37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 3) 48 h后吸出藥液，用PBS洗板2次，加入5 mg /mL的MTT溶液20 μL和新鮮基礎培養(yǎng)基 180 yL;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)； 4) 4 h后，棄去含有MTT的培養(yǎng)液，加入150 yL DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min， 490nm波長處測定光密度值并計算抑制率： 癌細胞生長抑制率(％) = ((對照組0D-空白組0D)-(給藥組0D-空白組0D ))/((對照組 0D-空白組0D ) )X100 應用實施例1 取腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人正常肝細胞L02各100 uL細胞懸液(5X104個/mL)加 至96孔板中，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入終體 積為200 yL含有100 yg/mL的十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR樣品的DMEM基礎培養(yǎng)基，并以DMEM 為陰性對照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用PBS洗板2次，加入5 mg / mL的MTT溶液20 μL和新鮮基礎培養(yǎng)基180 yL;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng);4 h后， 棄去含有MTT的培養(yǎng)液，加入150 μL DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長處測 定光密度值并計算抑制率。由表1可知，100 yg/mL的十六肽對腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人 正常肝細胞L02的抑制率分別是28.96%、35.33%和5.78%。
[0019] 表1
應用實施例2 取腫瘤細胞MCF-7和！fepG-2及人正常肝細胞L02各100 uL細胞懸液(5X104個/mL)，加 至96孔板中，于37 °C恒溫⑶2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入終體 積為200yL含有200 yg/mL的十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR樣品的DMEM基礎培養(yǎng)基，并以DMEM為 陰性對照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用roS洗板2次，加入5 mg /mL 的MTT溶液20 μL和新鮮基礎培養(yǎng)基180 uL;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng);4 h后，棄 去含有MTT的培養(yǎng)液，加入150 μL DMSO后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長處測定 光密度值并計算抑制率。由表1可知，，200 yg/rnL的多肽對腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人正 常肝細胞L02的抑制率分別是32.26%、42.86%和10.57%。
[0020] 應用實施例3 取腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人正常肝細胞L02各100 uL細胞懸液(5X104個/mL)加 至96孔板中，于37 °C恒溫⑶2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入終體 積為200 yL含有300 yg/mL的十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR樣品的DMEM基礎培養(yǎng)基，并以DMEM 為陰性對照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用roS洗板2次，加入5 mg / mL的MTT溶液20 μL和新鮮基礎培養(yǎng)基180 yL;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng);4 h后， 棄去含有MTT的培養(yǎng)液，加入150 μL DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長處測 定光密度值并計算抑制率。由表1可知，300 yg/rnL的十六肽對腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人 正常肝細胞L02的抑制率分別是44.85%、52.21%和16.88%。
[0021] 應用實施例4 取腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人正常肝細胞L02各100 uL細胞懸液(5X104個/mL)加 至96孔板中，于37 °C恒溫⑶2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入終體 積為200 yL含有400 yg/mL的十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR樣品的DMEM基礎培養(yǎng)基，并以DMEM 為陰性對照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用roS洗板2次，加入5 mg / mL的MTT溶液20 yL和新鮮基礎培養(yǎng)基180 yL;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng);4 h后， 棄去含有MTT的培養(yǎng)液，加入150 yL DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長處測 定光密度值并計算抑制率。由表1可知，400 yg/rnL的多肽對腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人正 常肝細胞L02的抑制率分別是50.24%、58.95%和20.22%。
[0022] 應用實施例5 取腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人正常肝細胞L02各100 uL細胞懸液(5X104個/mL)加 至96孔板中，于37 °C恒溫⑶2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入終體 積為200 yL含有500 yg/mL的十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR樣品的DMEM基礎培養(yǎng)基，并以DMEM 為陰性對照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用roS洗板2次，加入5 mg / mL的MTT溶液20 yL和新鮮基礎培養(yǎng)基180 yL;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng);4 h后， 棄去含有MTT的培養(yǎng)液，加入150 yL DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長處測 定光密度值并計算抑制率。由表1可知，500 yg/rnL的多肽對腫瘤細胞MCF-7和HepG-2及人正 常肝細胞L02的抑制率分別是54.52%、61.36%和22.8%。
【主權項】
1. 一種十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR，其特征在于，該十六肽的分子量為1846.8613，氨基 酸序列為 Gln-Thr-Asp-Asp-Asn-His-Ser-Asn-Val-Leu-Trp-Ala-Gly-Phe-Ser-Argo2. 如權利要求1所述的一種十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR，其特征在于，所述十六肽在濃 度為lOO-SOOpg/mL時，對乳腺癌細胞MCF-7和肝癌細胞HepG-2的體外增殖抑制率分別為 28·96%-54·52%和35·33%-61·36%。3. 如權利要求1所述的一種十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR，其特征在于，所述十六肽在濃 度為SOOpg/mL時，對乳腺癌細胞MCF-7和肝癌細胞HepG-2的體外增殖抑制率分別為54.52% 和61.36%。4. 如權利要求1所述的一種十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR，其特征在于，所述十六肽在濃 度為lOO-SOOpg/mL時，對人正常肝細胞L02的體外增殖抑制率為5.78%-22.8%。5. 如權利要求1所述的一種十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR，其特征在于，所述十六肽在濃 度為50〇tig/mL時，對人正常肝細胞L02的體外增殖抑制率為22.8%。6. 權利要求1~5任一項所述十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR在制備生物醫(yī)藥中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種十六肽QTDDNHSNVLWAGFSR及其應用，該十六肽的氨基酸序列為Gln-Thr-Asp-Asp-Asn-His-Ser-Asn-Val-Leu-Trp-Ala-Gly-Phe-Ser-Arg，分子量為1846.8613，純度為95%。本發(fā)明的多肽使用多肽合成儀，采用固相合成法合成。通過體外抗腫瘤活性檢測，在100-500μg/mL梯度范圍內，本發(fā)明的多肽對乳腺癌細胞MCF-7和肝癌細胞HepG-2均呈現出了抑制效果。在500μg/mL時，對MCF-7和？HepG-2的體外增殖抑制率分別為54.52%和61.36%。本發(fā)明的合成多肽具有體外抗腫瘤活性，可應用于生物制藥領域。
【IPC分類】A61K38/10, C07K7/08, A61P35/00
【公開號】CN105524142
【申請?zhí)枴緾N201610070848
【發(fā)明人】范曉丹, 張學武, 白露
【申請人】華南理工大學
【公開日】2016年4月27日
【申請日】2016年1月31日