一種細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置及方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置及方法。
【背景技術(shù)】
[0002]動物體內(nèi)的脂肪組織是決定動物產(chǎn)品生產(chǎn)性能及其肉的品質(zhì)的主要因素。按照脂肪在動物體內(nèi)分布位置的不同，脂肪組織可以分為皮下脂肪、內(nèi)臟脂肪和肌內(nèi)脂肪，不同部位脂肪沉積主要來自于前體脂肪細(xì)胞的增殖和分化。隨著對動物發(fā)育規(guī)律的不斷研究和認(rèn)識，人們發(fā)現(xiàn)動物體內(nèi)的前體脂肪細(xì)胞可以分化為成熟脂肪細(xì)胞，而成熟脂肪細(xì)胞還可以去分化為前體脂肪細(xì)胞，甚至可以向肌肉細(xì)胞，成骨細(xì)胞進行轉(zhuǎn)化。
[0003]將同一動物的脂肪細(xì)胞和其它細(xì)胞在同一培養(yǎng)液中共培養(yǎng)，可以更好的模擬動物體內(nèi)環(huán)境，便于更好地觀察細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與培養(yǎng)環(huán)境之間的相互作用以及探討藥物的作用機制和可能作用的靶點，填補了單層細(xì)胞培養(yǎng)的整體動物實驗的鴻溝。針對于此，現(xiàn)有技術(shù)中已公開利用兩種細(xì)胞浮力的差異在培養(yǎng)瓶中進行共培養(yǎng)的方法，稱為“天花板”法。但該培養(yǎng)方法存在明顯的缺點，一是耗費較大，需要將整個培養(yǎng)瓶都充滿細(xì)胞培養(yǎng)液，容易造成浪費;二是培養(yǎng)過程瓶口蓋子必須擰緊，否則液體會漏出，不利于細(xì)胞培養(yǎng)過程中氣體內(nèi)外交換;三是操作過程中容易出現(xiàn)漏液，加大了細(xì)胞污染的危險。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置及方法，發(fā)明提供的細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置不僅提供了一種將不同浮力細(xì)胞共同培養(yǎng)的方法，成本低、氣體交換好、細(xì)胞污染風(fēng)險小，還能夠?qū)崿F(xiàn)動物細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的模擬，使實驗環(huán)境更接近于體內(nèi)狀態(tài)，從而提高細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與培養(yǎng)環(huán)境之間的相互作用以及探討藥物的作用機制和可能作用的靶點結(jié)果的精準(zhǔn)性與可信度。
[0005]本發(fā)明提供了一種細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置，包括培養(yǎng)瓶(I)和設(shè)置在培養(yǎng)瓶(I)內(nèi)的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養(yǎng)瓶(I)側(cè)壁相接，所述隔板(2)平行于培養(yǎng)瓶瓶底(4)。
[0006]優(yōu)選的是，所述隔板與培養(yǎng)瓶除瓶口方向的三側(cè)側(cè)壁相接。
[0007]優(yōu)選的是，所述隔板將培養(yǎng)瓶內(nèi)空間隔為上部的氣體交換空間和下部的細(xì)胞培養(yǎng)空間，所述細(xì)胞培養(yǎng)空間的體積與所述氣體交換空間的體積之比為4:1?1:1，更優(yōu)選為2:1o
[0008]優(yōu)選的是，所述培養(yǎng)瓶側(cè)壁設(shè)置有瓶口，所述瓶口與相接隔板的側(cè)壁相對設(shè)置，與瓶口臨近的隔板側(cè)邊緣低于所述瓶口的底邊緣(3)且，垂直距離為O?lcm。
