.5,4.5)，H-ll(3.01，d，J = 2.5)，H-12(3.36，d，J = 2.5)，H-16 (0.91，d，J=7.5)，H-17(1.07，s)，H-18(0.93，s)，H-19(0.79，s)，H-20(1·ll，s)，H-2' (8.05，d，J = 7.0)，H-3'（7.44，t，J = 7.0)，H-4'（7.52，t，J = 7.0)，H-5'（7.44，t，J = 7.0)， H-6'（8.05，d，J = 7.0)，9-OH(4.55，d，J = 4.5)，ll-OH(5.36，s)，12-OH(5.34，s)，15-OH (6.45,8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)5。（？？111，0130-(1 6，1251泡）：42.3(〇12，1-〇,35.7(〇1，2-〇， 78.4(CH，3-C)，54.1(CH，4-C)，212.3(C，5-C)，49.0(C，6-C)，31.8(CH2,7-C)，29.2(CH2,8-C)，79.5(CH，9-C)，38.8(C，10-C)，79.3(CH，11-C)，70.1(CH，12-C)，56.0(C，13-C)，208.1 (C，14-C)，85.1(C，15-C)，16.2(CH 3，16-C)，18.9(CH3，17-C)，25.1(CH3，18-C)，14.7(CH3， 19-C)，10.5(CH3,20-C)，131.1(C，1'-C)，130.2(CH，2'-C)，129.3(CH，3'-C)，133.5(CH，4'-〇，129.3(01，5'-〇，130.2(01，6'-〇，167.2((：，7'-〇 ;碳原子標記參見圖1。紅外光譜表明 該化合物含有羥基（3583,3502和3378cm-羰基（1708和1689cm-4和芳環(huán)（1605和1496cm -1)基團。4 NMR譜顯示該化合物含有一個苯甲?；糠枝摩?.05 (2H，d，J = 7. OHz，H-2 '和!1-6'），7.52(1!1，^ = 7.0抱，!1-4'）和7.44(2!1，^ = 7.0抱，!1-3'和!1-5'）；四個含氧次甲基5 H5.69(t，J = 5.0Hz，H-3)，3.37(dd，J = 9.5,4.5Hz，H-9)，3.01(d，J = 2.5Hz，H-llWP3.36 ((1，了 = 2.5他，!1-12);五個甲基3!10.91((1，了 = 7.5!^，!13-16)，1.07(!13-17)，0.93(!13-18)， 0.79(H3-19)和1.11 (H3-20)。除了苯甲?；糠?，13C NMR和DEPT譜顯示20個碳信號，除了對 應上述的功能單元外還包括六個季碳(兩個羰基碳SC212.3，208.1和一個含氧碳SC85.1)。 根據(jù)核磁數(shù)據(jù)分析表明該化合物是一個雙萜醇苯甲酸酯類化合物。HMBC譜中，H 2-l與C-2， C-3，C-4，C-15和C-16;H-3與C-1，C-15和C-7' ；H3-16與C-l，C-2和C-3;0H-15與C-4和C-14的 相關(guān)性，以及結(jié)合這些質(zhì)子和共振碳的化學位移，表明該化合物含有一個連有甲基和苯甲 酰片段的五元環(huán)，此外C-15位連有一個羥基基團。通過HMBC譜中H-4與C-5和C-6;H 3-17與C-5，C-6 和 C-13 ;H3-20 與 C-6，C-13 和 C-14; 0H-15 與 C-14 的相關(guān)性，可知 1，4-環(huán)己二酮通過 C-4 和C-15與五元環(huán)相連，且C-6和C-13位連有兩個甲基。此外，H-9和Η-ll與C-18和C-19;H-11 與 C-12 和 C-13;H-12 與 C-13 和 C-20;H3-17 與 C-7;H3-18 和 H3-19 與 C-9，C-10 和 C-ll;H3-20 與 C-12;0H-9與C-9和C-10的相關(guān)性表明八元環(huán)通過C-6和C-13與六元環(huán)相連，C-9，C-11和C-12位各連有一個羥基，以及C-10位連有兩個甲基。N0ESY譜中，H-12與H 3-19的相關(guān)性表明它 們?yōu)闃?gòu)型。此外，H-3與H-2和H-4;H-4與H-2，H-3和H3-17;H-9與Η-ll和H 3-18的相關(guān)性表明 這些質(zhì)子為α-構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)， 可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本 一致(圖2)。
[0036]實施例2:化合物(I)藥理作用試驗
[0037] -、材料和儀器
