一種水飛薊素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及水飛薊素的制備方法，更具體地，涉及一種從水飛薊種子中提取高純 度水飛薊素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 水飛薊素(silmyarin)是一類(lèi)由二氫黃酮醇與苯丙素衍生物縮合而成的黃酮木脂 素類(lèi)成分的混合物，主要來(lái)源是菊科植物水飛薊（silybum marinaum(L)Gaenrt)的種子(又 稱(chēng)水飛薊籽），主要成分是水飛薊賓（8；115^；[11，8；[1；[13；[11；[11)，異水飛薊賓（1808；[15^；[11， isosilibinin)，水飛薊亭（siliehristin)，水飛薊寧（silidinain)四種同分異構(gòu)體，呈黃 色粉末或結(jié)晶狀粉末。
[0003] 研究發(fā)現(xiàn)，水飛薊素主要具有保肝利膽的作用，可保護(hù)肝臟細(xì)胞免受毒性物質(zhì)侵 害，尤其是酒精及環(huán)境污染物(農(nóng)藥、重金屬等)入侵損害肝臟，臨床用于治療肝炎、膽囊炎 等;還具有強(qiáng)力的抗氧化、消除自由基以及抗輻射作用，能保護(hù)肝臟細(xì)胞免受自由基破壞， 促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，并且在降血脂、防治動(dòng)脈粥樣硬化、預(yù)防腦缺血、抗血小板凝集方面均 具有較好效果，被認(rèn)為是潛在的防治心腦血管疾病的良好藥物。因此，提出一種能有效富集 水飛薊素的制備方法是非常有必要的。
[0004] 我國(guó)雖然是水飛薊種植大國(guó)，但目前對(duì)水飛薊素的生產(chǎn)制備的研究仍不夠深入， 由于水飛薊素易溶于丙酮、乙酸乙酯、乙醇及甲醇、難溶于氯仿、不溶于水的特性，以及水飛 薊種子自身含有大量油性成分的原因，在制備過(guò)程中往往會(huì)用到大量有機(jī)溶劑，造成產(chǎn)品 的溶劑殘留現(xiàn)象，或者經(jīng)堿法處理，影響了水飛薊素的得率，要經(jīng)復(fù)雜的純化精制步驟，或 者為了追求高純度而選擇了繁雜的提取精制步驟。
[0005] 例如，現(xiàn)有技術(shù)曾提出過(guò)一種水飛薊素的生產(chǎn)方法，采用蒸汽軟化水飛薊殼、乙醇 提取、堿水沉淀、分離沉淀干燥即得。雖然該方法工藝簡(jiǎn)單，但由于堿性試劑會(huì)對(duì)水飛薊素 有所破壞，因而該方法制得的產(chǎn)品中水飛薊素含量?jī)H達(dá)到70%。現(xiàn)有技術(shù)也有提出用生物 技術(shù)手段來(lái)處理水飛薊籽的方法，將里氏木霉和康寧木霉的復(fù)合微生物發(fā)酵劑接種在水飛 薊去油種子餅粉中，保溫發(fā)酵后經(jīng)熱風(fēng)干燥，無(wú)水乙醇提取后加甲醇溶解得不溶物;或者使 用纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶復(fù)合酶進(jìn)行細(xì)胞破壁、加以超聲波提取，最后以大孔吸附 樹(shù)脂的技術(shù)進(jìn)行純化，得到了高含量的水飛薊素。國(guó)外專(zhuān)利對(duì)水飛薊原料或采用榨油方式 或采用石油醚、正己烷除油，既影響水飛薊素產(chǎn)品的色澤和收率又容易產(chǎn)生溶劑殘留，要使 終產(chǎn)品符合溶劑殘留小于lOOppm的標(biāo)準(zhǔn)需要非常復(fù)雜的除雜工藝。
[0006] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中制備水飛薊素的方法存在的上述缺陷和不足，本發(fā)明的目的即提 供一種工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)效率高、操作簡(jiǎn)便的水飛薊素制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供了一種從水飛薊籽種皮中提取高純度水飛薊素的制備方法，包括以下 