偶氮苯衍生物及其制法和藥物組合物與用圖
【專利說(shuō)明】偶氮苯衍生物及其制法和藥物組合物與用途 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及式I所示的偶氮苯衍生物，其可藥用鹽，其水合物和溶劑化物，其多晶 和共晶，其同樣生物功能的前體或衍生物，及其制備方法，含有一個(gè)或多個(gè)這化合物的組合 物，和該類化合物在治療與炎癥疾病，免疫失調(diào)和腫瘤疾病方面的用途。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease, IBD)是一類病因尚不十分明確的慢 性非特異性腸道炎癥性疾病，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外IBD的發(fā)病率均呈上升趨勢(shì)。IBD的發(fā)病機(jī)制比 較復(fù)雜，環(huán)境、遺傳、感染、免疫等因素可能都參與了疾病的發(fā)生過(guò)程，多種細(xì)胞因子參與了 腸道過(guò)度的免疫反應(yīng)和致病進(jìn)程。
[0004] 原發(fā)性IBD如克隆病（CD)和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC)在臨床上 其典型癥狀和體征來(lái)源于腸道強(qiáng)烈的、細(xì)胞因子驅(qū)動(dòng)的（非感染性）炎癥反應(yīng)。UC和CD有 一些相似的臨床表現(xiàn)，并且有10% -15%的病例并不能很好的在這兩種疾病中做出區(qū)分。 但兩者在疾病的特征以及損傷部位上還是存在著區(qū)別。
[0005] 此外，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)IBD患者存在著血小板形態(tài)和功能的異常，表現(xiàn)為血小板 體積縮小，活化增加，促炎和促血栓作用增強(qiáng)，在IBD粘膜損傷中起重要作用。血栓形成和 炎癥是緊密聯(lián)系的進(jìn)程，因此在IBD的致病機(jī)理和疾病的復(fù)雜化上也有著一定的作用。在 IBD患者的腸系膜血管中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了血小板激活反應(yīng)以及血小板-白細(xì)胞凝集反應(yīng)的增 加，并有血小板聚集的發(fā)生。在UC患者中，血小板.白細(xì)胞聚集物（PLA)在腸系膜靜脈血 中的含量超過(guò)了在動(dòng)脈血中的含量，UC患者中腸系膜靜脈循環(huán)中PLA的增加證明了被激活 的脈管內(nèi)皮細(xì)胞激活了 PLA的形成。
[0006] 細(xì)胞因子（cytokine，CK)是具有活性的多肽類或糖蛋白類物質(zhì)，由免疫細(xì)胞分 泌，在機(jī)體的免疫應(yīng)答中具有重要作用。11-1、11^-6、11^-8、腫瘤壞死因子（丨11111(^116(^〇818 factor，TNF)是公認(rèn)能介導(dǎo)UC發(fā)病的促炎細(xì)胞因子，IL-4、IL 一 10具有抗炎作用。UC患 者的腸黏膜中抗炎CK水平下降，促炎CK水平升高，且升高的水平與UC的嚴(yán)重程度呈正相 關(guān)，免疫調(diào)節(jié)失衡的持久性促使炎癥慢性化。研究發(fā)現(xiàn)TNF-β、IL-1、IL-6誘發(fā)的腸道炎 癥反應(yīng)主要通過(guò)誘導(dǎo)以IL-8為代表的趨化因子而實(shí)現(xiàn)。在UC中IL-4對(duì)淋巴細(xì)胞和巨噬 細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，抑制單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1 β和TNF-α，同時(shí)下調(diào)活化的單核巨 噬細(xì)胞分泌氧自由基，該作用存在劑量效應(yīng)關(guān)系。