靶細(xì)胞內(nèi)治療性蛋白的靶向產(chǎn)生的系統(tǒng)和方法
【專利說明】祀細(xì)胞內(nèi)治療性蛋白的祀向產(chǎn)生的系統(tǒng)和方法
[0001 ] 發(fā)明人：
[0002] 馬修.R .斯科爾茨
[0003] 奧依信生物技術(shù)公司
[0004] 2800Elliot Avenue [000引 Suite 414
[0006] Seattle,WA 98121
[0007] Lowe Gr址am Jones編號(hào)：OSIN-11-0103W001
[0008] 祀細(xì)胞內(nèi)治療性蛋白的祀向產(chǎn)生的系統(tǒng)和方法 巧009] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0010]該P(yáng)CT國際專利申請(qǐng)巧于2014年3月24日Wa提交）要求于2013年3月24日提交的 美國臨時(shí)專利申請(qǐng)第61/804,716號(hào)的權(quán)益，所述臨時(shí)專利申請(qǐng)通過引用整體并入本文。
技術(shù)領(lǐng)域
[0011]本公開總體設(shè)及醫(yī)藥領(lǐng)域，包括疾病的治療、促進(jìn)長(zhǎng)壽、抗衰老和健康推廣。更具 體地，本公開設(shè)及用于降低與衰老、疾病和其它病況相關(guān)的細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活的組合物 和方法。提供了針對(duì)祀細(xì)胞特異的治療性蛋白表達(dá)的表達(dá)構(gòu)建體，所述構(gòu)建體利用在祀細(xì) 胞內(nèi)存在的但在正常非祀細(xì)胞中不存在或大量降低的獨(dú)特的胞內(nèi)功能性，包括轉(zhuǎn)錄調(diào)控功 能性。運(yùn)類表達(dá)構(gòu)建體被用于包含用于將核酸遞送至祀細(xì)胞的載體的系統(tǒng)中，所述載體可 W包括，但不一定需要用于增強(qiáng)表達(dá)構(gòu)建體至祀細(xì)胞遞送的祀向部分。
【背景技術(shù)】
[001引相關(guān)技術(shù)的描述
[0013] 癌細(xì)胞、衰老細(xì)胞和具有不期望表型的其它細(xì)胞可隨著人生命的進(jìn)程而積聚，在 沒有適當(dāng)治療的情況下，運(yùn)類細(xì)胞可促成或甚至導(dǎo)致人的病態(tài)并最終導(dǎo)致死亡。
[0014] 衰老細(xì)胞在疾病中的作用W及消除衰老細(xì)胞的潛在益處已在諸如Baker等化ture 1^:232-6(2011)中的科學(xué)出版物中討論過。已描述了旨在解決積聚的衰老細(xì)胞問題的系 統(tǒng)和方法。例如，Grigg的PCT專利公布第W0 1992/009298號(hào)描述了用類似于肌膚的化合物 防止或逆轉(zhuǎn)細(xì)胞衰老的系統(tǒng)W及Gruber的美國專利公布第2012/0183534號(hào)描述了用福射、 超聲、毒素、抗體和抗體-毒素偶聯(lián)物殺傷衰老細(xì)胞的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括用于祀向治療性分 子的衰老細(xì)胞-表面蛋白。
[0015] 已證明衰老細(xì)胞的選擇性殺傷在除了基因修飾的實(shí)驗(yàn)室研究動(dòng)物之外的哺乳動(dòng) 物中是不實(shí)際的。當(dāng)前可用的系統(tǒng)和方法顯示出大量的系統(tǒng)毒性、祀向所關(guān)注細(xì)胞的不足 性和缺乏充分的安全性特征。本領(lǐng)域中的運(yùn)些缺點(diǎn)已阻礙了用于治療某些癌癥和用于減緩 衰老作用的安全且有效療法的發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 本公開基于W下發(fā)現(xiàn):細(xì)胞，如與衰老、疾病和/或另外的病況相關(guān)的細(xì)胞(統(tǒng)稱為 "祀細(xì)胞"）能夠W祀細(xì)胞特異的方式被選擇性殺傷而無需將治療劑祀向遞送至祀細(xì)胞。本 文所述的表達(dá)構(gòu)建體、系統(tǒng)和方法克服與使用治療劑的祀向遞送的目前技術(shù)相關(guān)的安全性 和功效問題，所述技術(shù)已經(jīng)在有需要的患者中產(chǎn)生有限的治療益處。
[0017] 如本文所述，本公開提供了 W祀細(xì)胞特異的方式誘導(dǎo)編碼蛋白質(zhì)的核酸表達(dá)的表 達(dá)盒、系統(tǒng)和方法，當(dāng)在細(xì)胞中產(chǎn)生時(shí)，所述蛋白降低或消除細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活，如所述 細(xì)胞是與衰老、疾病和/或其它病況相關(guān)的細(xì)胞。
