳道13, PCR模板為質(zhì)粒pBjl34);空白（泳道14，PCR反應(yīng)中沒(méi)有DNA)。
[0011]圖2顯示了代表性轉(zhuǎn)基因煙草HMGS-OEs的分子分析。圖（a)顯示了使用針對(duì) B jHMGSl的抗體來(lái)驗(yàn)證代表性載體轉(zhuǎn)化對(duì)照（pSal3)和HMGS-OEs (0E-wtB jHMGSl、0E-H188N、0E-S359A和0E-H188N/S359A)中BjHMGSl (52.4-kDa)表達(dá)的Western印跡分析和總 蛋白質(zhì)的相應(yīng)考馬斯亮藍(lán)染色的凝膠(20 yg/孔）。每個(gè)構(gòu)建體測(cè)試了三個(gè)獨(dú)立的株系。圖 (b)顯示了代表性載體轉(zhuǎn)化對(duì)照（pSal3)和HMGS-OEs中BjHMGS 1和內(nèi)源HMGR mRNAs的 Northern印跡分析。箭頭指示預(yù)期的1.7-kb BjHMGSl條帶和2.5-kb煙草HMGR條帶。底部凝 膠顯示每條泳道裝載的rRNA。顯示了每個(gè)構(gòu)建體的兩個(gè)獨(dú)立的株系。
[0012] 圖3顯示了煙草HMGS-0E葉片和幼苗中的固醇含量。顯示了在培養(yǎng)皿上生長(zhǎng)的20天 齡幼苗的和在土壤中生長(zhǎng)的60天齡盆栽植物的葉的固醇含量，包括菜油固醇、豆固醇、谷固 醇和總固醇。值為均值土 SD (n = 5) ;H，高于載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照;通過(guò)Student t-檢驗(yàn)，*，P 〈0.05;林，P〈 0.0UDW:干重；S:幼苗；L:葉。條(Bars)代表SD。
[0013] 圖4顯示了煙草HMGS-0E幼苗與載體(pSal3)轉(zhuǎn)化的對(duì)照之間根長(zhǎng)和干重的比較。 圖（a)顯示了萌發(fā)后14天的幼苗。比例尺(Bar)，lcm。圖（b)顯示了 14天齡幼苗的干重，提示 煙草HMGS-OEs比載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照具有更高的質(zhì)量。值為均值土 SD (n=30);條是SD;#，P〈 0.01。圖（c)顯示了 14天齡幼苗的根長(zhǎng)測(cè)量，提示煙草HMGS-0E根比載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照生長(zhǎng)得 更快。值為均值土 SD (n=30);條是SD;#，P〈 0.0UpSal3,載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照;0E植物是標(biāo) 記的財(cái)-8]_腿651、!118815359厶和!1188~/5359八。
[0014]圖5顯示了煙草HMGS-OEs與載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照之間生長(zhǎng)的比較。圖（a)顯示了萌發(fā)后 80天拍照的代表性溫室生長(zhǎng)植物。比例尺=10 cm。圖（b)顯示了萌發(fā)后136天拍照的代表 性溫室生長(zhǎng)植物。比例尺=10 cm。圖（c)顯示了兩個(gè)不同生長(zhǎng)階段80天和136天時(shí)轉(zhuǎn)基因 植物高度的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。值為均值土 SD (n=30);條是SD;H，高于對(duì)照;通過(guò)Student t-檢 驗(yàn)，#，P〈 0.01 DpSan，載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照；0E植物是標(biāo)記的wt-BjHMGSl、H188N、S359A和 H188N/S359A。
