Sav1基因作為子宮肌瘤診治標(biāo)志物的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地設(shè)及SAV1基因在子宮肌瘤的診斷、治療中的用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 子宮肌瘤是婦科最常見的良性腫瘤，雖然大多數(shù)子宮肌瘤無明顯癥狀，且很少惡 變，不需或暫時(shí)不需治療，但有癥狀的子宮肌瘤患者，或子宮肌瘤體積大的患者是應(yīng)該治療 的，手術(shù)治療是主要的治療方法。因此，對(duì)運(yùn)些患者術(shù)前應(yīng)該診斷確切。因?yàn)樽訉m肌瘤與W 下一些疾病，包括妊娠、子宮肥大癥、子宮肉瘤、子宮慢性內(nèi)翻、子宮崎形及盆腔炎性腫塊容 易混肴，因此，需要對(duì)上述疾病進(jìn)行鑒別?，F(xiàn)有技術(shù)中用于對(duì)上述疾病進(jìn)行鑒別的方式多為 儀器檢查或者依照醫(yī)生的經(jīng)驗(yàn)，因此檢測(cè)方法存在靈敏性和特異性的缺陷。因此，需要尋找 一種能夠診斷子宮肌瘤的特異性的標(biāo)志物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可用于子宮肌瘤早期診斷 的分子標(biāo)志物。使用基因標(biāo)志物來診斷子宮肌瘤具有及時(shí)性、特異性和靈敏性，從而使患者 在疾病早期就能知曉疾病風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)風(fēng)險(xiǎn)高低，采取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施。
[0004] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0005] 本發(fā)明提供了檢測(cè)SAV1基因表達(dá)的產(chǎn)品在制備診斷子宮肌瘤的工具中的應(yīng)用。
[0006] 進(jìn)一步，所述檢測(cè)SAV1基因表達(dá)的產(chǎn)品包括檢測(cè)SAV1基因 mRNA水平的產(chǎn)品、和/或 檢測(cè)SAV1蛋白水平的產(chǎn)品。
[0007] 進(jìn)一步，所述檢測(cè)SAV1基因表達(dá)的產(chǎn)品包括:通過RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢 巧。、原位雜交或忍片檢測(cè)SAV1基因及其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)水平W診斷子宮肌瘤的產(chǎn)品。
[000引進(jìn)一步，所述用RT-PCR診斷子宮肌瘤的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增SAV1基因的引 物;所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷子宮肌瘤的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增SAV1基因的引物;所述 用免疫檢測(cè)診斷子宮肌瘤的產(chǎn)品包括:與SAV1蛋白特異性結(jié)合的抗體;所述用原位雜交診 斷子宮肌瘤的產(chǎn)品包括:與SAV1基因的核酸序列雜交的探針;所述用忍片診斷子宮肌瘤的 產(chǎn)品包括：蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括與SAV1蛋白特異性結(jié)合的抗體，基因 忍片包括與SAV1基因的核酸序列雜交的探針。
[0009] 所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷子宮肌瘤的產(chǎn)品至少包括的一對(duì)特異擴(kuò)增SAV1基因的引 物如沈Q ID NO.3和沈Q ID NO.4所示。
[0010] 所述檢測(cè)SAVl基因表達(dá)的產(chǎn)品可W是檢測(cè)SAVl基因表達(dá)的試劑、也可W是包含所 述試劑的試劑盒、忍片、試紙等，也可W是使用所述試劑的高通量測(cè)序平臺(tái)。
[0011] 所述診斷子宮肌瘤的工具包括但不限于忍片、試劑盒、試紙、或高通量測(cè)序平臺(tái)； 高通量測(cè)序平臺(tái)是一種特殊的診斷子宮肌瘤的工具，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，對(duì)一個(gè) 人的基因表達(dá)譜的構(gòu)建將成為十分便捷的工作。通過對(duì)比疾病患者和正常人群的基因表達(dá) 譜，容易分析出哪個(gè)基因的異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測(cè)序中獲知SAVl基因的異常與 子宮肌瘤相關(guān)也屬于SAV1基因的用途，同樣在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0012] 本發(fā)明還提供了一種診斷子宮肌瘤的工具，所述工具包括檢測(cè)SAV1基因表達(dá)的試 劑;所述試劑包括檢測(cè)SAV1基因 mRNA的引物和/或探針、檢測(cè)SAV1蛋白的抗體。
