西蘭花多肽提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及西蘭花多肽提取物領(lǐng)域，具體涉及一種西蘭花多肽提取物及其制備方 法和在制備增強(qiáng)免疫力保健食品和藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 西蘭花(Brassica oleracea L.var.botrytis L)又名青花菜，為十字花科蕓薹屬 一二年生植物，被譽(yù)為"蔬菜皇冠"，內(nèi)含豐富的生物活性物質(zhì)，其中包括蘿卜硫素、多糖等抗 腫瘤活性物質(zhì)和多酚、黃酮等多種抗氧化活性物質(zhì)，且蛋白和氨基酸含量也較高，具有非常 高的食用和藥用保健價(jià)值。
[0003] 國外已有研究證明蘿卜硫素具有提高免疫力的功能。美國《營養(yǎng)學(xué)》雜志也刊登了 西蘭花能有效預(yù)防前列腺癌的研究成果。Shapiro TA等人通過臨床實(shí)驗(yàn)比較西蘭花芽提取 物中的葡糖異硫氰酸鹽、蘿卜硫苷以及萊菔硫烷異硫氰酸鹽的安全性、耐受性及在體內(nèi)的代 謝，但人們現(xiàn)在對(duì)于蘿卜硫素等異硫氰酸酯的報(bào)道主要是分析檢測(cè)、抗癌機(jī)理研究等方面。 有關(guān)西蘭花抗癌作用的報(bào)道還有黃酮這一活性成分，周向軍等報(bào)道從Br 〇CC〇lini(西蘭花 與中國芥蘭的雜交品種)葉中提取的黃酮可抑制人類腫瘤細(xì)胞株SW480、HepG2、Hela和A459 等的增殖，并能誘導(dǎo)SW480細(xì)胞株的凋亡，因此西蘭花黃酮很可能也具有體外抗腫瘤活性。
[0004] 許多多肽因?yàn)榫哂袕?qiáng)化人體免疫的功能而成為療效顯著的臨床藥物，如胰島素、 生長激素、釋放抑制素 Somatostatin、腦活素多肽疫苗等，起到了過去的藥品對(duì)付現(xiàn)代病毒 所取不到的功能。榮建華研究了大豆多肽對(duì)小鼠免疫功能的影響，其結(jié)果表明大豆多肽能 顯著增加小鼠免疫器官的重量，增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能，還有些證據(jù)表明大豆多肽可 以防治腫瘤，對(duì)腫瘤的生長有一定的抑制作用。
[0005] 增強(qiáng)免疫力已成為當(dāng)今人們?nèi)找嬷匾暤囊粋€(gè)保健問題，但有關(guān)將西蘭花多肽分離 增強(qiáng)免疫力方面的研究還很少有文獻(xiàn)報(bào)道。隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展變革、人類疾病譜的改變 和老齡化社會(huì)的到來，亞健康人群約占成年人的75 %-80 %，要求醫(yī)療模式由單純的傳統(tǒng)疾 病治療向預(yù)防、保健、康復(fù)與治療相結(jié)合的現(xiàn)代醫(yī)療模式轉(zhuǎn)變，從生病治病為主向治"未病" 為主轉(zhuǎn)變。利用西蘭花增強(qiáng)免疫力的多肽開發(fā)新型免疫康復(fù)藥物、保健食品、化妝品和食品 添加劑類產(chǎn)品服務(wù)于人類健康事業(yè)具有十分巨大的發(fā)展?jié)摿Α?br>[0006] 為了測(cè)試和評(píng)估本發(fā)明西蘭花多肽提取物的增強(qiáng)免疫力方面的應(yīng)用潛力，已使用 本專業(yè)技術(shù)人員所熟悉的方法測(cè)試西蘭花多肽提取物的生物活性。這些已知的測(cè)試方法包 括小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、小鼠左右耳腫脹度差、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)等。結(jié)果表明本發(fā)明提 取的西蘭花多肽提取物活性組分具有較好的增強(qiáng)免疫力作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種西蘭花多肽提取物及其制備方法和在制備增強(qiáng)免疫力 保健食品和藥物中的應(yīng)用，通過特定制備方法得到的西蘭花多肽提取物，具有較好的增強(qiáng) 免疫力作用。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及西蘭花多肽提取物及其制備方法， 它是通過以下方法制備得到：
[0009] -種西蘭花多肽提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0010] (1)取西蘭花莖葉，先采用復(fù)合酶酶解（即進(jìn)行酶解預(yù)處理），然后采用堿提，再分 離、沉淀、洗滌、干燥得到西蘭花蛋白粉；
[0011] ⑵取步驟（1)制備得到的西蘭花蛋白粉，加入水，在溫度45~60°C、PH8.5~10條 件下，再加入堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行進(jìn)一步酶解，滅酶，冷卻，離心，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮 后冷凍干燥，得到西蘭花多肽酶解物；
[0012] (3)取步驟(2)制備得到的西蘭花多肽酶解物，用濾膜超濾后進(jìn)行葡聚糖凝膠柱分 離，以磷酸鹽水溶液作為洗脫液洗脫，收集洗脫液，過濾，蒸干，經(jīng)收集干燥，得到西蘭花多 肽提取物。
[0013] 以下作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案：
[0014] 步驟(1)中，所述的復(fù)合酶由質(zhì)量比0.5~1.5:1的果膠酶與纖維素酶復(fù)配而成。進(jìn) 一步優(yōu)選，所述的復(fù)合酶由質(zhì)量比1:1的果膠酶與纖維素酶復(fù)配而成。
[0015] 所述的復(fù)合酶酶解，包括:在復(fù)合酶中加入水，形成酶解液，復(fù)合酶的質(zhì)量與酶解 液的體積之比1~5g:100mL，之后將西蘭花莖葉放入酶解液進(jìn)行酶解。進(jìn)一步優(yōu)選，復(fù)合酶 的質(zhì)量與酶解液的體積之比2.5g: 1 OOmL。