[0015] 圖6顯示了溫室生長(zhǎng)的HMGS-0E與在溫室中生長(zhǎng)的載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照之間植物生長(zhǎng) 的比較。圖（a)顯示了萌發(fā)后98天拍照的代表性植物，其中HMGS-0E煙草植物和載體轉(zhuǎn)化的 對(duì)照在生長(zhǎng)上具有差異。比例尺=10 cm。圖（b)顯示了萌發(fā)后98天拍照的代表性煙草葉， 其中HMGS-0E煙草植物和載體轉(zhuǎn)化的植物在生長(zhǎng)上具有差異。比例尺=10 cm。圖（c)顯示 了對(duì)98天齡轉(zhuǎn)基因植物高度的分析。圖（d)顯示了對(duì)98天齡轉(zhuǎn)基因植物的底部四片葉的鮮 重的分析。圖（e)顯示了對(duì)98天齡轉(zhuǎn)基因植物的底部四片葉的長(zhǎng)度的分析。圖（f)顯示了對(duì) 98天齡轉(zhuǎn)基因植物的底部四片葉的寬度的分析。值為均值± SD (n=6);條是SD;通過(guò) Student t-檢驗(yàn)，**，P〈0.01;*，P〈 0.05;**和*顯著高于對(duì)照。載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照標(biāo)記為 "pSal3"，wt-BjHMGSl植物的三個(gè)獨(dú)立株系被標(biāo)記為"401"、"402"和"404"，而S359A植物的 三個(gè)獨(dú)立株系被標(biāo)記為"602"、"603"和"606"。
[0016] 圖7顯示了具有增加的種子產(chǎn)量的煙草HMGS-OEs。圖（a)顯示了煙草莢果的表型。 pSal3:載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照；"401"和"402" ：wt-BjHMGSl的兩個(gè)獨(dú)立株系；"603"和"604" ：S359A 的兩個(gè)獨(dú)立株系。比例尺=1 cm。圖（b)顯示了 30個(gè)煙草莢果的總干重。圖（c)顯示了每個(gè)莢 果的平均干重。圖（d)顯示了 30個(gè)莢果的種子總干重。圖（e)顯示了對(duì)照與煙草HMGS-OEs之 間100粒種子的干重的比較。對(duì)每個(gè)株系測(cè)量30次重復(fù)。結(jié)果是每一株系30次重復(fù)每100粒 煙草種子的平均干重。圖（f)顯示了 30個(gè)莢果里的總種子數(shù)量。圖（g)顯示了每個(gè)莢果的平 均種子數(shù)量。值為均值土 SD，n = 30;通過(guò)Student t-檢驗(yàn)，#，P〈 0.01;*，P〈0.05。
[0017] 圖8顯示了通過(guò)qRT-PCR的20天齡載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照(pSal3)煙草幼苗中HMGS下游基 因的表達(dá)。研究了 wt-BjHMGSl煙草幼苗的三個(gè)獨(dú)立株系(401、402和404)和33594煙草幼苗 的三個(gè)獨(dú)立株系（602、603和606)。從載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照化5&13)、￥卜8犯]\?^1(401、402和 404)和S359A(602、603和606)的20天齡煙草幼苗提取總RNA。!!:值高于對(duì)照（P〈0.05);L:值 低于對(duì)照(Ρ〈〇·〇5)。值為均值土 SD (n=3)。分析了煙草(Nicotiana tabacum)3_羥基-3-甲 基戊二?；?CoA還原酶（NtHMGRl和NtHMGR2)、異戊烯基-二磷酸δ-異構(gòu)酶（NtIPIl和 NtIPI2)、法呢基二磷酸合酶(NtFPPS)、角鯊烯合酶(NtSQS)、櫳牛兒基櫳牛兒焦磷酸合酶 (NtGGPPSl)、固醇甲基轉(zhuǎn)移酶(NtSMTl-2、NtSMT2-l和NtSMT2-2)和細(xì)胞色素 P450單加氧酶 (NtCYP85Al)〇
[0018] 圖9顯示了完全開放的載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照(pSal3)煙草花中HMGS下游基因的表達(dá)。通 過(guò)qRT-PCR研究了 wt-BjHMGSl煙草花的三個(gè)獨(dú)立株系（401、402和404)和3359六煙草花的三 個(gè)獨(dú)立株系（602、603和606)。從載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照（？3&13)、￥丨-8」圓631(401、402和404)和 S359A(602、603和606)的3周齡煙草幼苗提取總RNA。!!:值高于對(duì)照(P〈0.05);L:值低于對(duì)照 (卩〈0.05)。值為均值±30(11=3)。