[0013] 所述工具包括但不限于忍片、試劑盒、試紙、或高通量測(cè)序平臺(tái)。
[0014] 其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白質(zhì)忍片;所述基因忍片包括固相載體W及固定 在固相載體的寡核巧酸探針，所述寡核巧酸探針包括用于檢測(cè)SAV1基因轉(zhuǎn)錄水平的針對(duì) SAV1基因的寡核巧酸探針;所述蛋白質(zhì)忍片包括固相載體W及固定在固相載體的SAV1蛋白 的特異性抗體;所述基因忍片可用于檢測(cè)包括SAV1基因在內(nèi)的多個(gè)基因（例如，與子宮肌瘤 相關(guān)的多個(gè)基因）的表達(dá)水平。所述蛋白質(zhì)忍片可用于檢測(cè)包括SAV1蛋白在內(nèi)的多個(gè)蛋白 質(zhì)(例如與子宮肌瘤相關(guān)的多個(gè)蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。通過將多個(gè)與子宮肌瘤的標(biāo)志物同時(shí) 檢測(cè)，可大大提高子宮肌瘤診斷的準(zhǔn)確率。
[001引其中，所述試劑盒包括基因檢測(cè)試劑盒和蛋白免疫檢測(cè)試劑盒;所述基因檢測(cè)試 劑盒包括用于檢測(cè)SAV1基因轉(zhuǎn)錄水平的試劑;所述蛋白免疫檢測(cè)試劑盒包括SAV1蛋白的特 異性抗體。進(jìn)一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交或忍片方 法檢測(cè)SAV1基因表達(dá)水平過程中所需的試劑。優(yōu)選度，所述試劑包括針對(duì)SAV1基因的引物 和/或探針。根據(jù)SAV1基因的核巧酸序列信息容易設(shè)計(jì)出可W用于檢測(cè)SAV1基因表達(dá)水平 的引物和探針。
[0016] 所述試紙包括檢測(cè)SAV1基因表達(dá)的試劑。
[0017] 所述高通量測(cè)序平臺(tái)包括檢測(cè)SAV1基因表達(dá)的試劑。
[001引與SAV1基因的核酸序列雜交的探針可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍 生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核巧酸序列特異性結(jié)合，任 何長度都可W。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個(gè)堿基長度。同樣，所述探針的長 度可長至60、80、100、150、300個(gè)堿基對(duì)或更長，甚至整個(gè)基因。由于不同的探針長度對(duì)雜交 效率、信號(hào)特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個(gè)堿基對(duì)，最長一般不超過 30個(gè)堿基對(duì)，與目的核巧酸序列互補(bǔ)的長度W15-25個(gè)堿基對(duì)最佳。所述探針自身互補(bǔ)序列 最好少于4個(gè)堿基對(duì)，W免影響雜交效率。
[0019] 進(jìn)一步，所述SAV1蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述SAV1蛋白 的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾(例如，，嵌合抗體、scFvJab、F (ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與SAV1蛋白的結(jié)合能力即可。用于蛋白質(zhì)水平的抗體 的制備時(shí)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本發(fā)明可W使用任何方法來制備所述抗體。
[0020] 在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述檢測(cè)SAV1基因 mRNA的引物包括SEQ ID NO.3和 SEQ ID NO.4所示的引物對(duì)。
[0021] 本發(fā)明還提供了 SAV1基因和/或其表達(dá)產(chǎn)物的促進(jìn)劑在制備治療子宮肌瘤的藥物 中的應(yīng)用。
