一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基及生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥用食用菌栽培領(lǐng)域，具體說是一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基 配方及生產(chǎn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛹蟲草又名北冬蟲夏草、北蟲草，屬于真菌門子囊菌綱肉座菌目麥角菌科蟲草屬， 與冬蟲夏草同屬不同種，其化學(xué)成份和功效非常相似，其中含有蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸、 腺苷等成份，具有增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、護(hù)肝保肺、增強(qiáng)性功能等營養(yǎng)保健功效和多種藥 用功效，可以作為冬蟲夏草的替代品。
[0003] 蟲草素(Cordycepin)是蛹蟲草產(chǎn)生的一種重要次生代謝產(chǎn)物，作為蛹蟲草重要的 生物活性成分，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為3'-脫氧腺苷，是由Cunningham(1951)首次從蛹蟲草中發(fā)現(xiàn) 的。由于蟲草素具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等功效，市場需求越來越大，價格十分 昂貴，國際市場上蟲草素純品的售價約高達(dá)2500美元/g。
[0004] 目前，蟲草素的化學(xué)合成存在諸多弊端，蟲草素等核苷類物質(zhì)的主要來源還是蛹 蟲草培養(yǎng)物，因此蛹蟲草固體培養(yǎng)方法優(yōu)化一直是蛹蟲草研究中的熱點(diǎn)。液體培養(yǎng)由于生 產(chǎn)周期短、條件容易控制、蟲草素易于提取且產(chǎn)量較穩(wěn)定，是目前獲取蟲草素較為有效的培 養(yǎng)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基及生產(chǎn)方法，包括在 液體培養(yǎng)基中添加前體物質(zhì)-腺嘌呤和以小米、大麥為原料進(jìn)行固體培養(yǎng)方法的優(yōu)化。
[0006] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基，包括TOA加富培 養(yǎng)基、液體菌種培養(yǎng)基和子實(shí)體培養(yǎng)基。
[0007] 所述的PDA加富培養(yǎng)基組成為：馬鈴薯汁700-800ml、蔗糖18-22g，繭蛹汁200-300ml，奶粉90-100g，瓊脂 15-20g。
[0008] 所述的液體菌種培養(yǎng)基組成為：繭蛹汁200-300ml，紅糖10-15g，蛋白胨5-10g，黃 豆汁200-300ml，純凈水400-600ml。腺嘌呤質(zhì)量濃度0.8-1. Og/L。
[0009] 所述的子實(shí)體培養(yǎng)基組成為:小米10_20g、大麥10-15g、液體菌種培養(yǎng)基35-45ml。
[0010] 上述的一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基，所述的馬鈴薯汁是將馬鈴薯加水煮 熟，過濾取汁，按重量比，馬鈴薯:水=1:5-8。
[0011] 上述的一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基，所述的繭蛹汁是將繭蛹粉加水煮沸 20-40min，過濾取汁，按重量比，繭蛹粉:水=1:8-10。
[0012]上述的一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基，所述的黃豆汁是將黃豆粉加水煮沸 20-40min，過濾取汁，按重量比，黃豆粉:水=1:5-8。
[0013]上述的一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基，所述的液體菌種培養(yǎng)基中，腺嘌呤 的加入方法為，先將繭蛹汁、紅糖、蛋白胨、黃豆汁和純凈水混合后，高壓滅菌，以0.20um微 濾膜除去雜菌后加入腺嘌呤，調(diào)至質(zhì)量濃度0.8-1. Og/L。
[0014] 上述的一種提高蟲草素含量的蛹蟲草培養(yǎng)基在培養(yǎng)蛹蟲草中的應(yīng)用。方法如下：
[0015] 1)母種制作：將蛹蟲草菌種，在無菌條件下接種于PDA加富培養(yǎng)基中，置23°C恒溫 避光培養(yǎng)，待菌絲萌發(fā)后見光培養(yǎng)，獲得原始母種。
[0016] 2)液體菌種制作:取原始母種接種于液體菌種培養(yǎng)基中，23°C搖床培養(yǎng)3-5d，得液 體菌種。
[0017] 3)子實(shí)體培養(yǎng):將子實(shí)體培養(yǎng)基用聚丙烯薄膜封口，于121°C_126°C蒸汽滅菌，維 持4〇11^11-6〇1^11，按2-5%接種量將液體菌種接種于滅菌后的子實(shí)體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0018] 4)栽培管理：菌絲生長階段要求避光培養(yǎng)；當(dāng)菌絲完全吃透培養(yǎng)料后，于光強(qiáng)為 50-1001x，溫度15-25°C，空間濕度為70%-75%下，進(jìn)行弱光培養(yǎng);子實(shí)體形成后，經(jīng)8-12°C 溫差刺激，加強(qiáng)通風(fēng)，每天通風(fēng)2次-3次，每次30111；[11，于光強(qiáng)為200-50011，溫度16-20°(3，空 間濕度85 % -95 %下，培養(yǎng)40d-50d。
