4 (v c-n)，796(tc-h，芳環(huán) C-H 面外彎曲振動(dòng)）；MS(70eV)m/z(%):266(M+，61)，251(39)，223 (79) 〇
[0028] 實(shí)施例3化合物的抗蟲活性試驗(yàn)
[0029] 1)供試蟲源
[0030]供試害蟲為蘿卜 Iij牙 Lipaphiserysimi(Kaltenbach)和紫薇長(zhǎng)斑!^Tinoca Iliskahawaluokalani(Kikaldy)，蘿卜姐采自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)溫室種植的甘藍(lán)上，紫薇長(zhǎng)斑蟲牙 采自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)紫薇樹葉上。
[0031] 2)試驗(yàn)方法
[0032]蘿卜蚜:采用噴霧法，測(cè)定供試殺蟲劑對(duì)蚜蟲的毒力效果。以0.1%TritonX-100水 溶液為對(duì)照，試驗(yàn)時(shí)母液用〇. I%TritonX-100水溶液稀釋成所需要的系列濃度梯度。噴霧 采用Potter噴霧塔，將未接觸過(guò)藥劑的甘藍(lán)葉片放置在噴霧塔中并用相應(yīng)濃度進(jìn)行噴霧， 然后將葉片上即刻接入無(wú)翅成蚜和個(gè)體較大的無(wú)翅若蚜，每處理15頭蚜蟲，重復(fù)3次。等葉 片晾干后放入直徑5cm培養(yǎng)皿中并擰緊蓋口，置于溫度為25±1°C，光周期為16:8h(L:D)的 培養(yǎng)箱內(nèi)。24h后檢查死亡率。檢查時(shí)用毛筆輕輕撥動(dòng)蟲體，不能動(dòng)即視為死亡。
[0033]紫薇長(zhǎng)斑蚜:采用噴霧法，測(cè)定供試殺蟲劑對(duì)蚜蟲的毒力效果。以0.1 %TritonX-100水溶液為對(duì)照，試驗(yàn)時(shí)母液用0.1%TritonX-100水溶液稀釋成所需要的系列濃度梯度。 噴霧采用Potter噴霧塔，將未接觸過(guò)藥劑的紫薇葉片放置在噴霧塔中并用相應(yīng)濃度進(jìn)行噴 霧，然后將葉片上即刻接入無(wú)翅成蚜和個(gè)體較大的無(wú)翅若蚜，每處理15頭蚜蟲，重復(fù)3次。等 葉片晾干后放入直徑5cm培養(yǎng)皿中并擰緊蓋口，置于溫度為25±1°C，光周期為16:8h(L:D) 的培養(yǎng)箱內(nèi)。24h后檢查死亡率。檢查時(shí)用毛筆輕輕撥動(dòng)蟲體，不能動(dòng)即視為死亡。
[0034]本發(fā)明對(duì)吡啶基嘧啶類化合物的抗蟲活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1和表2。 [0035]表1化合物I和II對(duì)蘿卜蚜蟲的抑制活性
[0037] 表1中，CK為空白對(duì)照，a陽(yáng)性對(duì)照為噻蟲嗪。由表1可知，200mg/L的供試濃度下化 合物I和II對(duì)蘿卜蚜蟲的抑制活性分別為100%和95.6%，于是對(duì)化合物I和II的抗蟲效果做 了進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究，以紫薇長(zhǎng)斑蚜為供試試蟲，采用噴霧法，測(cè)試了不同的供試濃度下的 抗蟲效果，其結(jié)果見(jiàn)表2。
[0038]表2化合物I和II對(duì)紫薇長(zhǎng)斑蚜蟲的抑制活性
[0040] 表2中，CK為空白對(duì)照，a陽(yáng)性對(duì)照為噻蟲嗪。由表2可知，化合物I和II對(duì)紫薇長(zhǎng)斑 蚜蟲具有較好的致死效果。抗蟲實(shí)驗(yàn)表明，化合物I和化合物II均具有較好的抗蟲效果。陽(yáng) 性對(duì)照噻蟲嗪合成需要多步，所需成本較高。本專利以天然產(chǎn)物為原料，較為經(jīng)濟(jì)便捷地合 成了具有抗蟲活性的化合物，擴(kuò)展了其應(yīng)用價(jià)值。
[0041] 實(shí)施例4化合物的抑菌活性試驗(yàn)
[0042] 1)供試菌種
[0043] 大腸桿菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(S.aureus)、枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、白 色念珠菌(C. albicans)、黑曲霉(A.niger)、熱帶假絲酵母(G. tropical is)均由南京林業(yè)大 學(xué)化學(xué)工程學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。
[0044] 2)培養(yǎng)基的制備
[0045] 細(xì)菌培養(yǎng)用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（NA培養(yǎng)基）的制備：稱取牛肉膏5 . Og，蛋白胨 10.Og，葡萄糖I.Og，NaCl 5.Og，瓊脂18.Og，蒸餾水1000 mL，加熱溶解，用10%NaOH溶液調(diào)pH 至7.0~7.2，本實(shí)驗(yàn)省略過(guò)濾，分裝于三角瓶中，分別塞上棉花塞，在1.05kg · cnf2、121°C下 滅囷20min后備用。
