氯甲 烷和氯仿是經(jīng)過氫化鈣回流干燥得到。乙酸乙酯，石油醚，正己烷，N，N-二甲基乙酰胺和N，N-二甲基甲酰胺是經(jīng)無水硫酸鈉事先干燥使用。
[0086] 以下反應(yīng)一般是在氮?dú)饣驓鍤庹龎合禄蛟跓o水溶劑上套一干燥管（除非其他方 面表明），反應(yīng)瓶都塞上合適的橡皮塞，底物通過注射器打入。玻璃器皿都是干燥過的。
[0087] 色譜柱是使用硅膠柱。硅膠（300-400目）購于青島海洋化工廠。核磁共振光 譜以⑶Cl3,d6-DMS0,ra30D或d6-丙酮為溶劑（報(bào)導(dǎo)以ppm為單位），用TMS(Oppm)或氯 仿（7.25ppm)作為參照標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)出現(xiàn)多重峰的時(shí)候，將使用下面的縮寫：S(Singlet，單 峰），d(doublet，雙峰），t(triplet，三重峰），m(multiplet，多重峰），br(broadened，寬 峰），dd(doubletofdoublets，四重峰），dt(doubletoftriplets，雙三重峰）。偶合常 數(shù)，用赫茲（Hz)表示。
[0088] 低分辨率質(zhì)譜（MS)數(shù)據(jù)通過配備G1312A二元栗和aG1316ATCC(柱溫保持在 30°C)的Agilent6320系列LC-MS的光譜儀來測定的，G1329A自動(dòng)采樣器和G1315BDAD 檢測器應(yīng)用于分析，ESI源應(yīng)用于LC-MS光譜儀。
[0089] 低分辨率質(zhì)譜（MS)數(shù)據(jù)通過配備G1311A四元栗和G1316ATCC(柱溫保持在 30°C)的Agilent6120系列LC-MS的光譜儀來測定的，G1329A自動(dòng)采樣器和G131?DAD 檢測器應(yīng)用于分析，ESI源應(yīng)用于LC-MS光譜儀。
[0090] 以上兩種光譜儀都配備了AgilentZorbaxSB-C18柱，規(guī)格為2. 1X30_，5μm。 注射體積是通過樣品濃度來確定；流速為〇· 6mL/min;HPLC的峰值是通過在210nm和254nm 處的UV-Vis波長來記錄讀取的。流動(dòng)相為0. 1%的甲酸乙腈溶液（相A)和0. 1%的甲酸 超純水溶液（相B)。梯度洗脫條件如表1所示：
[0091]表1
[0092]
[0093] 化合物純化是通過Agilent1100系列高效液相色譜（HPLC)來評(píng)價(jià)的，其中UV檢 測在 210nm和 254nm處，ZorbaxSB-C18 柱，規(guī)格為 2. 1X30_，4μm，10 分鐘，流速為 0· 6mL/ min，5-95%的（0. 1%甲酸乙腈溶液）的（0. 1%甲酸水溶液），柱溫保持在40°C。
[0094] 下面簡寫詞的使用貫穿本發(fā)明：
[0095]Me0H，CH30H甲醇
[0096]CH2C12，DCM 二氯甲烷
[0097] THF四氫呋喃
[0098] DMFN，N-二甲基甲酰胺
[0099] DMS0 二甲基亞砜
[0100] TBSC1 叔丁基二甲基氯硅烷
[0101] 合成方案
[0102] 中間體8
[0104] 本發(fā)明化合物8可以通過下列合成方法得到：化合物1通過TBSC1保護(hù)得到化合 物2,化合物2與乙基3-溴-2-氧代-丙酸乙酯反應(yīng)成環(huán)得到化合物3,化合物3脫保護(hù)得 到化合物4,在堿性條件下，通過與芐基溴反應(yīng)得到化合物5,然后再堿性條件下水解得到 化合物6,化合物6與氨基硫脲反應(yīng)得到化合物7,然后通過三溴化硼反應(yīng)得到化合物8。
[0105] 中間體11
[0107] 本發(fā)明化合物11可以通過下列合成方法得到：化合物9與二硫化碳反應(yīng)得到化合 物10,化合物10與苯基（5-(叔丁基）異唑-3-基）氨基甲酸酯在堿性條件下反應(yīng)得到化 合物11。
[0108] 中間體14
[0109] 本發(fā)明化合物14可以通過下列合成方法得到：化合物12與3-(4-嗎啉）-1_丙醇 反應(yīng)得到化合物13,化合物13與三氯氧磷反應(yīng)，經(jīng)水淬滅后得到化合物14。
[0113] 本發(fā)明化合物4a可以通過下列合成方法得到：化合物la與化合物2a在堿性條件 下反應(yīng)得到化合物3a，化合物3a與R(CH2)n-Cl反應(yīng)得到化合物4a。其中，E1、E2、E3、E4、E、 G、η和R具有如本發(fā)明所述的含義。
[0114] 合成方案2
[0116] 本發(fā)明化合物4a可以通過下列合成方法得到：化合物5a與化合物6a在堿性條件 下反應(yīng)得到化合物4a。其中，E1、E2、E3、E4、E、G、η和R具有如本發(fā)明所述的含義。
