從紅豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉寧堿和10-dabⅲ的方法
【專利說明】從紅豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉寧堿和10-DABm的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及從植物中分離提取有效成分的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從紅豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉烷類化合物是提取于高等裸子植物紅豆杉的樹皮、根和葉等部位的一類化合物，主要含有紫杉醇、三尖杉寧堿、10-DABm、7-木糖基紫杉醇等，有許多已被證明具有細胞毒性和抗腫瘤活性，而用來提取紫杉醇等的天然紅豆杉資源有限，因而天然紫杉醇原料藥的生產(chǎn)和供應受到限制，遠遠不能滿足紫杉醇臨床的應用。現(xiàn)在人們大規(guī)模種植紅豆杉樹，從中提取紫杉醇、三尖杉寧堿、1-DABm、7_木糖基紫杉醇等紫杉烷類物質(zhì)，如何充分利用資源紅豆杉資源，從中得到更多的有效物質(zhì)具有重要意義?，F(xiàn)有提取紫杉烷類有效成分的方法，如授權(quán)公告號為CN103408512B的“一種從紅豆杉中高效提取紫杉烷類有效成分的方法”專利，公開的提取紫杉烷類有效成分的方法是:先通過水提取，再通過醇提取，再用傳統(tǒng)純化方法純化即可得到紫杉醇、10-DABm、7木糖基紫杉醇、三尖杉寧堿非水溶性等紫杉烷類物質(zhì)單體。該方法的主要缺點是:①提取時間較長，在4?48小時;②經(jīng)提取罐下部濾板過濾后的濾液中含有很多細小顆粒，進入樹脂柱會堵塞樹脂柱，降低樹脂柱的循環(huán)使用次數(shù)；③采用有機弱酸水溶液進行提取增加了后續(xù)處理有機弱酸水溶液的步驟。
[0003]因此，需要一種從紅豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的方法，具有制備工藝和生產(chǎn)設(shè)備以及操作步驟簡單，提取時間較短，材料可循環(huán)，且使用時間長等特點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種從紅豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的方法，具有制備工藝和生產(chǎn)設(shè)備以及操作步驟簡單，提取時間較短，材料可循環(huán)，且使用時間長等特點。
[0005]本發(fā)明的從紅豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的方法，包括以下步驟:
[0006]a.將紅豆杉粉末溶于1-DABm提取劑進行超聲提取后經(jīng)離心分離收集離心清液I，將離心清液I經(jīng)大孔樹脂飽和吸附后進行洗脫收集洗脫液I進行濃縮，得到1-DABm浸膏，經(jīng)大孔樹脂處理后的離心清液I經(jīng)超聲提取后收集濾渣和濾液；
[0007]b.將步驟a中收集的濾渣溶于紫杉醇提取劑先后經(jīng)超聲提取和離心分離后收集離心清液Π，將離心清液Π經(jīng)大孔樹脂飽和吸附后進行洗脫收集洗脫液Π進行濃縮，得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿的浸膏；
[0008]進一步，步驟a中，紅豆杉粉末與1-DABm提取劑的質(zhì)量體積比為1:5?100;
[0009]進一步，步驟a中，第一次超聲提取的超聲頻率為為20?50KHz，提取時間為2-6小時；
[0010]進一步，將步驟a中第二次超聲提取后的濾液作為1-DABm提取劑循壞使用；
[0011]進一步，步驟a中，所述1-DABm提取劑為水;采用濃度為40?60%的甲醇或40?60%的乙醇作為洗脫劑進行洗脫;在轉(zhuǎn)速為6000?20000r/min的管式離心機中進行離心分離處理；
[0012]進一步，步驟b中，按照紅豆杉粉末與紫杉醇提取劑的質(zhì)量體積比為1:5?100的比例，向濾渣加入紫杉醇提取劑，所述紫杉醇提取劑為濃度20?50 %的甲醇或20?50 %的乙醇；
[0013]進一步，步驟b中，超聲提取頻率為20?50KHz，時間為2-6小時；
[0014]進一步，步驟b中，采用濃度為60?99.5 %的甲醇或60?99.5 %的乙醇進行洗脫；
[0015]進一步，步驟b中，在轉(zhuǎn)速為6000?20000r/min的管式離心機中進行離心分離處理得到離心清液Π ;經(jīng)大孔樹脂處理后的離心清液Π經(jīng)超聲提取后收集濾液作為紫杉醇提取劑循環(huán)使用；
[0016]進一步，將曼地亞紅豆杉枝葉進行陰干然后粉碎至0.1?2mm，就制得紅豆杉粉末；將步驟a中的1-DABm浸膏和步驟b中的紫杉醇、三尖杉寧堿浸膏純化制得紫杉醇、三尖杉寧堿和10-DABm。