IL-10主要抑制單核巨噬細(xì)胞使其失活 從而抑制CK表達(dá)。UC患者IL-10的循環(huán)水平很高，能夠下調(diào)IL-2、干擾素 IFN- γ等促炎 CK。IBD患者的IL-22具有促炎作用，其作用于結(jié)腸上皮的肌纖維母細(xì)胞，能促進(jìn)炎癥前細(xì) 胞因子和基質(zhì)降解分子的表達(dá)。IL-13可增強(qiáng)上皮細(xì)胞的凋亡、降低細(xì)胞間緊密連接、減緩 上皮細(xì)胞重建速度，過(guò)量產(chǎn)生能損害上皮細(xì)胞屏障作用。UC患者血清中TNF-α、IL_8的濃 度明顯增高，且與病情呈正相關(guān)。TNF-a可激活患者的上皮細(xì)胞，誘導(dǎo)趨化因子并促使中性 粒細(xì)胞在結(jié)腸黏膜炎癥區(qū)域聚集，刺激炎癥細(xì)胞分泌IL-8 ;而IL-17在腸道炎性CK的產(chǎn)生 過(guò)程中起重要作用。UC患者腸道病變固有層單核細(xì)胞分泌的IL-6和IL-8濃度明顯高于非 病變部位，IL-6濃度與該部位黏膜固有層分泌的IL-17濃度呈正比關(guān)系，抗IL-17抗體能 否有效抑制IL-6和IL-8的分泌作用與抗體劑量有關(guān)。
[0007] 巨嗤細(xì)胞游走抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF)能產(chǎn) 生大量TNF-α、IL_li3、IL_6細(xì)胞因子，在體外可抑制外周巨噬細(xì)胞隨意運(yùn)動(dòng)，體內(nèi)可增強(qiáng) 巨噬細(xì)胞聚集能力，造成腸道黏膜損傷。MIF在嚴(yán)重UC患者血清中濃度明顯增高。轉(zhuǎn)化生 長(zhǎng)因子（transforming growth factor, TGF) - β 1是一種抗炎性CK，可調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分 化，抑制淋巴細(xì)胞的功能和增殖，抑制巨噬細(xì)胞激活，促進(jìn)上皮損傷后修復(fù)及基質(zhì)蛋白合成 與分泌。
[0008] 腸道炎癥主要是由于T細(xì)胞反應(yīng)亢進(jìn)，引起腸道黏膜免疫系統(tǒng)對(duì)腸道共生菌產(chǎn)生 高反應(yīng)性。患者的結(jié)腸黏膜中可以檢測(cè)到樹突狀細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、 肥大細(xì)胞等。UC患者組織中TLR2、TLR4表達(dá)量顯著增高并產(chǎn)生更多的IL-12、IL-6。研究 表明UC活動(dòng)性炎癥的程度和結(jié)腸黏膜樹突狀細(xì)胞DCs浸潤(rùn)的頻率顯著關(guān)聯(lián)。T淋巴細(xì)胞作 為最重要的免疫調(diào)節(jié)劑是免疫反應(yīng)中抗原呈遞的核心環(huán)節(jié)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在UC發(fā)病機(jī)制 中也起著重要作用。腸上皮細(xì)胞IECs通過(guò)將抗原提呈給T細(xì)胞并通過(guò)分泌CK和化學(xué)增活 素對(duì)入侵細(xì)菌作出免疫應(yīng)答，IECs可能通過(guò)其表面的TLRs促進(jìn)腸道局部炎癥的發(fā)展。
[0009] 自然殺傷T細(xì)胞NKT是一類表達(dá)NK細(xì)胞表面分子NK1. 1和T-細(xì)胞受體（Tcell receptor，TCR)-⑶3復(fù)合物的T細(xì)胞亞群.非典型性NKT細(xì)胞介導(dǎo)的非典型Th2反應(yīng)是UC 發(fā)病的重要原因之一.