[0018] 本文所述的表達(dá)盒、系統(tǒng)和方法利用與衰老（如衰老細(xì)胞）、疾病(如癌癥、傳染性 疾病和細(xì)菌疾病）W及其它病況相關(guān)的某些細(xì)胞所固有的獨(dú)特的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機(jī)制，所述轉(zhuǎn)錄 調(diào)節(jié)機(jī)制在與衰老、疾病或其它病況無關(guān)的正常細(xì)胞（即，"非祀細(xì)胞"）中不可操作或顯示 出大量降低的活性。
[0019] 由于祀細(xì)胞提供的且對(duì)于祀細(xì)胞特有的胞內(nèi)功能性，本公開的表達(dá)盒、系統(tǒng)和方 法實(shí)現(xiàn)高度的祀細(xì)胞特異性，正常的非祀細(xì)胞不提供所述胞內(nèi)功能性，或所述胞內(nèi)功能性 在正常非祀細(xì)胞中大量降低。因此，本公開的系統(tǒng)和方法使用對(duì)細(xì)胞類型非特異的核酸遞 送載體，核酸被遞送至所述細(xì)胞類型，實(shí)際上，本文所述的載體無需被配置成祀細(xì)胞特異的 核酸遞送(例如，表達(dá)盒）W實(shí)現(xiàn)祀細(xì)胞特異性W及因此，產(chǎn)生治療上有效的降低、防止和/ 或消除祀細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活。
[0020] 在某些實(shí)施方式中，本公開提供了用于祀細(xì)胞內(nèi)治療性蛋白的祀向產(chǎn)生的表達(dá)構(gòu) 建體，所述祀細(xì)胞如與衰老、疾病和/或另外的病況相關(guān)的細(xì)胞。本文公開的表達(dá)構(gòu)建體包 含：（1)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子，其響應(yīng)于一種或多種因子而被激活，所述因子中的每一種在祀細(xì)胞內(nèi) 產(chǎn)生；W及(2)核酸，其可操作地連接于轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子且在所述轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)控制下，其 中所述核酸編碼能夠降低、防止和/或消除包括所述祀細(xì)胞在內(nèi)的細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活的 治療性蛋白。
[0021] 在運(yùn)些實(shí)施方式的某些方面內(nèi)，轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子在與疾病、病況或衰老相關(guān)的祀細(xì)胞 中被激活，但在與疾病、病況或衰老無關(guān)的正常哺乳動(dòng)物細(xì)胞中未被激活。祀細(xì)胞特異的轉(zhuǎn) 錄激活通過在祀細(xì)胞中產(chǎn)生但不在正常哺乳動(dòng)物細(xì)胞中產(chǎn)生的一種或多種因子的作用來 實(shí)現(xiàn)，所述正常哺乳細(xì)胞包括正常的人類細(xì)胞，如正常骨骼肌成肌細(xì)胞、正常脂肪細(xì)胞、正 常眼部細(xì)胞、正常腦細(xì)胞、正常肝細(xì)胞、正常結(jié)腸細(xì)胞、正常肺細(xì)胞、正常膜腺細(xì)胞和/或正 常屯、肌細(xì)胞，所述正常細(xì)胞與疾病、病況或衰老無關(guān)。
[0022] 在運(yùn)些實(shí)施方式的其它方面中，祀細(xì)胞可為哺乳動(dòng)物細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞。祀向哺乳 動(dòng)物細(xì)胞可包括人類細(xì)胞，如衰老細(xì)胞、癌細(xì)胞、癌前細(xì)胞、發(fā)育異常細(xì)胞和被傳染劑感染 的細(xì)胞。
[0023] 在運(yùn)些實(shí)施方式的某些方面，其中人類祀細(xì)胞為衰老細(xì)胞，轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子可包括 pl6INK4a/CDKN2A轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子，其響應(yīng)于諸如SPUETS1和/或ETS2的轉(zhuǎn)錄因子的激活。在運(yùn) 些實(shí)施方式的其它方面，其中人類祀細(xì)胞為衰老細(xì)胞，轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子可包括p21/CDKN1A轉(zhuǎn)錄 啟動(dòng)子，其響應(yīng)于P53/TP53。在諸如衰老細(xì)胞的祀細(xì)胞中，轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子誘導(dǎo)編碼治療性蛋白 的核酸進(jìn)行表達(dá)，所述治療性蛋白諸如例如CASP3、CASP8、CASP9、BAX、DFF40、HSV-TK和胞喀 晚脫氨酶W及〔45?3、〔45?8、〔45?9、84乂、0。。40、冊(cè)￥-1'1(和胞喀晚脫氨酶的可誘導(dǎo)變體，所述 治療性蛋白通過諸如例如經(jīng)由細(xì)胞過程(包括調(diào)亡)誘導(dǎo)衰老細(xì)胞的細(xì)胞死亡來降低、防止 和/或消除衰老細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活。