步驟： ⑴取水飛薊籽，經(jīng)脫殼機(jī)脫出種皮，收集種皮，紫外線照射10-20分鐘； ⑵將處理后的水飛薊籽種皮裝入酶解反應(yīng)罐，加入原料重量0.5-2.0 %的纖維素酶:果 膠酶:堿性蛋白酶(5:4:1)復(fù)合酶，酶解30-50分鐘； (3)將酶處理后的原料裝入平轉(zhuǎn)浸出器，用無(wú)水乙醇提取，得提取液； ⑷揮去提取液中的溶劑，得固體，用蒸餾水水洗，得水飛薊素粗品； (5) 用無(wú)水乙醇溶解粗品，得上樣液，通過(guò)反相分配色譜，用水、25%乙醇水溶液、50%乙 醇水溶液、75%乙醇水溶液和無(wú)水乙醇作為流動(dòng)相依次洗脫，收集無(wú)水乙醇部分洗脫液； (6) 濃縮收集的洗脫液，微波真空干燥，得產(chǎn)品。
[0008] 上述制備方法中，所述步驟(2)的操作具體為:將處理后的水飛薊籽種皮裝入酶解 反應(yīng)罐，蒸汽軟化10-20分鐘后，將溫度降至20-40°C，加入原料重量0.5-2%的纖維素酶:果 膠酶:堿性蛋白酶(5:4:1)復(fù)合酶，運(yùn)轉(zhuǎn)攪拌器，酶解30-50分鐘。
[0009] 上述制備方法中，所述步驟(3)的操作具體為:將酶處理后的原料裝入所述平轉(zhuǎn)浸 出器的物料格，裝料量為所述物料格的70-80%，提取溫度為20-40°〇，轉(zhuǎn)速為&/60_ 120min，連續(xù)噴淋，提取3-5小時(shí)。
[0010] 上述制備方法中，所述步驟(4)的操作具體為：真空干燥揮去溶劑，用5-8倍水水 洗，得水飛薊素粗品。
[0011] 上述制備方法中，所述步驟(5)的操作具體為:用無(wú)水乙醇溶解粗品，得上樣液，通 過(guò)反相分配色譜，色譜柱填料為硅藻土，用水、25 %乙醇水溶液、50 %乙醇水溶液、75 %乙醇 水溶液和無(wú)水乙醇作為流動(dòng)相依次洗脫，其中75 %乙醇水溶液和無(wú)水乙醇中分別加入2-5 % PEG400，收集無(wú)水乙醇部分洗脫液。
[0012] 上述制備方法中，所述步驟(6)的操作具體為:微波真空干燥溫度：20_40°C，回差 溫度2-4°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率40-80KW，干燥40-80分鐘。
[0013]本發(fā)明方法制得的水飛薊素產(chǎn)品純度為93%以上，且基本無(wú)溶劑殘留。
[0014] 本發(fā)明還提供了上述制備方法制得的水飛薊提取物。
[0015] 本發(fā)明的制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1、本發(fā)明選擇水飛薊籽的種皮作為原料，避免水飛薊籽的油脂成分對(duì)水飛薊素的影 響，使整個(gè)制備方法更為簡(jiǎn)化，利于工業(yè)大生產(chǎn)。
[0016] 2、由于選擇了酶解的方式，因而在酶解前選擇了紫外線滅去植物種皮自身含有的 酶成分，進(jìn)而選擇合適的復(fù)合酶進(jìn)行種皮細(xì)胞的破壁，非常利于后續(xù)的溶劑提取，極大地提 高了提取率。
[0017] 3、采用平轉(zhuǎn)浸出器作為提取設(shè)備，降低溶劑使用量和損耗，增大投料量，提高了生 產(chǎn)效率，減少了生產(chǎn)時(shí)間。
[0018] 4、本發(fā)明的精制方法在水洗的基礎(chǔ)上通過(guò)反相分配色譜，選擇硅藻土作為柱填 料，選擇含2_5%PEG400的無(wú)水乙醇作為目標(biāo)成分的流動(dòng)相，PEG400能極大地增強(qiáng)水飛薊素 在無(wú)水乙醇中的溶解度，通過(guò)梯度洗脫的方式除去多余雜質(zhì)，得到產(chǎn)品純度在93%以上的 水飛薊素產(chǎn)品，基本無(wú)溶劑殘留。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將本發(fā)明實(shí)施例中的 技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全 部可能性。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)下所得到的所有其他實(shí)施例，都落 入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[