[0019] 圖10顯示了用于番茄轉(zhuǎn)化的BjHMGSl構(gòu)建體和對(duì)所得轉(zhuǎn)基因番茄株系的PCR分析。 圖（a)顯示了表明引物位置的轉(zhuǎn)化載體的概略圖。BjHMGSl野生型和突變體插入片段分別來(lái) 源于pBjl34 (wtBjHMGSl)和pBjl36 (S359A)(Wang等，PlantBiotechnol J 10:31-42， 2012)<XaMV35S:花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子;NOSpro:胭脂堿合酶(NOS)啟動(dòng)子;NOSter: N0S終止子;NPTII:編碼賦予卡那霉素的抗性的新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶II的基因；RB:T-DNA的右 邊界;LB: T-DNA的左邊界。35S: 35S啟動(dòng)子3 ' -端正向引物;ML860: B jHMGSl-特異的3 ' -端反 向引物。圖（b)顯示了瓊脂糖凝膠分析，使用引物對(duì)35S/ML860根據(jù)PCR闡明了來(lái)自野生型 BjHMGSl轉(zhuǎn)基因番茄的預(yù)期1.4-kb BjHMGSl cDNA條帶（箭指向的）。泳道1，1 kb標(biāo)志物;泳 道2，陽(yáng)性對(duì)照（pB j 134的質(zhì)粒）；泳道3，陰性對(duì)照（載體pSa 13的質(zhì)粒）；泳道4，pB j 134-1 (401);泳道5,pBj 134-3 (403);泳道6,pBj 134-5 (405);泳道7,pBj 134-6 (406);泳道8， pBjl34-21 (421);泳道9，pBjl34-23 (423);泳道 10，pBjl34-30 (430);泳道ll，pBjl34-42 (442);泳道 12，pBjl34-45 (445)。質(zhì)粒pBjl34是pSal3衍生物，其含有35S::野生型BjHMGSl (wtBjHMGSl)融合物(Wang等，Plant Biotechnol.J. 10:31-42，2012)。圖（c)顯不了瓊脂 糖凝膠分析，使用引物對(duì)35S/ML860根據(jù)PCR闡明了來(lái)自突變體B jHMGSl (S359A)轉(zhuǎn)基因番茄 的預(yù)期1.4-kb BjHMGSl cDNA條帶（箭指向的）。泳道1，1 kb標(biāo)志物；泳道2,陽(yáng)性對(duì)照 (pB j 134的質(zhì)粒）；泳道3，陰性對(duì)照（載體pSal 3的質(zhì)粒）；泳道4，pB j 136-5 (605);泳道5， pBjl36-7 (607);泳道6，pBjl36-8 (608);泳道7，pBjl36-12 (612);泳道8，pBjl36-13 (613);泳道9，pBjl36-14 (614);泳道 10，pBjl36-15 (615);泳道ll，pBjl36-22 (622);泳 道 12，pBjl36-25 (625)。質(zhì)粒pBjl36是pSal3衍生物，其含有35S::突變體BjHMGSl(S359A) 融合物（Wang等，Plant Biotechnol.J. 10:31-42，2012)。
[0020] 圖11顯示了代表性轉(zhuǎn)基因番茄HMGS-OEs的分子分析。圖（a)顯示了使用針對(duì) BjHMGSl的抗體來(lái)驗(yàn)證代表性載體(pSal3)轉(zhuǎn)化的對(duì)照和野生型HMGS-OEs (0E-wtBjHMGSl) 中BjHMGSl (52.4-kDa)表達(dá)的Western印跡分析和裝載在12% SDS-PAGE凝膠中的總蛋白質(zhì) 的相應(yīng)考馬斯亮藍(lán)染色的凝膠(20 yg/孔）。在陽(yáng)性對(duì)照和交叉反應(yīng)的番茄株系中顯示了交 叉反應(yīng)的52.4-kDa BjHMGSl條帶（箭頭指向的）。