一種脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥用脂肪酸酰胺的合成技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法。
【背景技術(shù)】
[0002]脂肪酸單乙醇胺是一種重要的油溶性非離子型表面活性劑，廣泛應(yīng)用于潤(rùn)滑劑、表面活性劑和洗滌劑等領(lǐng)域中，而且脂肪酸單乙醇酰胺通過(guò)羧甲基化、磷酸酯化、硫酸酯化和乙氧基化改性可制取多種易生物降解的表面活性劑，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]此外，脂肪酸單乙醇酰胺作為一種新的內(nèi)源性信號(hào)分子在動(dòng)植物組織中的脂質(zhì)介質(zhì)的功效倍受人們關(guān)注(Kilaru et.al.,Chem B1divers 2007，4:1933-1955)。功能性的脂肪酸乙醇酰胺主要包括棕櫚酸單乙醇酰胺，油酸單乙醇酰胺，花生四烯酸單乙醇酰胺和二十碳五烯酸單乙醇酰胺(ΕΡΕΑ)。棕櫚酸單乙醇酰胺在大豆油、花生油和蛋黃中都有發(fā)現(xiàn)，并被報(bào)道具有抗炎活性(Kuehl et al..J Am Oil Chem Soc 1957，79:5577_5578)。油酸單乙醇酰胺是內(nèi)源性大麻素花生四烯酸乙醇酰胺的天然類似物(Thabuis et al.,Lipids2008，43: 887-894)，在脂質(zhì)代謝和食物攝入的控制中起到重要作用，是治療心血管疾病及肥胖藥物研究中熱點(diǎn)。油酸單乙醇酰胺主要是通過(guò)結(jié)合過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)及調(diào)節(jié)脂肪組織中脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(FAT/CD36)的表達(dá)增加腸道脂肪酸攝取的方法來(lái)調(diào)節(jié)反饋和能量穩(wěn)態(tài)，并且影響飽腹感信號(hào)傳導(dǎo)生物標(biāo)記物的合成(Fu etal.，Neuropharmaco1gy 2005，48:1147-1153)。多不飽和脂肪酸單乙醇酰胺也表現(xiàn)出生物功能性，二十碳五稀酸單乙醇酰胺顯示出抗增殖活性、抗癌活性(B r ο w n e t a 1.，Carcinogenesis 2010，31:1584-1591)與抗炎活性(Balvers et al.,B1chim B1physActa 2010,1801:1107-1114)，作為機(jī)體代謝信號(hào)分子，在生物體老化中起重要作用(Lucanic et al.,Nature 2011,473:226-229)0
[0004]脂肪酸單乙醇酰胺的合成主要為化學(xué)法。傳統(tǒng)化學(xué)法常用的?；w包括脂肪酸酰氯和脂肪酸甲酯(或乙酯)，反應(yīng)溫度高(180°C)，高溫對(duì)產(chǎn)品的產(chǎn)率、顏色和氣味都會(huì)有影響，化學(xué)催化劑對(duì)-NH2基團(tuán)的選擇性差，會(huì)產(chǎn)生胺酯和酰胺酯副產(chǎn)物。此外，脂肪酸酰氯價(jià)格較高，且脂肪酸酰氯具有毒性和腐蝕性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本部分的目的在于概述本發(fā)明的實(shí)施例的一些方面以及簡(jiǎn)要介紹一些較佳實(shí)施例。在本部分以及本申請(qǐng)的說(shuō)明書(shū)摘要和發(fā)明名稱中可能會(huì)做些簡(jiǎn)化或省略以避免使本部分、說(shuō)明書(shū)摘要和發(fā)明名稱的目的模糊，而這種簡(jiǎn)化或省略不能用于限制本發(fā)明的范圍。
[0006]鑒于上述和/或現(xiàn)有合成脂肪酸單乙醇酰胺中存在的問(wèn)題，提出了本發(fā)明。
[0007]因此，本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有常規(guī)化學(xué)合成的不足之處，提供一種工藝簡(jiǎn)易、操作方便且能有效制備脂肪酸單乙醇酰胺的合成方法。
[0008]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:一種脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法，其包括，將脂肪酸單甘酯和單乙醇胺按一定比例在溶劑反應(yīng)體系下充分混合，并加入一定量的脂肪酶，在適宜的溫度下攪拌，進(jìn)行酰胺化反應(yīng)，制備脂肪酸單乙醇酰胺;其中，脂肪酸單甘酯與單乙醇胺混合的摩爾比為1:1?1:2;酰胺化溫度為20?70°C，反應(yīng)時(shí)間為2?5h;所述一定量的脂肪酶其質(zhì)量百分比為10%?20%。