[0017]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明的從紅豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉寧堿和10-DABm 的方法，以曼地亞紅豆杉枝葉為原料，采用超聲波與樹脂吸附聯(lián)合的方法分別提取紫杉醇、三尖杉寧堿與1-DABm，紫杉醇的提取率98%以上，三尖杉寧堿提取率98%以上，10-DABm 提取率 98% 以上， 1-DABm浸膏中 1-DABm含量2% ?5% ， 紫杉醇 、三尖杉寧堿浸膏中紫杉醇含量2%?5%、三尖杉寧堿含量2%?5%，采用本方法提取時間短、效率高、不堵塞樹脂柱;提取劑可循環(huán)利用，節(jié)約資源，綠色環(huán)保;所采用的溶劑可回收利用，對環(huán)境污染小。本發(fā)明方法所用生產(chǎn)設(shè)備簡單，生產(chǎn)條件易實施，操作方便適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0018]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步描述:
[0019]圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0020]本發(fā)明的從紅豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉寧堿和1-DABm的方法，包括以下步驟:
[0021]a.將紅豆杉粉末溶于1-DABm提取劑進行超聲提取后經(jīng)離心分離收集離心清液I，將離心清液I經(jīng)大孔樹脂飽和吸附后進行洗脫收集洗脫液I進行濃縮，得到1-DABm浸膏，經(jīng)大孔樹脂處理后的離心清液I經(jīng)超聲提取后收集濾渣和濾液；
[0022]b.將步驟a中收集的濾渣溶于紫杉醇提取劑先后經(jīng)超聲提取和離心分離后收集離心清液Π，將離心清液Π經(jīng)大孔樹脂飽和吸附后進行洗脫收集洗脫液Π進行濃縮，得到含有紫杉醇、三尖杉寧堿的浸膏;采用超聲波與樹脂吸附聯(lián)合的方法分別提取紫杉醇、三尖杉寧堿與1-DABm，紫杉醇的提取率98%以上，三尖杉寧堿提取率98%以上，1-DABm提取率98%以上，1-DABm浸膏中1-DABm含量2%?5%，紫杉醇、三尖杉寧堿浸膏中紫杉醇含量2%?5%、三尖杉寧堿含量2%?5 %，采用本方法提取時間短、效率高、不堵塞樹脂柱。本實施例及下述實施例的大孔樹脂可采用AB-8或DlOl或HPD300大孔樹脂。
[0023]本實施例中，步驟a中，紅豆杉粉末與1-DABm提取劑的質(zhì)量體積比為1:5?100;紅豆杉粉末與提取劑的用量比保證了提取的效果，增大提取率，本實施例以及下述實施例中的紅豆杉粉末與1-DABm提取劑的質(zhì)量體積比為紅豆杉粉末的質(zhì)量(kg)與1-DABm提取劑的體積(L)之比。
[0024]本實施例中，步驟a中，第一次超聲提取的超聲頻率為20?50KHz，提取時間為2-6小時;通過適當?shù)某暤目栈?、熱效應和機械作用并結(jié)合離心分離和大孔樹脂吸附，提高提取率的同時，又便于過濾，避免堵塞樹脂柱，降低樹脂柱的循環(huán)使用次數(shù)。
[0025]本實施例中，將步驟a中第二次超聲提取后的濾液作為1-DABm提取劑循環(huán)使用；可作為下一批物料的提取劑，以此循環(huán)使用，節(jié)約經(jīng)濟成本。
[0026]本實施例中，步驟a中，所述1-DABm提取劑為水;采用濃度為40?60%的甲醇或40?60%的乙醇作為洗脫劑進行洗脫;在轉(zhuǎn)速為6000?20000r/min的管式離心機中進行離心分離處理;提取液經(jīng)過超聲提取罐下的濾板進行過濾后進入管式離心機中進行離心，得到離心清液和沉降物，沉降物作為廢渣處理;洗脫劑回收循環(huán)使用。
[0027]本實施例中，步驟b中，按照紅豆杉粉末與紫杉醇提取劑的質(zhì)量體積比為1:5?100的比例，向濾渣加入紫杉醇提取劑，所述紫杉醇提取劑為濃度20?50%的甲醇或20?50%的乙醇;紫杉醇提取劑的用量參照與步驟a中所使用的紅豆杉粉末量的配比關(guān)系確定，紫杉醇提取劑與濾渣的用量比直接影響紫杉醇、三尖杉寧堿的提取率，以及提取紫杉醇、三尖杉寧堿的純度問題。
[0028]本實施例中，步驟b中，超聲提取頻率為20?50KHz，時間為2-6小時;濾渣與紫杉醇的用量比結(jié)合超聲頻率和超聲時間，有效保證紫杉醇、三尖杉寧堿的提取效率，本實施例以及上述實施例中，紅豆杉粉末與提取劑的用量過大或過小，超聲的頻率過大或過小，超聲時間的過長或過短均不利于有效成分的提取，比如，超聲時間過長，會造成雜質(zhì)的溶出，超聲時間過短，又影響提取率，超聲頻率過大影響有效成分，超聲頻率過小又會造成提取率的下降，本發(fā)明正是通過有機的控制紅豆杉粉末與提取劑的用量、超聲提取的時間，并結(jié)合離心分離和大孔樹脂吸附以達到提高提取率，保證有效成分的純度的目的。
[0029]本實施例中，步驟b中，采用濃度為60?99.5 %的甲醇或60?99.5 %的乙醇進行洗脫。
[0030]本實施例中，步驟b中，在轉(zhuǎn)速為6000?20000r/mi