泳道1，陽(yáng)性對(duì)照（煙草BjHMGSl 0E株系 "402"）；泳道 2，載體（pSa 13)-轉(zhuǎn)化的對(duì)照；泳道 3，pB j 134-6 (406);泳道 4，pB j 134-10 (410);泳道5，pBjl34-13 (413);泳道6，pBjl34-14 (414);泳道7，pBjl34-15 (415);泳道 8，pBjl34-27 (427);泳道9，pBjl34-28 (428);泳道 10，pBjl34-30 (430);泳道ll，pBjl34-39 (439);泳道 12，pBjl34-42 (442);泳道 13，pBjl34-44 (444);泳道 14，pBjl34-45 (445)。在用于進(jìn)一步測(cè)試中的ΟΕ-wtBjHMGSl植物"430"和"445"（泳道10和14)的兩個(gè)獨(dú)立 株系下面劃線。質(zhì)粒pBj 134是pSal3衍生物，其含有35S::野生型BjHMGSl (wtBjHMGSl)融合 物(Wang等，Plant Biotechnol.J. 10:31-42，2012)。圖（b)顯示了使用針對(duì)BjHMGSl的抗 體來(lái)驗(yàn)證代表性載體（pSal3)轉(zhuǎn)化的對(duì)照和突變體HMGS-OEs (0E-S359A)中BjHMGSl (52.4-kDa)表達(dá)的Western印跡分析和裝載在12% SDS-PAGE凝膠中的總蛋白質(zhì)的相應(yīng)考馬 斯亮藍(lán)染色的凝膠（20 yg/孔）。在陽(yáng)性對(duì)照和交叉反應(yīng)的番茄株系中顯示了交叉反應(yīng)的 52.4-kDa BjHMGSl條帶（箭頭指向的）。泳道1，陽(yáng)性對(duì)照(煙草BjHMGSl 0E株系"402"）；泳 道2,載體(pSal3)轉(zhuǎn)化的對(duì)照；泳道3，pBjl36-5 (605);泳道4，pBjl36-13 (613);泳道5， pBjl36-15 (615);泳道6，pBjl36-19 (619);泳道7，pBjl36-20 (620);泳道8，pBjl36-22 (622);泳道9，pBjl36-23 (623);泳道 10，pBjl36-24 (624);泳道ll，pBjl36-25 (625);泳 道12，pBjl36-31 (631);泳道13，pBjl36-35 (635)。在用于進(jìn)一步測(cè)試中的0E-S359A 植物 "622"和"625"（泳道8和11)的兩個(gè)獨(dú)立株系下面劃線。質(zhì)粒pBj 136是pSal3衍生物，其含有 35S::突變體 BjHMGSl(S359A)融合物（Wang 等，Plant Biotechnol.J. 10:31-42，2012)。 [0021]圖12顯示了代表性轉(zhuǎn)基因番前植物的Southern印跡分析。圖（a)顯示了表明 EcoRI (E)位點(diǎn)的轉(zhuǎn)化載體的概略圖。BjHMGSl野生型和突變體插入片段來(lái)源于質(zhì)粒 pBjl34 (wtBjHMGSl)和pBjl36 (S359A)<XaMV35S:花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子;NOSpro:胭 脂堿合酶(N0S)啟動(dòng)子;NOSter:N0S終止子;NPTII:編碼賦予卡那霉素的抗性的新霉素磷酸 轉(zhuǎn)移酶Π 的基因；RB: T-DNA的右邊界;LB: T-DNA的左邊界。虛線表示載體上核苷酸的位置。 圖（b)顯示了在代表性印跡中通過(guò)限制性內(nèi)切核酸酶EcoRI消化的并利用地高辛標(biāo)記的 BjHMGSl全長(zhǎng)cDNA探測(cè)的基因組DNA的Southern印跡分析。預(yù)期雜交條帶比4.8 kb長(zhǎng)(參見 圖（a)中的圖）。泳道 l，pBjl34-30 (430);泳道 2，pBjl36-15 (615);泳道 3，pBjl36-17 (617);泳道4，pB j 136-19 (619);泳道5，pB j 136-25 (625);泳道6，載體(pSa 13)-轉(zhuǎn)化的對(duì) 照；泳道7，pBjl36-15 (615);泳道8，pBjl36-17 (617);泳道9，pBjl36-19 (619);泳道 10， pBjl36-21 (621);泳道ll，pBjl36-23 (623);泳道 12，pBjl36-28 (628);泳道 13，pBjl36-35 (635);泳道 14，pBjl36-13 (613);泳道 15,載體(pSal3)_ 轉(zhuǎn)化的對(duì)照；泳道 16，pBjl34