[0046]真菌培養(yǎng)用馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基）的制備:稱取200g洗凈并去皮 的馬鈴薯丁置于1000 mL水中，煮沸30min后，用4層紗布過(guò)濾，再加入20.0 g葡萄糖和18. Og瓊 月旨，加熱融化后再補(bǔ)足水至1000 mU分裝于三角瓶中，分別塞上棉花塞，在121°C下滅菌 20min后備用。
[0047] 3)菌懸液的制備
[0048]將測(cè)試用細(xì)菌和真菌分別接種于無(wú)菌的NA和PDA平板培養(yǎng)基上。細(xì)菌于35°C下培 養(yǎng)24h;真菌于28°C下培養(yǎng)72h。用接種針?lè)謩e挑取少許已活化的菌體置于裝有無(wú)菌生理鹽 水的試管中，振蕩搖勻，配成一系列IO 6~IO7CFU · ml/1的菌懸液。
[0049] 4)最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定
[0050] 最低抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration，MIC)米用二倍稀釋法測(cè)定。 具體操作如下：
[0051] 先將第2孔到第12孔加入75yL無(wú)菌水，再將待測(cè)化合物和陽(yáng)性對(duì)照品酮康唑及阿 米卡星分別用DMSO配成500yg/mL的溶液150yL加入第1孔，將化合物和陽(yáng)性對(duì)照溶液分別在 96孔分析板上進(jìn)行二倍稀釋，從第1到第12孔配成一系列的濃度梯度(500yg/mL~0.244yg/ mL)，每孔含75yL溶液，以純的DMSO作為參照，然后向每個(gè)孔中加入75yL預(yù)先配好的菌懸液， 充分混勻。最后將96孔分析板置于30°C培養(yǎng)箱中，細(xì)菌培養(yǎng)24h，真菌培養(yǎng)48h后觀察，使用 酶標(biāo)儀測(cè)定96孔板在600nm波長(zhǎng)下的OD值，理論依據(jù)是在600nm波長(zhǎng)下的OD值與菌體濃度呈 正相關(guān)的線性關(guān)系。
[0052] 本發(fā)明對(duì)吡啶基嘧啶類化合物的抑菌活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
[0053] 表3化合物I和II的最低抑菌濃度(MIC)
[0055] 3陽(yáng)性對(duì)照(positivecontrol):細(xì)菌為阿米卡星，真菌為酮康挫。
[0056] 從表3數(shù)據(jù)可知，化合物I和II對(duì)大腸桿菌(E · coIi )、金黃色葡萄球菌(S· aureus)、 枯草芽孢桿菌(B. subtilis)、白色念珠菌(C.albicans)、黑曲霉(A.niger)、熱帶假絲酵母 (G.tropicalis)等具有很好的抑制活性能力，在制備真菌、細(xì)菌的殺菌劑或抑制劑中將有 廣泛的用途。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 化晚基喀晚類化合物，其特征在于，該化合物為5，6，7，8-四氨-4-(3/-化晚基)-7，7-二甲基-6，8-橋亞甲基哇挫嘟-2-胺，結(jié)構(gòu)式為：或，5，6，7，8-四氨-4-(少-化晚基）-7，7-二甲基-6，8-橋亞甲基哇挫嘟-2-胺，結(jié)構(gòu)式 為：2. 權(quán)利要求1所述的化晚基喀晚類化合物的合成方法，其特征在于，包括W下步驟： 1) 諾羨酬與3-化晚甲醒進(jìn)行徑醒縮合，得到3-(3^-化晚)亞甲基諾羨酬； 2) 3-(3^-化晚）亞甲基諾羨酬與鹽酸脈在控溫條件和堿催化條件下得到5,6,7,8-四 氨-4-( 3/ -化晚基)-7，7-二甲基-6，8-橋亞甲基哇挫嘟-2-胺。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化晚基喀晚類化合物的合成方法，其特征，包括W下步驟： 1) 將O.lmol諾羨酬、0.1~0.2mol的3-化晚甲醒、1.0~3.0g叔下醇鐘和30~50mL乙醇 依次加入配有攬拌器、溫度計(jì)和回流冷凝器的Ξ口燒瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下在0~l〇〇°C范圍 內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)； 2) 反應(yīng)物用0.1~0.