可w使用通過例如經(jīng)由細(xì)胞過程誘導(dǎo)細(xì)胞死亡來降 低、防止和/或消除衰老細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活的其它治療性蛋白，所述細(xì)胞過程包括壞死/ 壞死性調(diào)亡、自體吞隧的細(xì)胞死亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的細(xì)胞毒性、有絲分裂障礙、類調(diào)亡 (paraptosis)、細(xì)胞焦亡（pyroptosis)、焦壞死（pyronecrosis )和細(xì)胞侵入性死亡 (entosifs)。
[0024] 在運(yùn)些實(shí)施方式的其它方面，其中人類祀細(xì)胞為癌細(xì)胞，如腦癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì) 胞、肺癌細(xì)胞、結(jié)腸直腸癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、血液癌癥細(xì)胞和骨癌細(xì)胞，轉(zhuǎn)錄啟 動(dòng)子可包括p2!ciPi/wafi啟動(dòng)子、p27kipi啟動(dòng)子、p57kiP 2啟動(dòng)子、TdT啟動(dòng)子、Rag-1啟動(dòng)子、B29 啟動(dòng)子、B化啟動(dòng)子、CD 19啟動(dòng)子、BLNK啟動(dòng)子和/或λ5啟動(dòng)子，所述轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子響應(yīng)于一種 或多種轉(zhuǎn)錄因子的激活，所述轉(zhuǎn)錄因子如EBF3、0/Ε-1、化Χ-5、Ε2Α、Ρ 5 3、VP16、Μa、HSFl、NF-比6、冊(cè)41'1、4?-1、4?-2、冊(cè)乂、62。3和/或^-1〇6轉(zhuǎn)錄因子，并且所述轉(zhuǎn)錄激活誘導(dǎo)編碼治療 性蛋白的核酸進(jìn)行表達(dá)，所述治療性蛋白諸如例如CASP3、CASP8、CASP9、BAX、DFF40、服V-TK 或胞喀晚脫氨酶W及〔45?3、〔45?8、〔45?9、84乂、0。。40、冊(cè)￥-1'1(和胞喀晚脫氨酶的可誘導(dǎo)變 體，所述治療性蛋白通過諸如例如經(jīng)由細(xì)胞過程(包括調(diào)亡)誘導(dǎo)衰老細(xì)胞的細(xì)胞死亡來降 低、防止和/或消除衰老細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活?？蒞使用通過例如經(jīng)由細(xì)胞過程誘導(dǎo)細(xì)胞 死亡來降低、防止和/或消除衰老細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活的其它治療性蛋白，所述細(xì)胞過程 包括壞死/壞死性調(diào)亡、自體吞隧的細(xì)胞死亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的細(xì)胞毒性、有絲分裂障礙、 類調(diào)亡、細(xì)胞焦亡、焦壞死和細(xì)胞侵入性死亡。
[0025] 在運(yùn)些實(shí)施方式的其它方面，其中祀細(xì)胞為被傳染劑感染的人類細(xì)胞，所述傳染 劑如病毒，包括例如瘤疹病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、肝炎病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、流感病毒和鼻病 毒，或祀細(xì)胞為細(xì)菌細(xì)胞，轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子可被傳染劑或細(xì)菌細(xì)胞表達(dá)的因子激活，所述轉(zhuǎn)錄激 活誘導(dǎo)編碼治療性蛋白的核酸進(jìn)行表達(dá)，所述治療性蛋白諸如例如CASP3、CASP8、CASP9、 ΒΑΧ、DFF40、HSV-TK 和胞喀晚脫氨酶 W 及 CASP3、CASP8、CASP9、ΒΑΧ、DFF40、HSV-TK 和胞喀晚 脫氨酶的可誘導(dǎo)變體，所述治療性蛋白通過諸如例如經(jīng)由細(xì)胞過程(包括調(diào)亡)誘導(dǎo)衰老細(xì) 胞的細(xì)胞死亡來降低、防止和/或消除衰老細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活。可W使用通過例如經(jīng)由 細(xì)胞過程誘導(dǎo)細(xì)胞死亡來降低、防止和/或消除衰老細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活的其它治療性蛋 白，所述細(xì)胞過程包括壞死/壞死性調(diào)亡、自體吞隧的細(xì)胞死亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的細(xì)胞毒 性、有絲分裂障礙、類調(diào)亡、細(xì)胞焦亡、焦壞死和細(xì)胞侵入性死亡。
