1.5%、憐酸二氨鐘0.3 %、屯水硫酸儀0.3 %、硫酸鋒0.3 %、豆油0.03 % ;調(diào)節(jié)抑值6.0; 通風(fēng)比為l:〇.4vvm，罐壓0.04Mpa，在27°C下發(fā)酵培養(yǎng)4天后，放出20L的發(fā)酵液，補(bǔ)入20L滅 菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，繼續(xù)發(fā)酵1.5天;如此不斷放料、補(bǔ)料，反復(fù)3次，發(fā)酵結(jié)束可得發(fā)酵液 1151^，發(fā)酵周期為8.5天。
[0029] 2)微濾過(guò)濾:分別將四次發(fā)酵后的烏靈參發(fā)酵液20U20U20L和5f5L通過(guò)微濾過(guò) 濾，分別得到烏靈參濕菌絲體1.36kg、1.34kg、1.32kg、3.7化g(含水量78 %左右），微濾透析 液 18.64Kg、18.66Kg、18.68Kg和51.25Kg，透析液的透光率為82-85%，C0D為30-60mg/L。微 濾過(guò)濾所用的膜材料是孔徑為50nm的陶瓷膜，具體工藝條件是:操作溫度為50~6(TC，進(jìn)壓 為3. Obar，出壓為1. Obar，壓力差為2. Obar。
[0030] 3)低溫干燥:將步驟2得到的1.36kg、1.34kg、1.32kg、3.7化g烏靈參濕菌絲體進(jìn)入 真空烘箱進(jìn)行烘干，得到0.312kg、0.30化g、0.303kg和0.859kg水分含量4%左右的烏靈參 菌絲體，該菌絲體腺巧為0.10-0.14%，多糖含量8-10%。依據(jù)￥53-321(2-39)-2001(2)標(biāo)準(zhǔn) 方法檢驗(yàn)。具體干燥工藝條件是:干燥溫度65 °C，真空度為-0.085Mpa。
[0031] 傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝與本發(fā)明實(shí)施例1工藝產(chǎn)品產(chǎn)量、質(zhì)量對(duì)比表
[0032]
[0034] 從上述表格可W看出采用傳統(tǒng)工藝10天發(fā)酵2個(gè)批次，可獲得菌絲體1.58化g;而 采用本發(fā)明工藝總發(fā)酵周期為8.5天，可獲得4個(gè)批次的菌絲體1.781kg，發(fā)酵周期為傳統(tǒng)的 85%，而獲得菌絲體產(chǎn)量是傳統(tǒng)的112.2%，并且菌絲體產(chǎn)品質(zhì)量要高于傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)。因 此采用本發(fā)明工藝既可縮短發(fā)酵周期，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，降低生產(chǎn)成本。
[0035] 實(shí)施例2
[0036] 1)烏靈參菌株(Xylaria nigripes化1. )Sacc .)由中國(guó)科學(xué)院微生物研究所提供 并鑒定，保藏編號(hào)CGMCC NO. 1038。將培養(yǎng)好的烏靈參菌株種子液種到種子培養(yǎng)基，接種量 是10%，種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖2%、蛋白腺0.6%、黃豆餅粉1.8%、憐酸二氨鐘0.3%、屯 水硫酸儀0.3 %、硫酸鋒0.25%、豆油0.02%;調(diào)節(jié)pH值5.5。培養(yǎng)條件為：通風(fēng)比為1: 0.5vvm，罐壓0.03Mpa，培養(yǎng)溫度26-28°C，培養(yǎng)4天左右即可得到種子液。將培養(yǎng)好種子液接 種到滅菌后1〇化發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量15%，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖2%、蛋白腺0.8%、黃 豆餅粉2.0 %、憐酸二氨鐘0.3 %、屯水硫酸儀0.2 %、硫酸鋒0.3 %、豆油0.03% ;調(diào)節(jié)抑值 6.0;通風(fēng)比為1:0.4vvm，罐壓0.04Mpa，在26 °C下發(fā)酵培養(yǎng)4天后，放出4化的發(fā)酵液，補(bǔ)入 4化滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，繼續(xù)發(fā)酵1.5天;如此不斷放料、補(bǔ)料，反復(fù)3次，發(fā)酵結(jié)束可得發(fā) 酵液23化，發(fā)酵周期為8.5天。