化乙酸乙醋萃取3次，合并萃取液，用蒸饋水洗涂至中性，然后再用 飽和食鹽水洗涂1次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鋼干燥去水份;過(guò)濾去除干燥劑后濃縮回收溶劑， 得到3-(3/ -化晚)亞甲基諾羨酬； 3) 3-(3^-化晚)亞甲基諾羨酬在甲醇溶劑中進(jìn)行重結(jié)晶，得到精制3-(3^-化晚）亞甲基 諾羨酬； 4) 將O.Olmol的3-(3^-化晚）亞甲基諾羨酬、0.02mol鹽酸脈、60~90mL叔下醇和3.0g叔 下醇鐘依次加入配有攬拌器和回流冷凝器的單口燒瓶中，回流反應(yīng)2-化，用GC跟蹤檢測(cè)，直 到3-(3^-化晚)亞甲基諾羨酬轉(zhuǎn)化率達(dá)到95%后停止反應(yīng)； 5) 反應(yīng)物用0.5~1.化乙酸乙醋萃取3次，合并萃取液，用蒸饋水洗涂至中性，然后再用 飽和食鹽水洗涂1次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鋼干燥去水份;過(guò)濾去除干燥劑后濃縮回收溶劑， 得到5，6，7，8-四氨-4-(3/ -化晚基)-7，7-二甲基-6，8-橋亞甲基哇挫嘟-2-胺粗產(chǎn)物;化晚 基喀晚粗產(chǎn)物在甲醇溶劑中進(jìn)行重結(jié)晶，得到精制5，6，7，8-四氨-4-(3/ -化晚基)-7，7-二 甲基-6，8-橋亞甲基哇挫嘟-2-胺。4. 權(quán)利要求1所述的化晚基喀晚類化合物的合成方法，其特征在于，包括W下步驟： 1) 諾羨酬與4-化晚甲醒進(jìn)行徑醒縮合，得到3-(少-化晚)亞甲基諾羨酬； 2) 3-(少-化晚）亞甲基諾羨酬與鹽酸脈在控溫條件和堿催化條件下得到5,6,7,8-四 氨-4-(少-化晚基)-7，7-二甲基-6，8-橋亞甲基哇挫嘟-2-胺。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化晚基喀晚類化合物的合成方法，其特征，包括W下步驟： 1) 將0.1mol諾羨酬、0.1~0.2mol的4-化晚甲醒、1.0~3. Og叔下醇鐘和30~50mL乙醇 依次加入配有攬拌器、溫度計(jì)和回流冷凝器的Ξ口燒瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下在0~l〇〇°C范圍 內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)； 2) 反應(yīng)物用0.1~0.化乙酸乙醋萃取3次，合并萃取液，用蒸饋水洗涂至中性，然后再用 飽和食鹽水洗涂1次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鋼干燥去水份;過(guò)濾去除干燥劑后濃縮回收溶劑， 得到3-(少-化晚)亞甲基諾羨酬粗產(chǎn)物； 3) 3-(少-化晚)亞甲基諾羨酬粗產(chǎn)物在甲醇溶劑中進(jìn)行重結(jié)晶，得到精制3-(少-化晚） 亞甲基諾羨酬； 4) 將O.Olmol的3-(少-化晚)亞甲基諾羨酬、0.02mol鹽酸脈、60~90mL叔下醇和3.0g叔 下醇鐘依次加入配有攬拌器和回流冷凝器的單口燒瓶中，回流反應(yīng)2-化，用GC跟蹤檢測(cè)，直 到3-(少-化晚)亞甲基諾羨酬轉(zhuǎn)化率達(dá)到95%后停止反應(yīng)； 5) 反應(yīng)物用0.5~1.化乙酸乙醋萃取3次，合并萃取液，用蒸饋水洗涂至中性，然后再用 飽和食鹽水洗涂1次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鋼干燥去水份;過(guò)濾去除干燥劑后濃縮回收溶劑， 得到5，6，7，8-四氨-4-(少-化晚基)-7，7-二甲基-6，8-橋亞甲基哇挫嘟-2-胺粗產(chǎn)物;粗產(chǎn) 物在甲醇溶劑中進(jìn)行重結(jié)晶，得到精制5,6,7,8-四氨-4-(少-化晚基)-7,7-二甲基-6,8-橋 亞甲基哇挫嘟-2-胺。6. 權(quán)利要求1所述的化晚基喀晚類化合物在制備殺蟲劑中的應(yīng)用。7. 權(quán)利要求1所述的化晚基喀晚類化合物在制備抑菌劑或殺菌劑中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了吡啶基嘧啶類化合物及其合成方法與應(yīng)用。合成方法為：諾蒎酮在堿催化作用下與吡啶甲醛進(jìn)行羥醛縮合反應(yīng)，得到吡啶亞甲基諾蒎酮；吡啶亞甲基諾蒎酮再與鹽酸胍進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)，得到吡啶基嘧啶類化合物，所合成的化合物具有較好的殺蟲活性和抗菌活性，具有廣泛的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A01P1/00, A01P7/04, C07D401/04, A01P3/00
【公開號(hào)】CN105541795
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610097307
【發(fā)明人】楊益琴, 張齊, 徐徐, 王石發(fā), 徐海軍, 楊金來(lái), 孫楠, 丁志斌, 張燕, 匡洪波, 谷文
【申請(qǐng)人】南京林業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年2月22日