[0117] 下面的實(shí)施例可以對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，然而，這些實(shí)施例不應(yīng)作為對本發(fā) 明的范圍的限制。
[0118] 實(shí)施例
[0119] 實(shí)施例1 :
[0120] 1-(5-(叔丁基）異惡唑-3-基）-3_ (5-(7-(2-嗎啉代乙氧基）苯并[d]咪唑并 [2,Ι-b]噻唑-2-基）-1，3, 4-噻二唑-2-基）脲
[0122] 步驟1)6-((叔丁基二甲基甲硅烷基）氧基）苯并[d]噻唑-2-胺
[0123]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將2-氨基苯并[d]噻唑-6-醇（3. 0g, 18.Ommol)溶于DMF(25mL)， 依次加入咪挫（2.5g,36.Ommol)和TBSC1 (3.3g,21. 7mmol)，混合溶液于室溫下攪拌反應(yīng)過 夜，減壓濃縮，加水（100mL)淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯（500mL)萃取，有機(jī)相用水（150mL)洗，飽 和氯化鈉溶液（l〇〇mL)洗，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，柱層析分離（V(乙酸乙酯）/V(石油 醚）=1/2)，得到白色固體4. 5g，收率89%。
[0124] MS-ESI: (ESI,pos. ion)m/z：281. 1[M+1] +
[0125] 步驟2)乙基7-((叔丁基二甲基甲硅烷基）氧基）苯并[d]咪唑并[2, 1-b]噻 唑-2-羧酸酯
[0126] 在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將6_((叔丁基二甲基甲硅烷基）氧基）苯并[d]噻唑-2-胺 (5.6g,20.Ommol)溶于THF(40mL)，滴加乙基3-溴 _2_ 氧代-丙酸乙酯（3.OmL, 24mmol)，溶 液于室溫下反應(yīng)過夜，然后加無水乙醇（20mL)，加熱回流反應(yīng)6小時(shí)，減壓濃縮，直接柱層 析分離（V(乙酸乙酯）/V(石油醚）=1/2)，得到白色固體6.3g，收率84%。
[0127] MS-ESI: (ESI,pos. ion)m/z：377. 2[M+1] +
[0128] 步驟3)乙基7-羥基苯并[d]咪唑并[2, 1-b]噻唑-2-羧酸酯
[0129] 將乙基7-((叔丁基二甲基甲硅烷基）氧基）苯并[d]咪唑并[2,Ι-b]噻唑-2-羧 酸酯（4.7g，12. 48mmol)溶于THF(20mL)，冷卻到0度，滴加四正丁基氟化銨THF溶液（lmol/ L，20mL)，緩慢恢復(fù)到室溫?cái)嚢璺磻?yīng)30分鐘，TLC監(jiān)測反應(yīng)已經(jīng)完全，加飽和氯化銨水溶液 (50mL)淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯（400mL)萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮并且充分干燥后直接 用于下一步反應(yīng)，得到產(chǎn)物2.8g，收率86 %。
[0130] MS-ESI: (ESI,pos. ion)m/z :263.0[M+l] +
[0131] 步驟4)乙基7_(芐氧基）苯并[d]咪唑并[2, 1-b]噻唑-2-羧酸酯
[0132] 將乙基7-羥基苯并[d]咪唑并[2,Ι-b]噻唑-2-羧酸酯（2.15g，8.2mmol)溶于 DMF(30mL)，依次加入碳酸鉀（5. 7g，41.2mmol)和芐基溴（2.OmL, 16.8mmol)，溶液加熱到45 度攪拌反應(yīng)2小時(shí)，加飽和氯化鈉水溶液（100mL)淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯（500mL)萃取，有機(jī) 相水（100mL)洗，飽和氯化鈉水溶液（100mL)洗，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，柱層析分離 (V(乙酸乙酯）/V(石油醚）=1/2)，得到白色固體2. 5g，收率90%。
[0133] MS-ESI: (ESI,pos. ion)m/z：353. 1[M+1] +
[0134] 步驟5) 7-(芐氧基）苯并[d]咪唑并[2, 1-b]噻唑-2-羧酸
