直腸腺癌的診治標(biāo)記物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及SLC26A9基因在直腸腺癌診斷、治療中的用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 直腸腺癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。近年來，隨著我國人民生活水平的提 高，飲食結(jié)構(gòu)的改變，人口老齡化以及直腸腺癌普查的開展，直腸腺癌在我國的發(fā)病率呈逐 年上升的趨勢，嚴重威脅著人們的健康。而且由于直腸腺癌早期大多數(shù)沒有特殊癥狀或根 本沒有癥狀，因此直腸腺癌的診斷常被延誤。當(dāng)貧血、消瘦、便血、腹痛等腫瘤癥狀出現(xiàn)時， 癌癥常常已經(jīng)到了中晚期。直腸腺癌的發(fā)病率和死亡率均較高。據(jù)統(tǒng)計，世界范圍內(nèi)直腸腺 癌患者每年新增約123萬人，其中約有60萬患者死亡。直腸腺癌生物學(xué)行為復(fù)雜，其發(fā)生發(fā) 展是一個多階段、多因素的過程。
[0003] 目前臨床上直腸腺癌早期診斷主要依賴于直腸指檢、血CEA檢測、糞便隱血檢查、 直腸鏡或結(jié)腸鏡檢查、盆腔磁共振檢查、腹盆腔CT、直腸鏡內(nèi)B超、胸部CT或胸部X線檢查。而 臨床上的治療外科手術(shù)為主，輔以化療、放療或靶向治療等的綜合治療。手術(shù)治療主要是根 據(jù)癌腫所在部位、大小、活動度、細胞分化程度、術(shù)前的排便控制能力及術(shù)前臨床分期等因 素進行局部切除，腹會陰聯(lián)合直腸癌根治術(shù)，永久性乙狀結(jié)腸造口、經(jīng)腹直腸癌切除術(shù)，經(jīng) 腹直腸癌切除、近端造口、遠端封閉手術(shù)。
[0004] 直腸腺癌早期臨床癥狀隱匿，不易發(fā)現(xiàn)，大多患者就診時已到中晚期，失去了最佳 手術(shù)時機。有報道表明，早期直腸腺癌患者術(shù)后5年生存率約為90%，而晚期患者僅為15%。 因此，早發(fā)現(xiàn)、早治療是降低直腸腺癌患者高死亡率、改善預(yù)后的關(guān)鍵。隨著分子生物學(xué)技 術(shù)的發(fā)展，國內(nèi)外研究者不斷探索直腸腺癌新的生物標(biāo)志物，以對傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物進行有 效補充，從而對直腸腺癌患者的病情監(jiān)測、預(yù)后判斷以及實施個體化綜合治療，而且對新型 抗腫瘤藥物的研發(fā)和應(yīng)用，均具有重要的理論意義和臨床價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種直腸腺癌的診治標(biāo)記物， 為直腸腺癌的診斷和治療提供一種分子手段。
[0006] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明提供了SLC26A9在制備抑制或預(yù)防直腸腺癌轉(zhuǎn)移、侵襲的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 進一步，所述的藥物包含SLC26A9基因和/或其表達產(chǎn)物的抑制劑。
[0009] 進一步，本發(fā)明所述抑制劑包括:通過干擾RNA抑制SLC26A9基因表達的雙鏈核糖 核酸，或基于SLC26A9抗原蛋白的腫瘤疫苗，或用于抑制SLC26A9蛋白活性的蛋白質(zhì)。
[0010] 優(yōu)選的，所述抑制劑是針對SLC26A9基因的siRNA。
[0011]本發(fā)明還提供了一種用于治療直腸腺癌轉(zhuǎn)移、侵襲的藥物，所述藥物包含SLC26A9 基因和/或其表達產(chǎn)物抑制劑。所述抑制劑包括抑制SLC26A9基因表達的物質(zhì)、抑制SLC26A9 基因表達產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)、和/或抑制SLC26A9基因表達產(chǎn)物活性的物質(zhì)。
[0012] 進一步，本發(fā)明所述抑制劑包括:通過干擾RNA抑制SLC26A9基因表達的雙鏈核糖 核酸，或基于SLC26A9抗原蛋白的腫瘤疫苗、或用于抑制SLC26A9蛋白活性的蛋白質(zhì)。
[0013] 本發(fā)明的藥物還可與其他治療直腸腺癌的藥物聯(lián)用，多種藥物聯(lián)合使用可以大大 提尚治療的成功率。
[0014] -方面，本發(fā)明所述的"抑制或預(yù)防直腸腺癌轉(zhuǎn)移、侵襲的藥物"包含SLC26A9基因 和/或其表達產(chǎn)物的抑制劑。所述抑制劑包括抑制SLC26A9基因表達的物質(zhì)、抑制SLC26A9基 因表達產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)、和/或抑制SLC26A9基因表達產(chǎn)物活性的物質(zhì)。
[0015] 另一方面，本發(fā)明所述的"抑制或預(yù)防直腸腺癌轉(zhuǎn)移、侵襲的藥物"包括能夠括抑 制細胞生長、促進細胞凋亡的物質(zhì)。
[0016] 本發(fā)明提供了SLC26A9在制備預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn) 移、判斷直腸腺癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0017] 進一步，上面所提到的產(chǎn)品能夠通過檢測直腸腺癌組織中SLC26A9基因的表達水 平來預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷直腸腺癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)。
[0018] 進一步，所述通過檢測直腸腺癌組織中SLC26A9基因的表達水平:通過RT-PCR、實 時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或芯片檢測SLC26A9基因及其表達產(chǎn)物的表達水平進行檢 測。