[0026] 在其它實(shí)施方式中，本公開提供了祀細(xì)胞內(nèi)治療性蛋白的祀向產(chǎn)生的系統(tǒng)。運(yùn)些 系統(tǒng)包括能夠?qū)⒑怂徇f送至細(xì)胞(包括祀細(xì)胞W及非祀細(xì)胞)的載體，其中載體包含祀細(xì)胞 (例如，與衰老、疾病或其它病況相關(guān)的細(xì)胞）內(nèi)而不是非祀細(xì)胞內(nèi)的治療性蛋白的祀向產(chǎn) 生的表達(dá)構(gòu)建體，其中表達(dá)構(gòu)建體包含響應(yīng)于一種或多種因子而被激活的轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子，所 述因子中的每一種在所述祀細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生；W及核酸，其可操作地連接于轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子且在轉(zhuǎn) 錄啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)控制下，其中核酸編碼運(yùn)樣的治療性蛋白，其能夠降低、防止和/或消除產(chǎn) 生治療性蛋白的細(xì)胞(包括祀細(xì)胞)的生長(zhǎng)和/或存活。
[0027] 在運(yùn)些實(shí)施方式的其它方面，系統(tǒng)還包括一個(gè)或多個(gè)安全性特征，所述安全性特 征允許諸如例如通過需要使祀細(xì)胞與除了促進(jìn)表達(dá)構(gòu)建體內(nèi)啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄激活或促進(jìn)治 療性蛋白的功能性的胞內(nèi)因子之外的化學(xué)或生物化合物接觸，如通過促進(jìn)CASP3、CASP8、 〔八5?9、84乂、0。。40、冊(cè)￥-11(和胞喀晚脫氨酶的二聚化^及可誘導(dǎo)變體來另外控制表達(dá)構(gòu)建 體內(nèi)核酸的表達(dá)或該核酸編碼的治療性蛋白的功能性。
[0028] 可W在本公開的表達(dá)構(gòu)建體和系統(tǒng)中使用的另外的安全性元件包含利用針對(duì)哺 乳動(dòng)物表達(dá)使用pDEST26質(zhì)粒的Life Technologies Gateway克隆載體系統(tǒng)化ife Technologies Gateway Cloning Vector System)的他莫昔芬-可誘導(dǎo)的Cre構(gòu)建體。例如， 化e和雌激素受體的融合蛋白可被組成型表達(dá)，并在添加他莫昔芬時(shí)被誘導(dǎo)，運(yùn)允許激活的 化e重定向轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子，從而表達(dá)治療性蛋白。
[0029] 在運(yùn)些實(shí)施方式的其它方面，系統(tǒng)還可W包含編碼諸如生物發(fā)光標(biāo)志物的可檢測(cè) 標(biāo)志物的核酸，從而允許鑒別表達(dá)治療性蛋白的細(xì)胞，并且在可誘導(dǎo)的治療性蛋白，如可誘 導(dǎo)的CASP3XASP8或CASP9的情況下，通過施用促進(jìn)治療性蛋白的活性的化合物，如通過誘 導(dǎo)可誘導(dǎo)的CASP3、CASP8或CASP9的二聚化而殺傷細(xì)胞。
[0030] 在另外的實(shí)施方式中，本公開提供了用于降低、防止和/或消除祀細(xì)胞生長(zhǎng)的方 法，所述方法包括使祀細(xì)胞與祀細(xì)胞內(nèi)治療性蛋白的祀向產(chǎn)生的系統(tǒng)接觸，其中所述系統(tǒng) 包括能夠?qū)⒑怂徇f送至細(xì)胞的載體，其中所述載體包含祀細(xì)胞(例如，與衰老、疾病或其它 病況相關(guān)的細(xì)胞）內(nèi)而不是非祀細(xì)胞內(nèi)治療性蛋白的祀向產(chǎn)生的表達(dá)構(gòu)建體，其中表達(dá)構(gòu) 建體包含：（a)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子，其響應(yīng)于一種或多種因子而被激活，所述因子中的每一種在祀 細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生；W及(b)核酸，其可操作地連接于所述轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子且在所述轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的調(diào)節(jié) 控制下，其中所述核酸編碼治療性蛋白，所述治療性蛋白在核酸表達(dá)時(shí)產(chǎn)生，并且其中祀細(xì) 胞（即，與衰老、疾病或其它病況相關(guān)的細(xì)胞）內(nèi)產(chǎn)生的治療性蛋白降低、防止和/或消除祀 細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活。