[0022] 所述促進(jìn)劑包括促進(jìn)SAV1基因表達(dá)的試劑和促進(jìn)SAV1基因表達(dá)產(chǎn)物的試劑;所述 促進(jìn)SAV1基因表達(dá)的試劑包括促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄的試劑、促進(jìn)基因翻譯的試劑、促進(jìn)SAV1蛋白 含量的試劑;所述促進(jìn)SAV1基因表達(dá)產(chǎn)物的試劑包括促進(jìn)SAV1基因表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定性的試 劑、促進(jìn)SAV1基因表達(dá)產(chǎn)物活性的試劑、促進(jìn)SAV1基因表達(dá)產(chǎn)物功能的試劑。
[0023] 具體地，所述促進(jìn)SAVl基因表達(dá)的試劑包括:含有SAVl基因的試劑、攜帶SAVl基因 的載體或宿主細(xì)胞所形成的試劑、含有SAV1蛋白質(zhì)的試劑。
[0024] 本發(fā)明的促進(jìn)劑一方面可W用于補(bǔ)充內(nèi)源性的SAV1蛋白的缺失或不足，通過提高 SAV1蛋白的表達(dá)，從而治療因 SAV1蛋白缺乏導(dǎo)致的子宮肌瘤。另一方面可W用于促進(jìn)SAV1 蛋白的活性或者功能，從而治療子宮肌瘤。
[0025] 本發(fā)明所述攜帶基因的載體是本領(lǐng)域已知的各種載體，如市售的載體、包括質(zhì)粒、 粘粒、隧菌體、病毒等。
[0026] 在本發(fā)明中，術(shù)語"宿主細(xì)胞"包括原核細(xì)胞和真核細(xì)胞。常用的原核宿主細(xì)胞的 例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細(xì)胞包括酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物 細(xì)胞。較佳地，該宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞，如C冊(cè)細(xì)胞、COS細(xì)胞等。
[0027] 本發(fā)明還提供了一種用于治療子宮肌瘤的藥物組合物，所述藥物組合物包括上面 所述的SAV1基因和/或其表達(dá)產(chǎn)物的促進(jìn)劑。
[0028] 進(jìn)一步，本發(fā)明的藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體，載體，運(yùn)類載體包括(但并不 限于）：稀釋劑、賦形劑如水等、填充劑如淀粉、薦糖等;粘合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明 膠和聚乙締化咯燒酬;濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸巧和碳酸氨鋼;吸收促進(jìn)劑季錠 化合物;表面活性劑如十六燒醇;吸附載體如高嶺±和皂粘±;潤滑劑如滑石粉、硬脂酸巧 和儀、聚乙二醇等。
[0029] 本發(fā)明的藥物導(dǎo)入組織或者細(xì)胞的方式可W分為體外或者體內(nèi)的方式。體外方式 包括將含有SAV1基因的藥物或者含有SAV1蛋白質(zhì)的藥物導(dǎo)入細(xì)胞中，再將細(xì)胞移植或回輸 到體內(nèi)。體內(nèi)方式包括直接將含有SAV1基因的藥物或者含有SAV1蛋白質(zhì)的藥物注入體內(nèi)組 織中。
[0030] 本發(fā)明的藥物還可與其他治療子宮肌瘤的藥物聯(lián)用，多種藥物聯(lián)合使用可W大大 提到治療的成功率。
[0031] 在本發(fā)明的上下文中/'SAV1基因"包括SAV1基因 W及SAV1基因的任何功能等同物 的多核巧酸。SAV1基因包括與目前國際公共核酸序列數(shù)據(jù)庫GeneBank中SAV1基因（NC_ 000014.9)DNA序列具有70% W上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DM序列；
[0032 ] 優(yōu)選地，SAV1基因的編碼序列包括W下任一一種DNA分子：
[0033] (1)序列表中沈Q ID N0.1所示的DNA序列；
[0034] (2)在嚴(yán)格條件下與1)限定的DNA序列雜交且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0035] (3)與（1)或(2)限定的DNA序列具有70%、優(yōu)選地，90% W上同源性，且編碼相同功 能蛋白質(zhì)的DNA分子。
[0036] 在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述SAV1基因的編碼序列是SEQ ID N0.1所示的DNA 序列。<