Tmigd2基因在直腸腺癌診治中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[00011本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及TMIGD2基因在直腸腺癌診斷、治療中的用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 直腸腺癌是人類常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，目前在世界范圍內(nèi)其發(fā)病率在惡性腫瘤發(fā) 病率中女性占第二位，男性占第三位。隨著生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國(guó)直腸腺癌發(fā)病 率也在逐年升高，嚴(yán)重威脅著我國(guó)居民的生命健康安全。大腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)涉及多 基因、多因子的多階段、多步驟的發(fā)展變化過(guò)程。其形成具有明確的階段性，腺瘤是癌形成 的一個(gè)階段。但腫瘤的惡性增生從生物學(xué)角度看，主要表現(xiàn)為兩個(gè)方面:一是腫瘤細(xì)胞的不 滅性，即細(xì)胞凋亡障礙;二是細(xì)胞增殖失控，程序發(fā)生紊亂，只是增殖超常加速。直腸腺癌的 發(fā)生與多種癌基因和抑癌基因相關(guān)，涉及細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的多種因子。細(xì)胞凋亡過(guò)程 非常復(fù)雜，其過(guò)程受到嚴(yán)密的多方面控制。
[0003] 迄今為止，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療的"三早策略"仍然是提高直腸腺癌遠(yuǎn)期療效最 為有效的手段。近年來(lái)，盡管早期診斷和綜合治療領(lǐng)域也有了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù) 發(fā)仍然是影響預(yù)后的首要原因。臨床確診為早期階段的直腸腺癌其5年總體生存率可高達(dá) 90%，伴有局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)下降為65%，而一旦合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時(shí)則不足10%。這些數(shù)據(jù)顯 示絕大多數(shù)直腸腺癌死于轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的分子機(jī)制，不但有助于開(kāi)展直腸癌患者的病情監(jiān)測(cè)、 預(yù)后判斷以及實(shí)施個(gè)體化綜合治療，而且對(duì)新型抗腫瘤藥物的研發(fā)和應(yīng)用，均具有重要的 理論意義和臨床價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種可用于直腸腺癌診療的分子標(biāo)志物。與傳統(tǒng)的診斷方 法相比，使用基因標(biāo)志物來(lái)預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移具有及 時(shí)性、特異性和靈敏性，從而使患者在疾病早期就能知曉風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)風(fēng)險(xiǎn)高低，采取相應(yīng)的 預(yù)防和治療措施。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明提供了一種基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、診斷直腸腺 癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述基因?yàn)門(mén)MIGD2。
[0007] 進(jìn)一步，上面所提到的產(chǎn)品包括:通過(guò)RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交 或芯片檢測(cè)TMIGD2基因及其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)水平以預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、診斷直腸腺癌 是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的產(chǎn)品。
[0008] 進(jìn)一步，所述用RT-PCR來(lái)預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的 產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增TMIGD2基因的引物;所述用實(shí)時(shí)定量PCR預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng) 險(xiǎn)、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增TMIGD2基因的引物;所述用 免疫檢測(cè)預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的產(chǎn)品包括:與TMIGD2蛋白 特異性結(jié)合的抗體;所述用原位雜交預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移 的產(chǎn)品包括:與TMIGD2基因的核酸序列雜交的探針;所述用芯片預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、診 斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的產(chǎn)品包括:蛋白芯片和基因芯片;其中，蛋白芯片包括與TMIGD2 蛋白特異性結(jié)合的抗體，基因芯片包括與TMIGD2基因的核酸序列雜交的探針。
[0009 ]優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包括芯片、試劑盒。
[0010] 本發(fā)明提供了一種預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的產(chǎn)品， 所述產(chǎn)品能夠通過(guò)檢測(cè)直腸腺癌組織中TMIGD2基因的表達(dá)水平來(lái)預(yù)判直腸腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、 診斷直腸腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移。
