一種苯酞類二聚體化合物的提取方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明設(shè)及天然藥物的分離制備方法及應(yīng)用，具體設(shè)及從當(dāng)歸中提取分離的=種 苯獻(xiàn)類二聚體化合物及其用途。
【背景技術(shù)】：
[0002] 當(dāng)歸是最常用的中藥之一，來源于傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(01iv.) Diels的干燥根。當(dāng)歸含有揮發(fā)油、有機(jī)酸、多糖、黃酬等多種類型的化學(xué)成分，其藥理作用 廣泛，設(shè)及機(jī)體多個系統(tǒng)。大量的藥理研究報(bào)道表明，當(dāng)歸及其主要化學(xué)成分對機(jī)體的造血 系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等多個系統(tǒng)具有藥理作用;其主要生物活性包括造血、 抗血小板聚集、抗屯、律失常、抗福射、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)平滑肌W及對臟器的保護(hù)作用。
[0003] 苯獻(xiàn)類化合物作為一大類天然化合物主要存在于傘形科，目前進(jìn)行的苯獻(xiàn)類的植 物研究多數(shù)集中于芹菜，蔓本(迂蔓本，新疆蔓本），當(dāng)歸（日本當(dāng)歸，歐當(dāng)歸），川號(茶號，日 本川號）。該類化合物主要包括苯獻(xiàn)單體及苯獻(xiàn)二聚體類化合物，苯獻(xiàn)單體類化合物的結(jié)構(gòu) 母核為苯并巧喃內(nèi)醋結(jié)構(gòu)，具有12個碳，是蔓本屬植物次生代謝產(chǎn)物的代表性成分之一;苯 獻(xiàn)二聚體是苯獻(xiàn)單體經(jīng)環(huán)加成得到的，單體結(jié)構(gòu)、聚合方式及聚合位置的不同產(chǎn)生了其結(jié) 構(gòu)的多樣性。目前關(guān)于苯獻(xiàn)類單體活性的報(bào)道較多，卻罕見苯獻(xiàn)二聚體類化合物的活性報(bào) 道。
[0004] 具有抗腫瘤活性的天然植物已經(jīng)成為人們開發(fā)新藥的重要來源，因此人們正在不 斷尋找活性較好，結(jié)構(gòu)新穎的新型天然化合物。本發(fā)明從當(dāng)歸中分離得到=種苯獻(xiàn)類二聚 體化合物，藥理試驗(yàn)研究表明，該類化合物具有顯著的抗腫瘤活性，經(jīng)文獻(xiàn)檢索，迄今為止 未見該=種化合物在此方面的活性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種新的苯獻(xiàn)類二聚體化合物。
[0006] 本發(fā)明的另一個目的在于提供一種苯獻(xiàn)類二聚體化合物的制備方法，W及所述方 法制備得到的化合物的用途。
[0007] 本發(fā)明提供的一種苯獻(xiàn)類二聚體化合物，其特征在于結(jié)構(gòu)式為1、11或III:
[nn0Rl III
[0009] 本發(fā)明提供的一種苯獻(xiàn)類二聚體化合物的制備方法，其特征在于包括W下步驟：
[0010] (1)粗提物的制備
[0011] 采用超臨界C〇2萃取當(dāng)歸飲片，萃取條件:溫度:50°C ;壓力：20MP;0)2流量:1化g/h; 物料粒度:20目；萃取時間：3h;
[0012] (2)化合物的分離純化
[OOU]將上述粗提物用200~300目的硅膠拌樣，進(jìn)行硅膠柱層析，W石油酸-乙酸乙醋系 統(tǒng)梯度洗脫，根據(jù)薄層層析情況合并流分；
[0014] 石油酸：乙酸乙醋= 1:9洗脫部位的組分經(jīng)硅膠柱層析，凝膠柱層析分離，然后經(jīng) 制備高效液相分離，流動相為甲醇:水= 7:3,收集出峰時間為45.59min的物質(zhì)，得到新化合 物I (C2姐28〇4)，命名為Tokinolide C，收集出峰時間為61.15min的物質(zhì)，得到化合物II (Tokinolide A)；
[0015] 石油酸：乙酸乙醋= 2:8洗脫部位的組分經(jīng)硅膠柱層析分離，然后經(jīng)S邱hadex LH-20層析純化，用氯仿：甲醇= 2:1(體積比）的溶劑洗脫，得到化合物III(Riligustilide)。