[0019] 本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)：
[0020] 1.本發(fā)明在液體培養(yǎng)基中添加前體物質(zhì)-腺嘌呤，能迅速地運(yùn)送到細(xì)胞中，有效的 被蛹蟲草吸收與利用，與黃豆粉、蔗糖、繭蛹粉等營養(yǎng)物質(zhì)能夠通過協(xié)同互補(bǔ)作用，有效地 提高蟲草素含量。
[0021] 2.本發(fā)明以小米、大麥為原料進(jìn)行固體培養(yǎng)方法優(yōu)化。小米營養(yǎng)豐富，成本比大米 低，但顆粒小，高壓蒸煮后粘度高，阻礙菌絲生長。大麥顆粒大，通透性強(qiáng)，與小米混合使用， 克服了小米粘度高的缺點(diǎn)，而且大麥中脂肪酸含量較高，國外大量文獻(xiàn)報(bào)道了植物油能促 進(jìn)菌絲的生長，提高蟲草素的含量。
[0022] 3.本發(fā)明的蛹蟲草生物轉(zhuǎn)化率比使用現(xiàn)有普通培養(yǎng)基及現(xiàn)有技術(shù)培養(yǎng)方法增加 25%;每lg蛹蟲草子實(shí)體中蟲草素含量為8.0-8.51^、腺苷含量為17-2111^，明顯高于使用現(xiàn) 有技術(shù)方法所培養(yǎng)得到的蛹蟲草。
[0023] 4.本發(fā)明的培養(yǎng)基成分容易得到，配制方便，成本低廉，實(shí)際應(yīng)用操作簡單，易于 推廣，適用于遼寧省蛹蟲草的規(guī)?；a(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0024]實(shí)施例1: 一種提高蟲草素含量的蛹蟲草生產(chǎn)方法 [0025] 1.蛹蟲草栽培區(qū)要求
[0026]直接與常規(guī)農(nóng)田毗鄰的食用菌栽培區(qū)必須設(shè)置大于30m的緩沖帶，以避免禁用物 質(zhì)的影響。在培養(yǎng)場地和周圍禁止使用化學(xué)合成農(nóng)藥。水源應(yīng)符合GB5749的要求。
[0027] 2.栽培基質(zhì):應(yīng)采用有機(jī)生產(chǎn)或天然材料的基質(zhì)。
[0028] 3.母種制作：將蛹蟲草菌種，在無菌條件下接種于PDA加富培養(yǎng)基中，置23°C恒溫 避光培養(yǎng)，待菌絲萌發(fā)后見光培養(yǎng)，選擇菌絲生長整齊，健壯，見光后轉(zhuǎn)色快，在顯微鏡下觀 察，菌絲粗壯、挺立的菌株為原始母種。
[0029] PDA加富培養(yǎng)基配方：馬鈴薯汁700ml、蔗糖18g，繭蛹汁300ml，奶粉90g，瓊脂15g。
[0030] 所述的馬鈴薯汁是:將馬鈴薯煮至酥而不爛，過濾取汁，按重量比，馬鈴薯:水=1: 5〇
[0031] 所述的繭蛹汁是:將繭蛹粉加水煮沸30min，過濾取汁，按重量比，繭蛹粉:水=1: 8〇
[0032] 4.液體菌種制作：取1塊8-10mm2大小的原始母鐘接種于裝有150ml液體菌種培養(yǎng) 基的三角瓶(250ml)中，23°C搖床培養(yǎng)（150r/min)3-5d終止培養(yǎng)。從培養(yǎng)第2d開始進(jìn)行逐瓶 目查，發(fā)現(xiàn)有菌液渾濁、菌絲遲遲不長或出現(xiàn)異味的即為污染菌瓶，隨后在培養(yǎng)中期要抽樣 做平板培養(yǎng)和顯微鏡檢查，以便及時發(fā)現(xiàn)有無細(xì)菌和霉菌的污染，保證菌種質(zhì)量。
[0033]所述的液體菌種培養(yǎng)基組成為：繭蛹汁200ml，紅糖10g，蛋白胨5g，黃豆汁300ml， 腺嘌呤質(zhì)量濃度〇. 8g/L，純凈水500ml。
[0034]所述的繭蛹汁是，將繭蛹粉加水，煮沸30min，過濾取汁，按重量比，繭蛹粉:水=1: 8〇
[0035]所述的黃豆汁是，將黃豆粉加水，煮沸30min，過濾取汁，按重量比，黃豆粉:水=1: 5〇
[0036] 腺嘌呤的加入方法為，先將繭蛹汁、紅糖、蛋白胨、黃豆汁和純凈水混合后，高壓滅 菌，以0.20um微濾膜除去雜菌后加入腺嘌呤，調(diào)至質(zhì)量濃度0.8g/L。
[0037] 5.子實(shí)體培養(yǎng):將子實(shí)體培養(yǎng)基用聚丙烯薄膜封口滅菌。采用121°C_126°C高壓蒸 汽滅菌，維持時間40min-60min，冷卻，按2%接種量將液體菌種接種于滅菌后的子實(shí)體培養(yǎng) 基中培養(yǎng)。
[0038] 所述的子實(shí)體培養(yǎng)基組成為：小米10g，大麥10g，步驟4)制得的液體菌種培養(yǎng)基 35ml 〇
[0039] 6.栽培管理:菌絲生長階段要求避光培養(yǎng)，當(dāng)菌絲完全吃透培養(yǎng)料后弱光培養(yǎng)，光 強(qiáng)為50-1001x，溫度15-25°C，空間濕度為70%-75% ;子實(shí)體形成后，需經(jīng)10°C左右溫差刺 激，加強(qiáng)通風(fēng)，每天通風(fēng)2次-3次，每次30min。光強(qiáng)為200-5001x，溫度16-20°C，空間濕度 85 % -95 %，培養(yǎng)40d-50d子實(shí)體成熟采摘，烘干待用。
[0040] 實(shí)施例2: -種提高蟲草素含量的蛹蟲草生產(chǎn)方法
[0041] 1.蛹蟲草栽培區(qū)要求
[0042]直接與常規(guī)農(nóng)田毗鄰的食用菌栽培區(qū)必須設(shè)置大于30m的緩沖帶，以避免禁用物 質(zhì)的影響。在培養(yǎng)場地和周圍