[0009]優(yōu)選的是，所述隔板的水平長度為培養(yǎng)瓶水平長度的2/3?5/6，更優(yōu)選為3/4，所述隔板的厚度為0.3?Icm，更優(yōu)選為0.5cm。
[0010]本發(fā)明提供了細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置在培養(yǎng)兩種不同浮力的細(xì)胞中的應(yīng)用。
[0011]優(yōu)選的是，所述細(xì)胞分層共培養(yǎng)裝置設(shè)置有瓶蓋(5)，所述瓶蓋通過旋轉(zhuǎn)來保證瓶內(nèi)的通氣，移動培養(yǎng)裝置時，旋緊瓶蓋，進行細(xì)胞培養(yǎng)時，旋轉(zhuǎn)瓶蓋使瓶內(nèi)氣體與瓶外氣體能夠流通。
[0012]本發(fā)明還提供了細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置進行細(xì)胞培養(yǎng)的方法，包括以下步驟:
[0013]I)通過離心的方法分離待培養(yǎng)細(xì)胞，得到不同浮力的細(xì)胞；
[0014]2)在培養(yǎng)瓶中預(yù)先加入不含細(xì)胞的培養(yǎng)液，使液面不溢過隔板且垂直距離隔板0.5?2cm，進行孵育；
[0015]3)在培養(yǎng)裝置中加入浮力小的細(xì)胞懸液和浮力大的細(xì)胞懸液，使培養(yǎng)裝置中的液面接觸但不溢過隔板，培養(yǎng)24?48h，兩種懸液的加入順序沒有限制；
[0016]所述步驟I)和步驟2)沒有時間順序限制。
[0017]優(yōu)選的是，所述孵育是在37?39°C、5?6%C02，更優(yōu)選為37°C，5%C02培養(yǎng)箱中靜置4?6h，更優(yōu)選為5h。
[0018]優(yōu)選的是，所述待培養(yǎng)細(xì)胞在加入到所述細(xì)胞分層共培養(yǎng)裝置內(nèi)之前，先分別進行2?5h的預(yù)培養(yǎng)。
[0019]本發(fā)明提供了一種細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置，包括培養(yǎng)瓶(I)和設(shè)置在培養(yǎng)瓶(I)內(nèi)的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養(yǎng)瓶(I)側(cè)壁相接，所述隔板(2)平行于培養(yǎng)瓶瓶底(4)。本發(fā)明在傳統(tǒng)培養(yǎng)瓶的中間部位加入一層隔板，用隔板代替了“天花板”，有效的減少了利用“天花板”法共培養(yǎng)不同浮力細(xì)胞時所用培養(yǎng)液量，既達(dá)到了兩種細(xì)胞在同一體系中共培養(yǎng)的效果又避免了不必要的浪費。同時，由于培養(yǎng)過程中瓶內(nèi)培養(yǎng)液不會充盈瓶口，使得瓶內(nèi)外氣體交換良好，操作過程中也不會出現(xiàn)漏液等現(xiàn)象，有效的防止了細(xì)胞污染。
【附圖說明】
[0020]圖1為本發(fā)明實施例提供的細(xì)胞分層共培養(yǎng)裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0021]圖2為圖1所示裝置的俯視圖。
【具體實施方式】
[0022]本發(fā)明提供了一種細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置，包括培養(yǎng)瓶(I)和設(shè)置在培養(yǎng)瓶(I)內(nèi)的隔板(2)，所述隔板(2)與所述培養(yǎng)瓶(I)側(cè)壁相接，所述隔板(2)平行于培養(yǎng)瓶瓶底(4)。
[0023]本發(fā)明的細(xì)胞分層共培養(yǎng)裝置的結(jié)構(gòu)示意圖具體參見圖1和圖2，其中，圖1為本發(fā)明實施例提供的細(xì)胞分層共培養(yǎng)裝置的結(jié)構(gòu)示意圖:(I)表示培養(yǎng)瓶，(2)為隔板，(3)為瓶口的底邊緣，(4)為培養(yǎng)瓶瓶底，(5)為培養(yǎng)瓶瓶蓋。