[0037] 2)微濾過(guò)濾：分別將四次發(fā)酵后的烏靈參發(fā)酵液40U40U40L和11化通過(guò)微濾過(guò) 濾，分別得到烏靈參濕菌絲體2.4kg、2.38kg、2.3化g、6.58kg(含水量75%左右），微濾透析 液37.6Kg、37.62Kg、37.65Kg和 106.42Kg，透析液的透光率為83-87 %，COD為30-50mg/L。微 濾過(guò)濾所用的膜材料是孔徑為50nm的陶瓷膜，具體工藝條件是:操作溫度為50~60°C，進(jìn)壓 為S.Obar，出壓為1 .Obar，壓力差為S.Obar。
[0038] 3)低溫干燥:將步驟2得到的2.4kg、2.38kg、2.3化g、6.58kg烏靈參濕菌絲體進(jìn)入 真空烘箱進(jìn)行烘干，得到0.618kg、0.613kg、0.60化g和1.69化g水分含量3 %左右的烏靈參 菌絲體，該菌絲體腺巧為0.10-0.14%，多糖含量8-10%。依據(jù)￥53-321(2-39)-2001(2)標(biāo)準(zhǔn) 方法檢驗(yàn)。具體干燥工藝條件是:干燥溫度65 °C，真空度為-0.085Mpa。
[0039] 傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝與本發(fā)明實(shí)施例2工藝產(chǎn)品產(chǎn)量、質(zhì)量對(duì)比表
[0040]
[0042]從上述表格可W看出采用傳統(tǒng)工藝10天發(fā)酵2個(gè)批次，可獲得菌絲體2.96kg;而采 用本發(fā)明工藝總發(fā)酵周期為8.5天，可獲得4個(gè)批次的菌絲體3.533kg，發(fā)酵周期為傳統(tǒng)工藝 的85%，而獲得菌絲體產(chǎn)量是傳統(tǒng)工藝的119.4%，并且菌絲體產(chǎn)品質(zhì)量要高于傳統(tǒng)工藝生 產(chǎn)。因此采用本發(fā)明工藝既可縮短發(fā)酵周期，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，降低生產(chǎn)成本。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)烏靈參菌粉的方法，其特征是該方法包括下述步驟： 1) 烏靈參半連續(xù)發(fā)酵液制備:將烏靈參種子液接種到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行深層液 態(tài)發(fā)酵得到烏靈參發(fā)酵培養(yǎng)液，接種量為體積含量的10~20%，通風(fēng)比為1:0.1_1 .Ovvm，罐 壓0.02~0.05Mpa，在20~30 °C下發(fā)酵培養(yǎng)2-7天后，放出培養(yǎng)器容積的10-50 %的發(fā)酵液， 補(bǔ)入等同體積的滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，繼續(xù)發(fā)酵1-3天;如此不斷放料、補(bǔ)料，每次補(bǔ)料繼續(xù) 發(fā)酵1-3天，反復(fù)多次，得到烏靈參發(fā)酵液； 2) 烏靈參發(fā)酵液陶瓷膜過(guò)濾:將步驟1)中所得的烏靈參發(fā)酵液通過(guò)微濾膜得到發(fā)酵液 的微濾透析液和菌絲體，收集得到菌絲體； 3) 低溫真空烘干:將步驟2)中所得的菌絲體在真空度為-0.065~-0.095Mpa，70~85°C 條件下進(jìn)行干燥。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)烏靈參菌粉的方法，其特征是步驟1) 中所述的通風(fēng)比為l:〇.5vvm，罐壓0.03~0.05Mpa，在26~28°C下發(fā)酵培養(yǎng)4天后，放出培養(yǎng) 器容積的10-50 %的發(fā)酵液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)烏靈參菌粉的方法，其特征是所述的 烏靈參種子液是通過(guò)以下方法制備得到的：烏靈參種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖1-3%、蛋白胨 0.1-1 %、黃豆餅粉0.5-2 %、磷酸二氫鉀0.1-0.5 %、七水硫酸鎂0.1-0.5 %、硫酸鋅0 . ΙΟ. 5%、豆油 0.01-0.05% ; 調(diào)節(jié) pH 值 5.0-6. 