[0135] 將乙基7-(芐氧基）苯并[d]咪唑并[2,Ι-b]噻唑-2-羧酸酯（2. 5g，7. 09mmol) 溶于乙醇和水的混合溶劑（1/1，50mL)，加入氫氧化鈉（0. 4g,lOmmol)，溶液加熱回流反應(yīng)1 小時(shí)后，TLC監(jiān)測反應(yīng)已經(jīng)完全，減壓濃縮，再加水（50mL)稀釋，滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的PH =2,乙酸乙酯（500mL)萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮并且充分干燥后直接用于下一步 反應(yīng)，得到產(chǎn)物2. 07g，產(chǎn)率90 %。
[0136]MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z：325. 1[M+1] +
[0137] 步驟6)5-(7-(芐氧基）苯并[d]咪唑并[2, 1-b]噻唑-2-基）-1, 3, 4-噻二 唑-2-胺
[0138] 將7-(芐氧基）苯并[d]咪唑并[2,Ι-b]噻唑-2-羧酸（880mg，2. 7mmol)和氨基 硫脲（371mg，4. 07mmol)加入到燒瓶中，滴加1,4-二氧六環(huán)（50mL)和三氯氧磷（10mL)，溶 液加熱回流反應(yīng)2小時(shí)后，冰水浴冷卻，滴加冰水（20mL)淬滅，然后再加熱回流反應(yīng)2小 時(shí)，冰水浴冷卻，滴加氫氧化鈉溶液（lmol/L，50mL)調(diào)節(jié)溶液的PH= 10,乙酸乙酯（500mL) 萃取，有機(jī)相水（100mL)洗，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，柱層析分離（V(MeOH)/V(DCM)= 1/10)，得到油狀物800mg，收率77. 7%。
[0139]MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z：380. 1[M+1] +
[0140] 步驟7) 2-(5-氨基-1，3, 4-噻二唑-2-基）苯并[d]咪唑并[2, 1-b]噻唑-7-醇
[0141] 將5-(7-(芐氧基）苯并[d]咪唑并[2,Ι-b]噻唑-2-基）-1，3,4_噻二唑-2-胺 (800mg, 2.lmmol)溶于無水二氯甲燒（40mL)，冷卻到0度，滴加三溴化硼（10mL)，緩慢恢復(fù) 到室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5小時(shí)，加甲醇（50mL)淬滅反應(yīng)，減壓濃縮并且充分干燥后直接用于下一 步反應(yīng)，得到產(chǎn)物490mg，產(chǎn)率80 %。
[0142]MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z:290.0[M+l] +
[0143] 步驟8) 1-(5-(叔丁基）異惡唑-3-基）-3-(5-(7-羥基苯并[d]咪唑并[2, 1-b] 噻唑-2-基）-1，3, 4-噻二唑-2-基）脲
[0144] 將2- (5-氨基-1，3, 4-噻二唑-2-基）苯并[d]咪唑并[2,Ι-b]噻唑-7-醇 (490mg, 1. 70mmol)和苯基（5_(叔丁基）異唑-3-基）氨基甲酸酯（1. 05g, 4.lmmol)溶于 無水乙腈（20mL)，滴加三乙胺（2.OmL)，溶液加熱回流反應(yīng)過夜，減壓濃縮，直接柱層析分 離以〇^0!1)/￥(001)=1/10)，得到油狀物 54211^，收率70%。
[0145]MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z：456. 1[M+1] +
[0146] 步驟9) 1-(5-(叔丁基）異惡唑-3-基）-3-(5-(7-(2-嗎啉代乙氧基）苯并[d] 咪唑并[2, 1-b]噻唑-2-基）-1，3, 4-噻二唑-2-基）脲
[0147] 將1-(5-(叔丁基）異惡唑-3-基）-3-(5-(7-羥基苯并[d]咪唑并[2,1-b] 噻唑-2-基）-1，3, 4-噻二唑-2-基）脲（542mg，1.2mmol)和4-(2-氯乙基）嗎啉 (450mg, 3.Ommol)溶于DMF(20mL)，加入碳酸鉀（690mg, 5.Ommol)，溶液加熱到45度攪拌反 應(yīng)2小時(shí)，減壓濃縮，直接柱層析分離（V(MeOH)/V(DCM) = 1/10)，得到白色固體478mg，收 率70%。
[0148]MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z：569. 2[M+1] +
[0149] 4NMR(400MHz,CD30D)δ8· 58 (d,J= 9. 1Hz, 1H)，7· 80 (dd,J=