一種高純度熊果酸的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高純度熊果酸的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 熊果酸（ursol ic acid，UA)是一種弱極性的五環(huán)三砲類化合物，分子式為 C30H4803，分子量為456.68，結(jié)構(gòu)復(fù)雜。由于其具有多樣的藥理功能，因而受到國內(nèi)外廣泛 關(guān)注，市場(chǎng)需求量很大；熊果酸在植物界分布廣泛，但其含量較低，目前國內(nèi)外尚未實(shí)現(xiàn)人 工合成，因而深入研究熊果酸的提取純化工藝，對(duì)開發(fā)熊果酸的系列產(chǎn)品具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對(duì)上述技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明提供了一種工藝簡(jiǎn)單安全的高純度熊果 酸的制備方法。
[0004] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:一種高純度熊果酸的制備方法，包 括如下步驟:步驟一、將低含量熊果酸提取物加水?dāng)嚢瑁?jīng)過濾除去水溶性雜質(zhì)，得到粗提 取物;步驟二、向粗提取物中加入乙醇除雜，經(jīng)過濾干燥得到除雜提取物;步驟三、向除雜提 取物中加入乙酸乙酯與石油醚的混合溶劑攪拌脫脂，再加入果膠一淀粉復(fù)合酶液攪拌離心 去除油脂層，并經(jīng)過濾干燥得到脫脂提取物;步驟四、向脫脂提取物中加入堿性熱乙醇溶解 后進(jìn)行脫色處理，經(jīng)過濾得到脫色提取液;步驟五、調(diào)節(jié)脫色提取液的PH至7~8，靜置析晶 得到析晶熊果酸;步驟六、向析晶熊果酸中加入堿性熱乙醇溶解，并調(diào)節(jié)PH至7,靜置析晶即 得高純度熊果酸。
[0005] 優(yōu)選的，所述步驟一中的低含量熊果酸提取物為熊果酸含量在20~25%之間的熊 果酸提取物。
[0006] 優(yōu)選的，所述步驟一中的加水量為低含量熊果酸提取物用量的10~15倍，除雜溫 度為20~30°C，除雜時(shí)間1~2h。
[0007] 優(yōu)選的，所述步驟二中的乙醇濃度為60~70%，其用量為粗提取物的10~15倍，除 雜溫度為20~30°C，除雜時(shí)間為1~2h。
[0008] 優(yōu)選的，所述步驟三中果膠一淀粉復(fù)合酶液的加酶量為混合溶劑用量的1000~ 3000u/g〇
[0009] 優(yōu)選的，所述步驟四中堿性熱乙醇的濃度為80~85%，pH為12~13,其用量為脫脂 提取物的10~15倍。
[0010] 優(yōu)選的，所述步驟四中脫色處理過程為:脫脂提取物中加入堿性熱乙醇溶解后，加 入廢白土進(jìn)行預(yù)脫色，得到預(yù)脫色提取物，再向預(yù)脫色提取物中加入凹凸棒土和硅藻土進(jìn) 行復(fù)脫色處理，經(jīng)過濾得到脫色提取液。
[0011] 優(yōu)選的，預(yù)脫色工藝參數(shù)如下:廢白土的加入量為I. 〇~2.0 %，預(yù)脫色時(shí)間為1.5 ~2h，預(yù)脫色溫度為75~80°C。
[0012] 優(yōu)選的，復(fù)脫色工藝參數(shù)如下：凹凸棒土的加入量為2.0~3.0%，硅藻土的加入量 為0.1~0.2 %，復(fù)脫色時(shí)間為2~3h，復(fù)脫色溫度為80~90°C。
[0013]優(yōu)選的，所述步驟五中向脫色提取液中加入濃度為2~2.5mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至7 ~8，靜置析晶溫度為20~30°C，析晶時(shí)間為12~18h。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是:本發(fā)明提供的高純度熊果酸的制備方法， 通過將脫脂提取物先后經(jīng)預(yù)脫色和復(fù)脫色處理，并在析晶前調(diào)節(jié)提取液至適宜的PH，克服 了轉(zhuǎn)移率低的缺陷，提高了純化效率；熊果酸總轉(zhuǎn)移率可達(dá)到85 %以上，純度高達(dá)98 %以 上;該制備方法工藝簡(jiǎn)單安全、成本低，利于大規(guī)模生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]
