，2H),2.60-2.57(m，2H)，1.46(s，9H).13CNMR(100MHz，CDC13)S169.8,161.5， 156.4.144.0. 141.2.136.9.135.6.134.3.134.1.133.5.131.7.130.2.129.1.128.1， 127.60.127.0. 125.3.120.9.119.8.118.6.110.4.82.0.67.0.47.2.40.6.40.1.36.5， 35.8,28.0;MS(ESI)calcd for C39H39BF2N4Na〇4S+(M+Na)+731 found 731.
[0071]g.化合物1的制備：
[0072] 將中間體I-6 (0.50g，1mmo1)溶于1OmL二氯甲烷中，冰浴下加入（1OmL，9Ommo1)三 氟乙酸，室溫反應(yīng)2h，加水(30mL)，二氯甲燒萃取(20mLX3)，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮， 硅膠柱層析分離提純（體積比二氯甲烷：甲醇：乙酸= 70:1:0.1)得紅色固體0.32g，收率 77% ;m.p.82.1-82.9°C。
[0073] ΧΗNMR(400MHz,CDCl3)57.75(d,J= 8.0Hz,2H),7.58(d,J= 8.0Hz,2H),7.53-7.33 (m,9H),7.31-7.27(m,2H),6.97-6.96(m,lH),6.82(m,lH),6.43(m,lH),6.27-6.26(m,lH), 4.35(d,J= 8.0Hz,2H),4.19(t,J= 8.0Hz,lH),3.75-3.71(m,2H),3.35-3.34(m,2H),2.77-2.74(m，4H);13C匪R(100MHz，CDC13)S176.11，161.91，143.98，141.30，136.85，134.07， 133.10,130.25,129.39,128.36,127.66,127.07,125.14,123.51,119.93,110.87,66.82, 47.23,40.16,36.88,34.21，20.55;MS(ESI)calcdforC35H3iBF2N4Na〇4S+(M+Na)+675found 675.
[0074] 各步驟投料比為以下摩爾比：
[0075] a.吡咯:苯甲醛:三氟乙酸TFA= 25:1:0.1;
[0076] b·中間體 1-1:氯代丁二酰亞胺NCS: 2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌DDQ= 1:2 · 2: 1.2；
[0077]c.中間體1-2:三乙胺:三氟化硼乙醚= 1:2.2:4.2;
[0078]d.中間體1-3 :Fmoc保護(hù)的氨基乙硫醇:三乙胺=1:1.2:1.2;
[0079]e.中間體Ι-4:β_丙氨酸叔丁醇酯=1:5;
[0080]f.中間體I-5:Fmoc-〇su:三乙胺= 1:1.2:7.2;
[0081 ]g.中間體1-6:三氟乙酸= 1:90。
[0082]化合物1的合成在室溫18_30°C進(jìn)行(優(yōu)選25°C)。
[0083] 實(shí)施例1
[0084]制備化合物2步驟為：
[0085] (1)將制備化合物1過(guò)程中的中間體1-3( 100mg，0.30mmol)溶于30mL乙腈中，加入 三乙胺(0.2mL，1.44mmo1)，N-乙?；腚装?32yL，0.30mmo1)溶于10mL乙腈中，將此溶液緩 慢加入反應(yīng)體系中，室溫?cái)嚢鑜h，加水（50mL)，二氯甲烷萃?。?0mLX3次），無(wú)水硫酸鎂干 燥，過(guò)濾，濃縮，硅膠柱層析分離提純(體積比二氯甲烷：甲醇= 30:1)得紅色固體105mg，收 率為84 % 肩·p· 208 · 8-209 · 6°C。
[0086] 4 匪R(400MHz，CDC13)S7.56-7 ·45(ι?，5H)，6.91((1,J= 4.5Hz，lH)，6.73((1,J= 4.5Hz,lH),6.70(d,J= 4.0Hz,lH),6.36(d,J= 4.0Hz,lH),6.19(s,lH),3.58(q,J= 6.3Hz, 2H)，3.27(t，J= 6.4Hz，2H)，1.95(s，3H).13C匪R(100MHz，CDC13)S170.7，159.8，140.6， 136.5,133.2,132.9,132.4,130.4,130.3,128.6,128.5,119.4,117.1,39.27,32.96， 23.10;MS(ESI)calcdforCi9Hi7BClF2N3Na0S+(M+Na)+422found422.