[0031] 在另外的實(shí)施方式中，本公開提供了治療人類衰老或患有疾病或另外病況的人的 方法，其中衰老、疾病或另外的病況與人體內(nèi)的祀細(xì)胞相關(guān)，所述方法包括向人施用用于祀 細(xì)胞內(nèi)治療性蛋白的祀向產(chǎn)生的系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)包括能夠?qū)⒑怂徇f送至細(xì)胞的載體， 其中所述載體包含祀細(xì)胞(例如，與衰老、疾病或其它病況相關(guān)的細(xì)胞）內(nèi)而不是非祀細(xì)胞 內(nèi)的治療性蛋白的祀向產(chǎn)生的表達(dá)構(gòu)建體，其中表達(dá)構(gòu)建體包含：（a)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子，其響應(yīng) 于一種或多種因子而被激活，所述因子中的每一種在祀細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生；W及(b)核酸，其可操 作地連接于所述轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子且在所述轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)控制下，其中所述核酸編碼治療性 蛋白，所述治療性蛋白在核酸表達(dá)時(shí)產(chǎn)生，并且其中祀細(xì)胞（即，與衰老、疾病或其它病況相 關(guān)的細(xì)胞）內(nèi)產(chǎn)生的治療性蛋白降低、防止和/或消除祀細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或存活，從而減緩人 類衰老和/或減緩、逆轉(zhuǎn)和/或消除人類疾病或病況。
[0032] 根據(jù)下述附圖和詳述應(yīng)更好地理解本公開的運(yùn)些和其它相關(guān)方面，所述附圖和詳 述例示了多個(gè)實(shí)施方式的某些方面。
【附圖說明】
[0033] 圖1為包含示例性表達(dá)盒的質(zhì)粒的示意圖，其中啟動(dòng)子序列為pl6轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子(來 自Baker等，化化re 479(7372): 232-67(2011))并且編碼治療性蛋白的核酸編碼可誘導(dǎo)的 半脫天冬酶9變體FCls.d化sp9。
[0034]圖2為示例性表達(dá)盒的示意圖，其中啟動(dòng)子序列為pl6轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子(來自Baker等， 化ture 479(7372) :232-67(2011))并且編碼治療性蛋白的核酸編碼半脫天冬酶9(不可誘 導(dǎo)的）。該表達(dá)盒包含另外的安全性元件，其包含他莫昔芬-可誘導(dǎo)的化e構(gòu)建體。
[0035] 圖3為包含示例性表達(dá)盒的質(zhì)粒的示意圖，其中啟動(dòng)子序列為pl6轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子(來 自Baker等，化化re 479(7372): 232-67(2011))并且編碼治療性蛋白的核酸編碼半脫天冬 酶9(不可誘導(dǎo)的）。該實(shí)施方式包含另外的安全性元件，其包含使用針對(duì)哺乳動(dòng)物表達(dá)利用 PDEST26質(zhì)粒的Life Technologies Gateway克隆載體系統(tǒng)的他莫昔芬-可誘導(dǎo)的Cre構(gòu)建 體。Cre和雌激素受體的融合蛋白被組成型表達(dá)的，并在添加他莫昔芬時(shí)被誘導(dǎo)，運(yùn)允許激 活的化e重定向pl6-啟動(dòng)子，從而表達(dá)半脫天冬酶9。
[0036] 圖4為包含示例性表達(dá)盒的質(zhì)粒的示意圖，其中啟動(dòng)子序列為pl6轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子(來 自Baker等，化化re 479(7372): 232-67(2011))并且編碼治療性蛋白的核酸編碼可誘導(dǎo)的 半脫天冬酶9變體FCls. d化sp9。該實(shí)施方式包含另外的安全性元件，其包含使用針對(duì)哺乳 動(dòng)物表達(dá)利用PDEST26質(zhì)粒的Life化chnologies Gateway克隆載體系統(tǒng)的他莫昔芬-可誘 導(dǎo)的he構(gòu)建體。Cre和雌激素受體的融合蛋白被組成型表達(dá)，并在添加他莫昔芬時(shí)被誘導(dǎo)， 運(yùn)允許激活的化eW重定向pl6-啟動(dòng)子，從而表達(dá)可誘導(dǎo)的半脫天冬酶9變體FCls.d化sp9。
[0037] 圖5為在圖 1-4中顯示的且在Baker等的化ture 479(7372): 232-67(2011)和Wang 等的J Biol化em 276