[0016] 本發(fā)明提供了一種高純度熊果酸的制備方法，包括如下步驟：
[0017]步驟一、將熊果酸含量在20~25%之間的低含量熊果酸提取物加水?dāng)嚢?，?jīng)過濾 除去水溶性雜質(zhì)，加水量為低含量熊果酸提取物用量的10~15倍，除雜溫度為20~30°C，除 雜時(shí)間1~2h，得到粗提取物；
[0018] 步驟二、向粗提取物中加入乙醇除雜，乙醇濃度為60~70%，其用量為粗提取物的 10~15倍，除雜溫度為20~30°C，除雜時(shí)間為1~2h，經(jīng)過濾干燥得到除雜提取物；
[0019] 步驟三、向除雜提取物中加入乙酸乙酯與石油醚的混合溶劑（1:1，V/V)攪拌脫脂， 再加入果膠一淀粉復(fù)合酶液攪拌離心去除油脂層，所述果膠一淀粉復(fù)合酶液的加酶量為混 合溶劑用量的1000~3000u/g，并經(jīng)過濾干燥得到脫脂提取物；
[0020] 步驟四、向脫脂提取物中加入堿性熱乙醇溶解后，加入廢白土進(jìn)行預(yù)脫色，得到預(yù) 脫色提取物，再向預(yù)脫色提取物中加入凹凸棒土和硅藻土進(jìn)行復(fù)脫色處理，經(jīng)過濾得到脫 色提取液；
[0021] 其中，堿性熱乙醇的濃度為80~85%，pH為12~13,其用量為脫脂提取物的10~15 倍;預(yù)脫色工藝參數(shù)如下:廢白土的加入量為1.0~2.0%，預(yù)脫色時(shí)間為1.5~2h，預(yù)脫色溫 度為75~80°C;復(fù)脫色工藝參數(shù)如下：凹凸棒土的加入量為2.0~3.0%，硅藻土的加入量為 0.1~0.2 %，復(fù)脫色時(shí)間為2~3h，復(fù)脫色溫度為80~90°C;
[0022] 步驟五、向脫色提取液中加入濃度為2~2.5mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至7~8,靜置析 晶得到析晶熊果酸，靜置析晶溫度為20~30°C，析晶時(shí)間為12~18h;
[0023] 步驟六、向析晶熊果酸中加入堿性熱乙醇溶解，并調(diào)節(jié)pH至7,靜置析晶即得高純 度熊果酸。
[0024] 不同析晶pH的收率情況，如下表所示：
[0025]
[0026] 實(shí)施例1:
[0027] 將熊果酸含量25%的低含量熊果酸提取物加水?dāng)嚢?，?jīng)過濾除去水溶性雜質(zhì)，加 水量為低含量熊果酸提取物用量的15倍，除雜溫度為25°C，除雜時(shí)間2h，得到粗提取物；向 粗提取物中加入乙醇除雜，乙醇濃度為70%，其用量為粗提取物的15倍，除雜溫度為25°C， 除雜時(shí)間為2h，經(jīng)過濾干燥得到除雜提取物；向除雜提取物中加入乙酸乙酯與石油醚的混 合溶劑攪拌脫脂，再加入果膠一淀粉復(fù)合酶液攪拌離心去除油脂層，所述果膠一淀粉復(fù)合 酶液的加酶量為混合溶劑用量的l〇〇〇u/g，并經(jīng)過濾干燥得到脫脂提取物；向脫脂提取物中 加入堿性熱乙醇溶解后，加入廢白土進(jìn)行預(yù)脫色，得到預(yù)脫色提取物，再向預(yù)脫色提取物中 加入凹凸棒土和硅藻土進(jìn)行復(fù)脫色處理，經(jīng)過濾得到脫色提取液;其中，堿性熱乙醇的濃度 為85%，pH為13,其用量為脫脂提取物的15倍;預(yù)脫色工藝參數(shù)如下：廢白土的加入量為 2.0%，預(yù)脫色時(shí)間為1.5h，預(yù)脫色溫度為75°C;復(fù)脫色工藝參數(shù)如下：凹凸棒土的加入量為 3.0%，硅藻土的加入量為0.15%，復(fù)脫色時(shí)間為2h，復(fù)脫色溫度為80°C;向脫色提取液中加 入濃度為2.5mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至8，靜置析晶得到熊果酸含量為65 %的析晶熊果酸，靜置 析晶溫度為25°C，析晶時(shí)間為18h;向析晶熊果酸中加入堿性熱乙醇溶解，并調(diào)節(jié)pH至7,靜 置析晶即得高純度熊果酸，熊果酸含量為98.2%。