[0087] (2)將中間體1-8(5〇11^，0.12111111〇1)溶于2〇11^乙腈中，加入.甲基-|3-丙氨酰胺 (25mg，0.18mmol)，N_甲基-β-丙氨酰胺也可稱為N-甲基-3_氨基丙酰胺，室溫反應(yīng)12h，加水 (20mL)，二氯甲烷萃取(20mLX3次），無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮，硅膠柱層析分離提純(體 積比二氯甲烷：甲醇=20:1)得紅色固體45mg，收率為78 %肩.p. 104.8-105.4°C。
[0088] 1H匪R(400MHz，CDC13)S7.53-7 ·39(ι?，5H)，6.89((1,J= 5.0Hz，lH)，6.75(s，lH)， 6.58(s，lH),6.45-6.38(m，2H)，6.31(d，J=5.0Hz，lH)，5.78(s，lH),3.80-3.75(m，2H)， 3.47-3.43(m,2H) ,3.06-3.03(m,2H),2.80(d,J= 4.8Hz,3H) ,2.54(t,J= 6.4Hz,2H),1.92 (s，3H).13CNMR(100MHz，CDC13)Sl70.4，170.2，161.7，136.6，135.7，134.2，134.0，133.5, 131.5,130.2,129.2,128.2,120.9,118.9,110.8,41.1,38.3,36.8,36.5,26.4,23.1；MS (ESI)calcdforC23H26BF2N5Na02S+(M+Na)+508found508.〇
[0089] 各步驟投料比為以下摩爾比：
[0090] 化合物1-3:N-乙?；腚装?三乙胺=1:4 · 8:1;
[0091] 中間體1-84-甲基-0-丙氨酰胺=1:1.5。
[0092]本發(fā)明中室溫為18_30°C(本實(shí)施例優(yōu)選25°C)。
[0093] 實(shí)施例2
[0094]制備化合物2步驟為：
[0095] (1)將制備化合物1過(guò)程中的中間體1-3(10〇11^，0.3〇1]11]1〇1)溶于4〇1111^乙腈中，加入 三乙胺(0.25mL，1.8mmo1)，N-乙?；腚装?48yL，0.45mmo1)溶于20mL乙腈中，將此溶液緩 慢加入反應(yīng)體系中，室溫?cái)嚢?h，加水（50mL)，二氯甲烷萃取（50mLX3次），無(wú)水硫酸鎂干 燥，過(guò)濾，濃縮，硅膠柱層析分離提純(體積比二氯甲烷：甲醇= 30:1)得紅色固體中間體I-8；
[0096] (2)將中間體1-8(5〇11^，0.12111111〇1)溶于3〇11^乙腈中，加入.甲基-|3-丙氨酰胺 (33 · 3mg，0 · 24mmol)，室溫反應(yīng)16h，加水(20mL)，二氯甲烷萃取(20mLX3次），無(wú)水硫酸鎂干 燥，過(guò)濾，濃縮，硅膠柱層析分離提純(體積比二氯甲烷：甲醇=20:1)得紅色固體化合物2。 [0097]各步驟投料比為以下摩爾比：
[0098] 化合物1-3:N-乙?；腚装?三乙胺=1:6:1 · 5;
[0099] 中間體I-8:N-甲基-β-丙氨酰胺=1:2。
[0100]本發(fā)明中室溫為18-30°C(本實(shí)施例優(yōu)選18°C)。
[0101] 實(shí)施例3
[0102] 制備化合物2步驟為：
[0103] (1)將制備化合物1過(guò)程中的中間體1-3(10〇11^，0.3〇1]11]1〇1)溶于5〇1111^乙腈中，加入 三乙胺(0.211^，1.5_〇1)，1乙?；腚装?4(^1^，0.375_〇1)溶于151^乙腈中，將此溶液 緩慢加入反應(yīng)體系中，室溫?cái)嚢?h，加水(50mL)，二氯甲烷萃取(50mLX3次），無(wú)水硫酸鎂干 燥，過(guò)濾，濃縮，硅膠柱層析分離提純(體積比二氯甲烷：甲醇= 30:1)得紅色固體中間體I-8；
[0104] (2)將中間體1-8(5〇11^，0.12111111〇1)溶于2511^乙腈中，加入.甲基-|3-丙氨酰胺 (29 · 2mg，0 · 2lmmol)，室溫反應(yīng)14h，加水(20mL)，二氯甲烷萃取(20mLX3次），無(wú)水硫酸鎂干 燥，過(guò)濾，濃縮，硅膠柱層析分離提純(體積比二氯甲烷：甲醇=20:1)得紅色固體化合物2。
[0105] 各步驟投料比為以下摩爾比：
[0106] 化合物I-3:N-乙?；腚装?三乙胺= 1:5:1.25;
[0107] 中間體1-84-甲基-0-丙氨酰胺=1:1.75。
[0108] 本發(fā)明中室溫為18_30°C(本實(shí)施例優(yōu)選30°C)。
[0109] 化合物2分子內(nèi)的氫鍵的測(cè)試