[0010] 細(xì)胞黏附分子CAM是一類位于細(xì)胞膜表面的與UC有密切關(guān)系的受體型跨膜糖蛋 白分子，參與炎癥和免疫反應(yīng)，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)問(wèn)黏附傳遞信息以及促 進(jìn)淋巴細(xì)胞歸巢。細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡（programmed cell death, P⑶），是影響 UC患者腸黏膜損傷和免疫紊亂的重要機(jī)制之一，是細(xì)胞接受刺激信號(hào)后的一種主動(dòng)、由凋 亡相關(guān)基因控制的細(xì)胞程序性死亡方式。上皮細(xì)胞凋亡加速和炎癥細(xì)胞凋亡減慢同時(shí)存在 是造成UC炎癥持續(xù)的重要原因。IBD腸黏膜病變部位的T細(xì)胞凋亡減少使活性T細(xì)胞不能 及時(shí)清除而大量聚集，產(chǎn)生針對(duì)自身腸組織的免疫反應(yīng)。
[0011] PPAR-Y高表達(dá)于脂肪組織中，參與脂肪細(xì)胞的分化和調(diào)節(jié)胰島索應(yīng)答；其次為 結(jié)腸組織（主要表達(dá)于上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞），在胃、小腸，肝臟、胰腺以及軟骨、皮膚、神經(jīng) 膠質(zhì)細(xì)胞、氣管上皮細(xì)胞和腎臟巾呈低水平表達(dá)。大多數(shù)組織中，PPAR-Yl mRNA的表達(dá)高 于PPAR- γ 3mRNA，僅脂肪組織為PPAR- γ 2mRNA高表達(dá)，PPAR- γ 3mRNA的表達(dá)局限于結(jié)腸上 皮和脂肪組織。
[0012] PPAR-γ的天然配體包括長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸、花生四烯酸代謝產(chǎn)物如15-脫 氧-Λ 12,14-前列腺素 J2(15d-PGJ2)等，人工合成配體包括噻唑烷二酮類（羅格列酮、曲 格列酮、吡格列酮等）、部分非甾體消炎藥（NSAIDs)、L-酪氨酸源性化合物。細(xì)胞核內(nèi)的 PPAR-γ與另一核受體維甲酸X受體（RXR)結(jié)合形成異二聚體。無(wú) PPAR-γ配體存在時(shí)， 該異二聚體與共抑制因子結(jié)合.處于失活狀態(tài)而不能與DNA結(jié)合；PPAR-γ與其配體結(jié)合 而激活后.共抑制因子的位置為轉(zhuǎn)錄共激活因子所取代.異二聚體與靶基因啟動(dòng)子區(qū)的序 列特異性PPAR反應(yīng)元件（PPRE)結(jié)合，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。此外.PPAR-γ激活后還能以非 DNA結(jié)合的方式，如抑制NF-KB、STAT、NFAT等轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性而調(diào)控靶基因表達(dá)。
[0013] PPAR-Y1在腸上皮細(xì)胞、固有層巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中均有表達(dá)。已發(fā)現(xiàn)UC患者 炎癥和非炎癥黏膜PPAR- Y mRNA表達(dá)均顯著下調(diào)，與CD患者和正常人相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義。PPAR- γ表達(dá)障礙在不同UC疾病活動(dòng)狀態(tài)下有一定差異。研究顯示活動(dòng)期UC患者直腸 組織PPAR- γ mRNA表達(dá)較緩解期UC患者顯著下調(diào).并與內(nèi)鏡下疾病活動(dòng)度相關(guān)，Pr〇12AIa 為PPAR-γ基因的常見多態(tài)性位點(diǎn)，研究證實(shí)該位點(diǎn)突變（CCA-GCA)可降低PPAR-γ基因 啟動(dòng)子活性。多項(xiàng)研究試圖發(fā)現(xiàn)Pr 〇12AIa多態(tài)性與UC的關(guān)系.結(jié)果均顯示其與UC的發(fā) 生風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)。表明UC患者結(jié)盲腸組織PPAR-γ表達(dá)障礙并非由基因水平的變異所致。
[0014] 除通過(guò)與靶基因啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，以抑制促炎細(xì)胞因子表達(dá)外， PPAR- γ激活還可通過(guò)抑制NF-kB、STAT、NFAT等的轉(zhuǎn)錄括性以抑制腸道炎癥