[0016] 所述的酶解的條件為：酶解溫度50°C~70°C，酶解時(shí)間2h~4h。進(jìn)一步優(yōu)選，酶解 溫度60°C，酶解時(shí)間3h。
[0017] 所述的堿提的條件為:pH 7.5-9.0，堿提時(shí)間1-21!。
[0018] 所述的分離、沉淀、洗滌包括:在4000~6000r/min下離心10~20min，調(diào)節(jié)上清液 pH于等電點(diǎn)pi沉淀蛋白，棄去上清液，水洗沉淀，并調(diào)節(jié)pH至6.5~7.5，進(jìn)一步優(yōu)選，在 5000r/min下離心15min，調(diào)節(jié)上清液pH于等電點(diǎn)pi沉淀蛋白，棄去上清液，水洗沉淀三次， 并調(diào)節(jié)pH=7.0。
[0019] 步驟(2)中，所述的西蘭花蛋白粉的質(zhì)量與水的體積之比為0.5g~2g:20mL，進(jìn)一 步優(yōu)選，所述的西蘭花蛋白粉的質(zhì)量與水的體積之比為lg:20mL。
[0020] 所述的堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的質(zhì)量比為0.5~2:1，進(jìn)一步優(yōu)選，所述的堿性 蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的質(zhì)量比為1:1。
[0021] 所述的堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的總添加量為西蘭花蛋白粉質(zhì)量的1.0%~ 5.0%〇
[0022]所述的進(jìn)一步酶解的酶解時(shí)間為2~4h。
[0023]步驟(3)中，所述的濾膜采用德國賽多利斯生產(chǎn)的型號(hào)為Vivaf low 50的超濾膜。 [0024]所述的磷酸鹽水溶液的pH為2~6。所述的洗脫的條件為：以上樣量100mg計(jì)，流速 10~20mL/h，進(jìn)一步優(yōu)選，以上樣量100mg計(jì)，流速15mL/h。
[0025]本發(fā)明第二個(gè)方面涉及對(duì)所述西蘭花多肽提取物用于制備增強(qiáng)免疫力作用保健 品和藥物的用途，可用于制備增強(qiáng)免疫力保健食品和藥物。
[0026]為了檢測(cè)本發(fā)明所得的增強(qiáng)免疫力作用的性能，將本發(fā)明所得的增強(qiáng)免疫力西蘭 花組分配置成100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg藥液，用于小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、小鼠左右 耳腫脹度差、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)等。結(jié)果表明西蘭花多肽提取物具有顯著的增強(qiáng)免疫力作用， 可用于制備增強(qiáng)免疫力功能的保健食品或抗腫瘤等疾病的輔助藥物。
[0027] 本發(fā)明的第三個(gè)方面涉及提供西蘭花多肽提取物與藥學(xué)上可接受的輔料組成的 藥物組合物。
[0028] 西蘭花多肽提取物可單獨(dú)或幾種部位組合，進(jìn)一步與輔料組合，劑型包括：片劑、 膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑等。
[0029] 本發(fā)明所述的載體和賦形劑包括藥劑學(xué)常規(guī)應(yīng)用的載體和賦形劑，例如溶劑、崩 解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。
[0030] 下面的實(shí)施例和藥理活性實(shí)驗(yàn)是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步詳細(xì)說明，以下所列舉的實(shí)施 例不以任何方式構(gòu)成限制。
[0031] 西蘭花多肽提取物經(jīng)過反復(fù)多次的增強(qiáng)免疫力作用驗(yàn)證，確認(rèn)西蘭花多肽提取物 具有明顯的增強(qiáng)免疫力作用，如小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、小鼠左右耳腫脹度差、小鼠碳廓 清實(shí)驗(yàn)等，表明西蘭花多肽提取物具有良好的增強(qiáng)免疫力作用，具有開發(fā)的潛力。
[0032] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0033] 本發(fā)明采用酶解加堿法提取西蘭花蛋白后，再采用酶法制備西蘭花多肽粗提物， 并對(duì)西蘭花多肽提取物的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，在提取前和提取后分別采用酶法和層析法 對(duì)西蘭花多肽及其活性組分進(jìn)行了處理和精制，進(jìn)一步提高西蘭花多肽提取物的得率，其 工藝簡單、得率高;設(shè)備簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0034] 圖1為實(shí)施例1中Sephadex G-25分離小肽效果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 實(shí)施例1西蘭花多肽提取物的制備
[0036] (1)取西蘭花莖葉，先進(jìn)行酶解預(yù)處理，用果膠酶(諾維信（中國）生物技術(shù)有限公 司）與纖維素酶(諾維信（中國）生物技術(shù)有限公司）按質(zhì)量比1:1復(fù)配，形成復(fù)合酶，然后加 入水，形成酶解液，復(fù)合酶的質(zhì)量與酶解液的體積之比2.5g: 100mL，即酶添加總量2.5% (w/ v)，將西蘭花莖葉放入酶解液進(jìn)行酶解，酶解溫度60°C，酶解時(shí)間3h，然后調(diào)pH 8-8.