[0009]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酸單甘酯是飽和脂肪酸單甘酯，且飽和脂肪酸單甘酯為棕櫚酸單甘酯、月桂酸單甘酯、肉豆寇酸單甘酯或硬脂酸單甘酯中的一種或幾種。
[0010]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酸單甘酯是不飽和脂肪酸單甘酯，且不飽和脂肪酸是油酸單甘酯、亞油酸單甘酯、亞麻酸單甘酯、花生四烯酸單甘酯、二十碳五烯酸單甘酯或二十二碳六烯酸單甘酯中的一種或幾種。
[0011]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述有機(jī)溶劑為己烷、石油醚、正己烷、乙酸乙酯、丙酮和氯仿中的一種或幾種。
[0012]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酶催化劑為Novozym 435、Lipozyme 435、Lipozyme RM IM或Lipozyme TL IM中的一種或幾種。
[0013]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述有機(jī)溶劑為己烷。
[0014]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酶催化劑為Novozym 435。
[0015]本發(fā)明的有益效果:
[0016]1、本發(fā)明首次采用單甘酯為?；w酶法合成脂肪酸乙醇酰胺；
[0017]2、與化學(xué)法相比，酶法合成選擇性更好，單甘酯只與乙醇胺的-NH2反應(yīng)，不與-OH反應(yīng)；
[0018]3、使用的脂肪酸和脂肪酸乙酯(或甲酯)作為酰基供體時(shí)，脂肪酸和脂肪酸乙酯與乙醇胺的相溶性很差，反應(yīng)效率相對(duì)較低，甘油三酯與乙醇胺的酶法反應(yīng)，因此極性相差太大，互溶性很差，沒(méi)有脂肪酸乙醇胺的形成，單甘酯因?yàn)榫哂幸欢ǖ臉O性，與乙醇胺的互溶性更好，因此反應(yīng)效率更高。
【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為實(shí)施例1中油酸單甘酯與單乙醇胺酰胺化產(chǎn)物油酸單乙醇酰胺的核磁示意圖；
[0020]圖2為實(shí)施例1的油酸單甘酯與單乙醇胺酰胺化產(chǎn)物油酸單乙醇酰胺的正相液相色譜示意圖；
[0021]圖3為實(shí)施例2的棕櫚酸單甘酯與單乙醇胺酰胺化產(chǎn)物棕櫚酸單乙醇酰胺的正相液相色譜示意圖；
[0022]圖4為實(shí)施例3的花生四烯酸單甘酯與單乙醇胺酰胺化產(chǎn)物花生四烯酸單乙醇酰胺的正相液相色譜示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】做詳細(xì)的說(shuō)明。
[0024]在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明，但是本發(fā)明還可以采用其他不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似推廣，因此本發(fā)明不受下面公開(kāi)的具體實(shí)施例的限制。
[0025]其次，此處所稱的“一個(gè)實(shí)施例”或“實(shí)施例”是指可包含于本發(fā)明至少一個(gè)實(shí)現(xiàn)方式中的特定特征、結(jié)構(gòu)或特性。在本說(shuō)明書(shū)中不同地方出現(xiàn)的“在一個(gè)實(shí)施例中”并非均指同一個(gè)實(shí)施例，也不是單獨(dú)的或選擇性的與其他實(shí)施例互相排斥的實(shí)施例。
[0026]實(shí)施例1:
[0027]在反應(yīng)爸中加入2mmo I油酸單甘酯、2mmol單乙醇胺和0.5ml己燒，在攪拌下加入質(zhì)量百分比為10%脂肪酶Lipozyme 435，密閉反應(yīng)釜，攪拌升溫至45°C，反應(yīng)時(shí)間為2小時(shí)。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)，通過(guò)過(guò)濾分離脂肪酶，溶劑減壓蒸發(fā)去除。經(jīng)HPLC分析，油酸單乙醇酰胺產(chǎn)率為99.85%。
[0028]如圖1和圖2所示，圖1為實(shí)施例