[0019] 其中，所述用RT-PCR來預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷 直腸腺癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的產(chǎn)品至少包括一對特異擴增SLC26A9基因的引物;所述用實時定 量PCR預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷直腸腺癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的 產(chǎn)品至少包括一對特異擴增SLC26A9基因的引物;所述用免疫檢測預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、 診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷直腸腺癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的產(chǎn)品包括:與SLC26A9蛋白特異 性結(jié)合的抗體;所述用原位雜交預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷 直腸腺癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的產(chǎn)品包括:與SLC26A9基因的核酸序列雜交的探針;所述用芯片預(yù) 判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷直腸腺癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的產(chǎn)品包 括:蛋白芯片和基因芯片;其中，蛋白芯片包括與SLC26A9蛋白特異性結(jié)合的抗體，基因芯片 包括與SLC26A9基因的核酸序列雜交的探針。
[0020] 優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包括芯片、試劑盒。
[0021] 本發(fā)明提供了一種預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷直 腸腺癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品能夠通過檢測直腸腺癌組織中SLC26A9基因的表達 水平來預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移。
[0022] 進一步，所述產(chǎn)品包括芯片、試劑盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白質(zhì)芯片； 所述基因芯片包括固相載體以及固定在固相載體的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括 用于檢測SLC26A9基因轉(zhuǎn)錄水平的針對SLC26A9基因的寡核苷酸探針;所述蛋白質(zhì)芯片包括 固相載體以及固定在固相載體的SLC26A9蛋白的特異性抗體;所述試劑盒包括基因檢測試 劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒;所述基因檢測試劑盒包括用于檢測SLC26A9基因轉(zhuǎn)錄水平的 試劑;所述蛋白免疫檢測試劑盒包括SLC26A9蛋白的特異性抗體。
[0023]進一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或芯片方法 檢測SLC26A9基因表達水平過程中所需的試劑。優(yōu)選地，所述試劑包括針對SLC26A9基因的 引物和/或探針。根據(jù)SEQIDNO.2所示的核苷酸序列信息設(shè)計出可以用于檢測SLC26A9基 因表達水平的引物和探針。
[0024]與SLC26A9基因的核酸序列雜交的探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其 它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結(jié) 合，任何長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述探針 的長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對 雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不 超過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15-25個堿基對最佳。所述探針自身互補 序列最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。
[0025]進一步，所述固相載體包括無機載體和有機載體，所述無機載體包括但不限于有 硅載體、玻璃載體、陶瓷載體等;所述有機載體包括聚丙烯薄膜、尼龍膜等。
[0026]進一步，所述SLC26A9蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述 SLC26A9蛋白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾，例如，嵌合抗體、 scFv、Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與SLC26A9蛋白的結(jié)合能力即可。用于蛋 白質(zhì)水平的抗體的制備時本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本發(fā)明可以使用任何方法來制備所 述抗體。
[0027]本發(fā)明的藥物還可包括藥學(xué)上可接受的載體，這類載體包括(但并不限于）：稀釋 劑如乳糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;粘合劑如淀粉、預(yù)膠化淀粉、糊精、麥芽糖糊 精、蔗糖、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚 乙烯比咯烷酮、海藻酸及海藻酸鹽、黃原膠、羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素等;表面活 性劑如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸單甘油酯、十六烷醇等;致 濕劑如甘油、淀粉等;吸附載體如淀粉、乳糖、斑脫土、硅膠、高嶺土和皂粘土等;潤滑劑如硬 脂酸鋅、單硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、聚乙二醇、硼酸粉末、氫化植物 油、硬脂富馬酸鈉、聚氧乙烯單硬脂酸酯、單月桂蔗糖酸酯、月桂醇硫酸鈉、月桂醇硫酸鎂、 十二烷基硫酸鎂等;填充劑如甘露醇(粒狀或粉狀）、木糖醇、山梨醇、麥芽糖、赤蘚糖、微晶 纖維素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、海藻酸鈉、海帶多糖粉末、瓊脂粉 末、碳酸鈣和碳酸氫鈉等;崩解劑如交聯(lián)乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基甲基、 交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、大豆多糖等。
[0028]本發(fā)明的藥物可以使用不同的添加劑進行制備，例如矯味劑、泡騰劑、穩(wěn)定劑、殺 菌劑、等滲劑、螯合劑、生物利用度劑等中的一種或幾種。所述矯味劑包括但不限于甘露醇、 木糖醇、甜菊甙、乳糖、果糖、蔗糖、蛋白糖、麥芽糖醇、甘草甜素、環(huán)己氨基磺酸鈉、明膠、阿 斯巴甜、香蕉香精、菠蘿香精、香蘭素、香橙香精、桔子香精、薄荷香精、人參香精、草莓香精、 枸櫞酸、檸檬酸;所述泡騰劑包括但不限于蘋果酸、檸檬酸或枸櫞酸