[0110] 化合物2存在分子內(nèi)的氫鍵主要有兩種類型，如下式2-A和2-B所示，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道 (Nesloney,C.L.；Kelly,J.ff.Synthesisandhydrogenbondingcapabilitiesof biphenyl-basedaminoacidsdesignedtonucleateβ-sheet structure.J.Org.Chem. 1996,61,3127-3137.)酰胺鍵的氮?dú)渖炜s振動(dòng)峰在3200-35000^1 的范圍內(nèi)，通常在3400-3500(31^1范圍內(nèi)的較窄的峰為自由的氮?dú)滏I伸振動(dòng)峰，3200-3400〇!^范圍內(nèi)的寬峰為存在氫鍵的氮?dú)渖炜s振動(dòng)峰。
[0112] 我們將合成所得的化合物2溶解于無(wú)水二氯甲烷，室溫條件下測(cè)得紅外光譜圖，如 圖1所示，在最高峰為3310CHT1處有一寬峰，主要為2-A和2-B兩種混合狀態(tài)下存在分子內(nèi)氫 鍵的氮?dú)渖炜s振動(dòng)，因?yàn)榧t外檢測(cè)速度遠(yuǎn)大于這兩種構(gòu)象達(dá)到平衡的速度。而在最高峰為 3410CHT1處的窄峰則為2-A與2-B中氨基的氮?dú)浜王０锋I未形成分子內(nèi)氫鍵的氮?dú)渖炜s振動(dòng) 之和。
[0113] 對(duì)化合物2進(jìn)行紅外光譜研究的同時(shí)，也研究了其在不同溫度下酰胺鍵的氨基氫 的核磁位移值。如圖2所示，通常情況下，25°C，CD2C12為溶劑進(jìn)行氫譜掃描，存在氫鍵的氨基 氫的位移值一般在低場(chǎng)（~7.0-9 .Oppm)，而自由的氨基氫的位移值一般在（~5.5-6.Oppm)。并且存在分子內(nèi)的氫鍵的氨基氫的核磁位移值與溫度存在很大的關(guān)系（△δ/ΔT ~-10至-13ppb/K)，自由氨基的氫則隨著溫度變化相對(duì)較?。éう?ΔΤ~-3ppb/K)。不同溫 度下對(duì)化合物2進(jìn)行核磁氫譜的研究，化合物2中氨基氫隨溫度逐漸降低而像低場(chǎng)移動(dòng)，其 中存在2-A與2-B的平衡，它們的Δδ/ΔT約為-12ppb/K。
[0114] 通過(guò)基于對(duì)化合物2的紅外光譜和變溫核磁氫譜兩方面的研究可以證明此類化合 物存在分子內(nèi)的氫鍵，化合物1具有誘導(dǎo)其連接的多肽形成β-sheet的結(jié)構(gòu)的能力。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于驗(yàn)證氨基酸誘導(dǎo)多肽形成β-sheet二級(jí)結(jié)構(gòu)能力的化合物，其特征在于，結(jié) 構(gòu)如下式所示。2. -種如權(quán)利要求1所述化合物的合成方法，其特征在于，合成步驟為：3. 如權(quán)利要求2所述的合成方法，其特征在于，步驟為： (1) 將化合物I-3、N-乙?；腚装?、三乙胺加入乙腈中反應(yīng)，室溫?cái)嚢鑜-3h，經(jīng)后處理 得到固體中間體1-8; (2) 將中間體I-8、N-甲基-β-丙氨酰胺加入乙腈中反應(yīng)，室溫?cái)嚢?2-16h，經(jīng)后處理得 到固體化合物2; 上述各步驟中投料比為以下摩爾比： (1) 化合物1-3 :N-乙?；腚装?三乙胺=1:4.8-6:1-1.5; (2) 中間體I -8: N-甲基-β-丙氨酰胺=1:1 · 5-2。4. 如權(quán)利要求3所述的合成方法，其特征在于，步驟為： (1) 將三乙胺加入溶有化合物1-3的乙腈溶液中，再將溶有Ν-乙?；腚装返囊译嫒芤?緩慢加入，室溫?cái)嚢鑜_3h，經(jīng)萃取、干燥、過(guò)濾、濃縮、硅膠柱層析分離提純得到固體中間體 1-8； (2) 將溶有中間體1-8的乙腈溶液中加入N-甲基-β-丙氨酰胺，室溫?cái)嚢?2-16h，經(jīng)加 水、干燥、過(guò)濾、濃縮、硅膠柱層析分離提純得到固體化合物2。5. 如權(quán)利要求3或4所述的合成方法，其特征在于，各步驟中投料比為以下摩爾比： (1) 化合物1-3 :N-乙?；腚装?三乙胺=1:4.8:1; (2) 中間體1-8:^甲基-0-丙氨酰胺=1:1.5。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于驗(yàn)證氨基酸誘導(dǎo)多肽形成β-sheet二級(jí)結(jié)構(gòu)能力的化合物，其特征在于，結(jié)構(gòu)如下式所示。本發(fā)明通過(guò)測(cè)試化合物2中氨基氫和羰基氧能否形成分子內(nèi)的氫鍵，來(lái)確定化合物1能否誘導(dǎo)連接的多肽形成穩(wěn)定的β-sheet二級(jí)結(jié)構(gòu)，這對(duì)合成的熒光氨基酸能否應(yīng)用于熒光試劑盒開發(fā)、藥物研發(fā)等領(lǐng)域具有重要的指導(dǎo)意義。
【IPC分類】C07F5/02
【公開號(hào)】CN105461742
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510814631
【發(fā)明人】喻艷華, 董長(zhǎng)治, 付成, 喻冰潔, 羅會(huì)秀, 張冬冬, 陳俊杰, 舒婷婷
【申請(qǐng)人】江漢大學(xué)
【公開日】2016年4月6日
【申請(qǐng)日】2015年11月20日