5; 培養(yǎng)條件為：通風(fēng)比為 1:0.1-1. Ovvm，罐壓 0.02~0.05Mpa，培養(yǎng)溫度20~30°C，培養(yǎng)周期2-6天。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)烏靈參菌粉的方法，其特征是所述的 烏靈參種子液是通過(guò)以下方法制備得到的：烏靈參種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖2%、蛋白胨 0.5-0.6 %、黃豆餅粉1.5-1.8 %、磷酸二氫鉀0.3 %、七水硫酸鎂0.2-0.3 %、硫酸鋅0.25 %、 豆油0.02% ;調(diào)節(jié)pH值5.5;培養(yǎng)條件為:通風(fēng)比為1:0.5vvm，罐壓0.03Mpa，培養(yǎng)溫度26~28 °C，培養(yǎng)周期4天。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)烏靈參菌粉的方法，其特征是所述的 烏靈參發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖1-3%、蛋白胨0.1-1%、黃豆餅粉0.5-2%、磷酸二氫鉀 0.1-0.5 %、七水硫酸鎂 0.1-0.5 %、硫酸鋅 0.1-0.5 %、豆油 0.01-0.05 % ;調(diào)節(jié) pH 值 5.0-6.5〇6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)烏靈參菌粉的方法，其特征該方法所 述的微濾膜為陶瓷膜或有機(jī)膜，其孔徑在〇. 05~0.5μπι，操作溫度為50~60°C，工作壓力:進(jìn) 壓為2~4bar，出壓為0~5bar。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)烏靈參菌粉的方法，其特征該方法所 述的微濾膜為陶瓷膜或有機(jī)膜，其孔徑在50mn，操作溫度為50~60°C，工作壓力：進(jìn)壓為 3bar，出壓為lbar。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)烏靈參菌粉的方法，該方法是將烏靈參菌種采用半連續(xù)發(fā)酵工藝快速獲取富含大量的菌絲體的發(fā)酵液，然后將發(fā)酵液通過(guò)微濾膜處理分離得到烏靈參的菌絲體。本發(fā)明改變了傳統(tǒng)烏靈參間歇性的分批發(fā)酵工藝，并且菌絲體的分離采用高效的陶瓷膜微濾替代離心機(jī)分離方式。半連續(xù)發(fā)酵工藝克服了傳統(tǒng)分批發(fā)酵工藝的工藝環(huán)節(jié)多，中間間隙時(shí)間長(zhǎng)，設(shè)備效率低等缺點(diǎn)；而采用高效的陶瓷膜過(guò)濾發(fā)酵液，能夠減少進(jìn)入濾液的菌絲體，既能提高菌絲體的收率，降低濾液的COD，降低污水處理量，又不破壞細(xì)胞本身，保證胞內(nèi)有效成分的全部回收。與傳統(tǒng)的工藝相比，本發(fā)明具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和環(huán)保效益。
【IPC分類(lèi)】C12N1/14, C12R1/645, C12N1/02
【公開(kāi)號(hào)】CN105586277
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610148407
【發(fā)明人】王文風(fēng), 徐國(guó)華, 徐玲, 楊亞威, 張芙蓉, 孫妮娜
【申請(qǐng)人】江蘇神華藥業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月18日
【申請(qǐng)日】2016年3月15日