[0016] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:所述方法制得的苯獻(xiàn)類二聚體化合物I、II或HI在1~SOiiM濃度范 圍內(nèi)，對不同的腫瘤細(xì)胞均有一定的抑制作用，且存在明顯的濃度依賴性。因此，其可在制 備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0017] 本發(fā)明有益效果在于：
[0018] 本發(fā)明提供的苯獻(xiàn)類二聚體化合物可從當(dāng)歸等藥材中分離得到，也可經(jīng)本領(lǐng)域技 術(shù)人員熟知的化學(xué)方法合成得到，具有良好的開發(fā)前景;本發(fā)明苯獻(xiàn)類二聚體化合物對多 種腫瘤細(xì)胞株的抑制作用也表明其可W進(jìn)一步作為新的抗腫瘤藥物進(jìn)行研究開發(fā)。
【附圖說明】：
[0019]圖1.化合物I的Ihnmr譜(氨譜）。
[0020] 圖2.化合物I的I3CNMR譜(碳譜）。
[0021] 圖3.化合物I的麗QC譜。
[0022] 圖4.化合物I的HMBC譜。
[0023] 圖5.化合物I的NOESY譜。
[0024] 圖 6.化合物 I 的 HR-ESI-MS 譜。
[0025] 圖7.化emDraw3D模擬化合物I的優(yōu)勢構(gòu)型及NOESY譜主要的相關(guān)信號
[0026] 圖8.分離流程圖
【具體實(shí)施方式】：
[0027] 實(shí)施例1.=種苯獻(xiàn)類二聚體化合物的提取分離，具體步驟為：
[002引 （1)超臨界C02萃取7.3kg當(dāng)歸飲片，萃取條件為一溫度:50°C ;壓力：20MP;0)2流量： 1化g/h;物料粒度:20目；萃取時間：3h。得棟紅色浸膏81.2g。該浸膏用Ikg正相硅膠柱層析 分離，依次使用石油酸-乙酸乙醋（1:99、2:98、5:95、7:93、1:9、3:17、2:8、3:7、5:5、0:1)梯 度洗脫，根據(jù)薄層層析情況合并成28個流分，顯色劑為10%硫酸甲醇溶液。
[0029] (2)取組分化.14(石油酸：乙酸乙醋= 1:9洗脫部位）進(jìn)行硅膠柱層析，收集石油 酸：乙酸乙醋= 1:19的洗脫部位，然后經(jīng)凝膠柱層析分離，用氯仿：甲醇= 2:1(體積比）的溶 劑洗脫，濃縮合并紫外燈下暗斑較純的組分。所得浸膏經(jīng)反相C18制備柱分離，流動相為甲 醇：水=7 : 3，收集出峰時間為45.59min的物質(zhì)，得到新化合物I (C2姐28化）30mg，命名為 Tokinolide C，收集出峰時間為61.15min的物質(zhì)，得到化合物II(Tokinolide A)35mg。
[0030] (3)取組分化.17(石油酸：乙酸乙醋= 2:8洗脫部位）進(jìn)行硅膠柱層析，收集石油 酸：乙酸乙醋=3:17的洗脫部位，然后經(jīng)S邱hadex LH-20層析分離，用氯仿：甲醇=2:1 (體 積比）的溶劑洗脫，濃縮合并紫外燈下暗斑較純的組分，得到化合物III(Riligustilide) 56mg〇
[0031] 實(shí)施例2.對實(shí)施例1所得的化合物I-HI的理化性質(zhì)及化學(xué)結(jié)構(gòu)的定性鑒定
[0032] 化合物I:黃色油狀物，易溶于氯仿，難溶于甲醇。高分辨HR-ESI-MS給出離子峰m/ z:783.3898[2M+Na] +，403.1881[M+Na] +，381.2057[M+H]+提示該化合物的分子量為 380,分 子式為C2姐28〇4 dUV光譜在280.7皿處有強(qiáng)吸收峰。Ihnmr譜給出兩個甲基信號SO. 96 (3H，t，J = 7.4Hz，H-ll)，0.92(3H，t，J = 7.4Hz，H-l^)，低場區(qū)有四個締氨信號，分別為S6.11(lH， ddd，J = 9.9Hz，H-6'），5.77(lH，dd，J = 1.7,9.9Hz，H-7'），5.24(lH，t，J = 7.9Hz，H-8)，4.88 (1H，t，J = 7.9Hz，H-8 '），S6.11與化.77兩氨偶合常數(shù)均為J = 9.9Hz，提示該化合物含一順 式雙鍵。S5.24及M.88的締氨給出的信號為S重峰，且偶合常數(shù)J = 7.9Hz，提示兩運(yùn)個締氨 均與鍵-C出-相連。I3CNMR低場區(qū)有兩個幾基信號5168.73和6176.92,八