[0024]本發(fā)明的培養(yǎng)瓶與隔板一體化制成，所用材料沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的制備動物細(xì)胞培養(yǎng)瓶的材料即可。
[0025]本發(fā)明對培養(yǎng)瓶的體積沒有特殊的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)需求進行設(shè)置。本發(fā)明所述的細(xì)胞培養(yǎng)瓶的體積是指培養(yǎng)瓶的總體積，包括上部的氣體交換空間和下部的細(xì)胞培養(yǎng)空間。
[0026]在本發(fā)明中，所述隔板(2)與所述培養(yǎng)瓶(I)側(cè)壁相接，所述隔板(2)平行于培養(yǎng)瓶瓶底(4)，所述隔板與培養(yǎng)瓶除瓶口方向的三側(cè)側(cè)壁相接;所述隔板將培養(yǎng)瓶內(nèi)空間隔為上部的氣體交換空間和下部的細(xì)胞培養(yǎng)空間，減少了培養(yǎng)液的使用，且提升了瓶內(nèi)外氣體交換的效率，還解決了培養(yǎng)過程中漏液以及細(xì)胞污染的問題。在本發(fā)明中，所述細(xì)胞培養(yǎng)空間的體積與所述氣體交換空間的體積之比為4:1?1:1，更優(yōu)選為2:1。
[0027]在本發(fā)明的實施例中，所述隔板的水平長度為培養(yǎng)瓶水平長度的2/3?5/6，更優(yōu)選為3/4，所述隔板的厚度為0.3?Icm，更優(yōu)選為0.5cm。
[0028]培養(yǎng)瓶側(cè)壁設(shè)置有瓶口，所述瓶口與相接隔板的側(cè)壁相對設(shè)置，與瓶口臨近的隔板側(cè)邊緣低于所述瓶口的底邊緣(3)且，垂直距離為O?lcm;上述設(shè)置使得細(xì)胞培養(yǎng)液的液面始終低于瓶口的底邊緣，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不會出現(xiàn)漏液的問題，避免了細(xì)胞污染。
[0029]本發(fā)明提供了細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置在培養(yǎng)兩種不同浮力的細(xì)胞中的應(yīng)用，實現(xiàn)了在細(xì)胞培養(yǎng)瓶更好地模擬動物細(xì)胞內(nèi)環(huán)境。
[0030]本發(fā)明的細(xì)胞分層共培養(yǎng)裝置設(shè)置有瓶蓋(5)，所述瓶蓋可通過螺紋連接的方式與瓶口相接。在本發(fā)明的實施例中，所述瓶蓋通過旋轉(zhuǎn)來保證瓶內(nèi)的通氣，移動培養(yǎng)裝置時，旋緊瓶蓋，進行細(xì)胞培養(yǎng)時，旋轉(zhuǎn)瓶蓋使瓶內(nèi)氣體與瓶外氣體能夠流通。
[0031]本發(fā)明還提供了利用上述技術(shù)方案所述細(xì)胞分層共培養(yǎng)的裝置進行細(xì)胞培養(yǎng)的方法，包括以下步驟:
[0032]I)通過離心的方法分離待培養(yǎng)細(xì)胞，得到不同浮力的細(xì)胞；
[0033]2)在培養(yǎng)瓶中預(yù)先加入不含細(xì)胞的培養(yǎng)液，使液面不溢過隔板且垂直距離隔板
0.5?2cm，進行孵育；
[0034]3)在培養(yǎng)裝置中加入浮力小的細(xì)胞懸液和浮力大的細(xì)胞懸液，使培養(yǎng)裝置中的液面接觸但不溢過隔板，培養(yǎng)24?48h，兩種懸液的加入順序沒有限制；
[0035]所述步驟I)和步驟2)沒有時間順序限制。
[0036]本發(fā)明通過離心的方法，優(yōu)選為差速離心法分離待培養(yǎng)的細(xì)胞，得到不同浮力的細(xì)胞。本發(fā)明的離心速度和時間的選擇取決于細(xì)胞混合液中各細(xì)胞的重力大小，以能