[0038] 前列腺癌細胞株P(guān)C3(ArCC-CRL-1435)、前列腺癌細胞株DU145(ATCC-HTB-81)。化 合物⑴自制，HPLC歸一化純度大于98%，用二甲基亞礬(DMS0)配制成濃度為1.0g/L的儲存 液備用。CCK-8試劑盒為日本同仁化學研究所產(chǎn)品。RPMI-1640培養(yǎng)基購自Gibco公司。胎牛 血清(FBS)購自Hyelone公司。青/鏈霉素為上海先鋒藥業(yè)產(chǎn)品。胰蛋白酶購自華美生物工程 公司。二甲基亞砜(DMS0)購自上海華舜生物工程公司。瓊脂(Agarose)、二硫蘇糖醇(DTT)、 苯甲基磺酞氟(PMSF)、四甲基乙二胺(TEMED)為Sigma公司產(chǎn)品。十二烷基磺酸鈉(SDs)、三 氯甲基烷基甲燒(1'1^8)1'1^8-!1(31、1'1'；[1：01^-100為?1'0111683公司產(chǎn)品。丙稀酞胺、過硫酸錢 (AP)購于蘇州化學試劑廠產(chǎn)品。
[0039] C02細胞培養(yǎng)箱(ShellLab)，倒置相差顯微鏡(Nikon)，超凈工作臺（蘇州凈化設備 廠），流式細胞儀（BD)，F(xiàn)039300A型酶標儀（Sunrise)，高壓蒸汽滅菌器（Hirayama HA-300MD)，低溫超速離心機(Kubota 3740)，萬向搖床(江蘇麒麟醫(yī)用儀器廠TS-92)，電泳儀 (Gibco公司），LXJ-n型離心機(上海醫(yī)用分析儀器廠），DK600型電熱恒溫水浴箱(上海精密 試驗設備公司），電子天平(METTLER TOLEDO)，臺式干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）， 紫外分光光度儀(Beckman)。
[0040] 二、試驗方法
[0041] 1、細胞培養(yǎng)與養(yǎng)護
[0042] 1.1細胞培養(yǎng)
[0043]細胞株培養(yǎng)于腫瘤醫(yī)院中心實驗室。培養(yǎng)于含10 %胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基 中，另添加谷氨酞胺(2mmo 1/L)和抗生素（100U/青霉素和lOOmg/L鏈霉素），置37°C、飽和濕 度、含5 % C〇2氣體的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0044] 1.2細胞傳代
[0045]①于倒置相差顯微鏡下觀察細胞長滿貼壁，即可傳代。傳代前用75%酒精擦拭經(jīng) 過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。②用吸管吸去培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)液，用PBS清洗3次。③ 加入0.02 %EDTA-0.25%胰蛋白酶液2mL進行消化，靜置約5分鐘，并不時在倒置相差顯微鏡 下觀察，當胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片時，加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止胰蛋白 酶的作用。④用滴管將已經(jīng)消化的細胞吹打成細胞懸液，吸入10mL離心管中平衡離心（1000 轉(zhuǎn)/分)5分鐘。⑤棄去上清液，加入2mL培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液，1:2~3 分裝入新培養(yǎng)瓶，添加培養(yǎng)液適量于孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
[0046] 2、細胞形態(tài)學觀察
[0047] 倒置顯微鏡觀察：將對數(shù)生長期PC3和DU145細胞接種于6cm培養(yǎng)皿，培養(yǎng)24h后加 入10.Omg · Γ1，化合物（I)處理24,48，72h后分別在倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)改變并 記錄。
[0048] 3、細胞毒試驗(CCK-8法）
[0049] ①培養(yǎng)瓶中的細胞消化成單細胞懸液，細胞計數(shù)后按照3 X104個細胞/孔接種于 96孔板，每孔加0. lmL培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)于37°C、含5 %C02氣體的培養(yǎng)箱中。②試驗分組:設 陰性對照組(有細胞但不加藥，0.1%DMS0)，空白對照組(無細胞僅有培養(yǎng)液），化合物（I)分 別2 · 5mg/L，5 · 0mg/L，10 · 0mg/L和20 · 0mg/L共6組。③24小時后觀察細胞貼壁生長良好，分別 按上述試驗分組向96孔板內(nèi)加藥，每組設6-8個重復孔。④加藥后將96孔板移入37°C、含5% C02氣體的培養(yǎng)箱中繼續(xù)分別培養(yǎng)24、48和72小時。⑤每組試驗結(jié)束時每孔加入CCK-810yL， 37°C培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時后酶標儀檢測450每孔的吸光度(0D)值，測定波長為450nm，參 考波長為600nm。⑥按照以下公式計算出細胞存活率(cell viability)，然后繪