[0011] 進(jìn)一步，所述產(chǎn)品包括芯片、或試劑盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白質(zhì)芯 片;所述基因芯片包括固相載體以及固定在固相載體的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針 包括用于檢測(cè)TMIGD2基因轉(zhuǎn)錄水平的針對(duì)TMIGD2基因的寡核苷酸探針;所述蛋白質(zhì)芯片包 括固相載體以及固定在固相載體的TMIGD2蛋白的特異性抗體;所述試劑盒包括基因檢測(cè)試 劑盒和蛋白免疫檢測(cè)試劑盒;所述基因檢測(cè)試劑盒包括用于檢測(cè)TMIGD2基因轉(zhuǎn)錄水平的試 劑;所述蛋白免疫檢測(cè)試劑盒包括TMIGD2蛋白的特異性抗體。
[0012] 進(jìn)一步，所述固相載體包括無(wú)機(jī)載體和有機(jī)載體，所述無(wú)機(jī)載體包括但不限于有 硅載體、玻璃載體、陶瓷載體等;所述有機(jī)載體包括聚丙烯薄膜、尼龍膜等。
[0013] 進(jìn)一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交或芯片方法 檢測(cè)TMIGD2基因表達(dá)水平過(guò)程中所需的試劑。優(yōu)選地，所述試劑包括針對(duì)TMIGD2基因的引 物和/或探針。根據(jù)SEQIDN0.2所示的核苷酸序列信息設(shè)計(jì)出可以用于檢測(cè)TMIGD2基因表 達(dá)水平的引物和探針。
[00M] 與TMI⑶2基因的核酸序列雜交的探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它 衍生物。所述探針的長(zhǎng)度沒(méi)有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結(jié)合， 任何長(zhǎng)度都可以。所述探針的長(zhǎng)度可短至25、20、15、13或10個(gè)堿基長(zhǎng)度。同樣，所述探針的 長(zhǎng)度可長(zhǎng)至60、80、100、150、300個(gè)堿基對(duì)或更長(zhǎng)，甚至整個(gè)基因。由于不同的探針長(zhǎng)度對(duì)雜 交效率、信號(hào)特異性有不同的影響，所述探針的長(zhǎng)度通常至少是14個(gè)堿基對(duì)，最長(zhǎng)一般不超 過(guò)30個(gè)堿基對(duì)，與目的核苷酸序列互補(bǔ)的長(zhǎng)度以15-25個(gè)堿基對(duì)最佳。所述探針自身互補(bǔ)序 列最好少于4個(gè)堿基對(duì)，以免影響雜交效率。
[0015] 進(jìn)一步，所述TMI⑶2蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述TMIGD2 蛋白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾，例如，嵌合抗體、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與TMIGD2蛋白的結(jié)合能力即可。用于蛋白質(zhì)水 平的抗體的制備時(shí)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本發(fā)明可以使用任何方法來(lái)制備所述抗 體。
[0016] 本發(fā)明還提供了TMIGD2基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備治療直腸腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0017] -方面，本發(fā)明所述的"治療直腸腺癌轉(zhuǎn)移、侵襲的藥物"包括能夠括抑制細(xì)胞生 長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
[0018] 另一方面，本發(fā)明所述的"治療直腸腺癌轉(zhuǎn)移、侵襲的藥物"包含TMIGD2基因和/或 其表達(dá)產(chǎn)物的抑制劑。所述抑制劑包括抑制TMIGD2基因表達(dá)的物質(zhì)、抑制TMIGD2基因表達(dá) 產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)、和/或抑制TMIGD2基因表達(dá)產(chǎn)物活性的物質(zhì)。
[0019 ]進(jìn)一步，本發(fā)明所述的治療直腸腺癌的藥物包括:通過(guò)干擾RNA抑制TMI⑶2基因表 達(dá)的雙鏈核糖核酸，或基于TMIGD2抗原蛋白的腫瘤疫苗，或用于抑制TMIGD2蛋白活性的蛋 白質(zhì)。
[0020] 優(yōu)選的，所述抑制劑是針對(duì)TMIGD2的siRNA
[0021] 本發(fā)明還提供了一種用于治療直腸腺癌轉(zhuǎn)移、侵襲的藥物，所述藥物包含TMIGD2 基因和/或其表達(dá)產(chǎn)物抑制劑。所述抑制劑包括抑制TMIGD2基因表達(dá)的物質(zhì)、抑制TMIGD2基 因表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)、和/或抑制TMIGD2基因表達(dá)產(chǎn)物活性的物質(zhì)。
[0022]進(jìn)一步，本發(fā)明所述抑制劑包括:通過(guò)干擾RNA抑制TMIGD2基因表達(dá)的雙鏈核糖核 酸，或基于TMIGD2抗原蛋白的腫瘤疫苗、或用于抑制TMIGD2蛋白活性的蛋白質(zhì)。
[0023] 進(jìn)一步，本發(fā)明的藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體，這類載體包括(但并不限于）： 稀釋劑、賦形劑如乳糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;填充劑如淀粉、蔗糖等;粘合劑如 單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮;濕潤(rùn)劑如 甘油；崩解劑如干淀粉、海藻酸鈉、海帶多糖粉末、瓊脂粉末、碳酸鈣和碳酸氫鈉;吸收促進(jìn) 劑季銨化合物、十二烷基硫酸鈉等;表面活性劑如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基 硫酸鈉、硬脂酸單甘油酯、十六烷醇等;致濕劑如甘油、淀粉等;潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣 和鎂、聚乙二醇、硼酸粉末等;吸附載體如淀粉、乳糖、斑脫土、硅膠、高嶺土和皂粘土等。
[0024] 本發(fā)明的藥物還可與其他治療直腸腺癌的藥物聯(lián)用，多種藥物聯(lián)合使用可以大大 提尚治療的成功率。
[0025] 本發(fā)明的藥物可以使用不同的添加劑進(jìn)行制備，例如殺菌劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、等 滲劑、螯合劑、pH控制劑及表面活性劑。
[0026] 添加劑緩沖劑可以包括硼酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、谷氨酸及相應(yīng)的鹽(它們的堿金 屬或堿性稀土金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及鎂鹽）。等滲劑包括氯化鉀、氯化鈉、糖及甘 油。螯合劑包括乙二胺四乙酸鈉及檸檬酸。
[0027]穩(wěn)定劑包括人類血清蛋白、L-氨基酸、糖及纖維素衍生物。L-氨基酸還可以包括甘 氨酸、半胱氨酸及谷氨酸中的任意一個(gè)。糖類包括單