[M+化]+ :332.3。
[0082] *N-(1-(1,1,1,3,5,5,5-heptamethyltrisiloxan-3-yl)-3-hydroxybutan-2-y I) -4-( (4-(morpho I inomethy I) pheny I) ethyny I) benzamide (19)的制備
[0083] 將154mg化合物18和160mg化合物9溶于2mL的DMF中加入380mg的HATU和216化的 DIEA，室溫反應(yīng)化。加入20mL乙酸乙醋，依次用飽和碳酸氨鋼、飽和氯化錠和飽和食鹽水各 20mL洗涂，有機(jī)相用無水硫酸鋼干燥濃縮。柱層析得產(chǎn)物261mg，收率為72.4% dESI-MS : [M+ 扣+:613.4。
[0084] *N-(l-(dihydroxy(methyl)silyl)-3-hydroxybutan-2-yl)-4-((4-(morphoIinom ethyl)phenyl)ethynyl)benzamide(20)的制備
[0085] 將6Omg的化合物19溶于2mI四氨巧喃中，加入0.4mL水和I Omg氨氧化鋼，室溫?cái)埌?30分鐘。6解^酸調(diào)節(jié)抑值為2-3，有固體析出抽濾得化合物1128111邑。651-15:曲+扣+ :469.3。
[0086] 《實(shí)施例4》含=氣乙酷基代表化合物23的制備
[0087] 化合物23的制備路線見圖5,具體操作如W下所述。
[0088] * (5R)-5-methy；L-4-( 2,2,Iuoroacety Doxazol idin-2-〇ne( 21)的制備
[0089] 將200mg化合物I溶于4mL無水THF中，冷卻到-78°C。加入LDA(0.75mL，2M)攬拌10分 鐘后，室溫?cái)埌?5分鐘。將反應(yīng)瓶重新冷卻至-78°C，加入S氣乙酸乙醋（357mg)并攬拌2小 時(shí)。加入50mL乙酸乙醋，依次用飽和碳酸氨鋼、飽和氯化錠和飽和食鹽水各20mL洗涂，有機(jī) 相用無水硫酸鋼干燥濃縮。柱層析（石油酸/乙酸乙醋= 10:1)，得產(chǎn)物199mg，收率為 80.2%〇ESI-MS：[M+H]":198.1〇
[0090] *(4R)-3-amin〇-l, 1, l-trif luoro-A-hydro巧pentan-2-〇ne(22)的制備
[0091] 將化合物21 (133mg)溶于2mg四氨巧喃，加入0.8mL水和54mg的KOH室溫?cái)埌杌?。?除溶劑，柱層析（二氯甲燒/甲醇= 80:1)得產(chǎn)物589mg，收率為77.7%DESI-MS:[M+Hr: 192.1，[M+Na]+:214.1。
[0092] *4-((4-(morpholinomethy1)phenyl)ethyny1)-N-(1, I ,1-trifluor〇-4-hy 化 ox;y-2-〇xopentan-3-yl)benzamide(23)的制備
[0093] 將45mg化合物22和160mg化合物9溶于2mL的DMF中，加入380mg的HATU和216化的 DIEA，室溫反應(yīng)化。加入20mL乙酸乙醋，依次用飽和碳酸氨鋼、飽和氯化錠和飽和食鹽水各 20mL洗涂，有機(jī)相用無水硫酸鋼干燥濃縮。柱層析得產(chǎn)物ISlmg，收率為76.2 % dESI-MS : [M+ H] +: 475.3，[M+化]+ :497.3。
[0094]《實(shí)施例5》化合物11、15、20、23對革蘭氏陰性菌的最低抑制濃度齡賄]測定 [00M]通過抑菌實(shí)驗(yàn)證明化合物11、15、20、23對于大腸桿菌、綠假單胞菌、鮑氏不動(dòng)桿 菌、克氏肺炎菌和陰溝桿菌等革蘭氏陰性菌都具有較好的抑菌活性，其最低抑制濃度MIC在 O. 1-4.0微克/毫升范圍內(nèi)（具體見表1)，活性和陽性對照CHIR-090相當(dāng)。陽性對照CHIR-090 是按照文獻(xiàn)(N.H.AndersonJ.Bowan,A.Erwin,e化 1. ,W02004/062601)方法制備的。
[0096] 表1.化合物11、15、20、23對革蘭氏陰性菌的最低抑制濃度(11〇
[0097]
[0098] MIC值具體測試方法是：
[0099] 將新鮮的細(xì)菌過夜培養(yǎng)物再懸浮于無菌鹽水中，調(diào)節(jié)濁度為0.5麥?zhǔn)蠁挝?，隨后用 陽離子調(diào)節(jié)的Muel Ier-化nton肉湯稀釋200倍，得到每毫升SxlO5個(gè)菌落形成單位的最終接 種物。用100%的二甲基亞諷(DMSO)制備化合物的兩倍系列稀釋液，最高濃度是最低濃度的 100倍;將所得到的化合物稀釋系列用10倍無菌水再稀釋，得到含DMS010%的待測化合物溶 液。將90化的接種液和10化的待測化合物溶液加入到微量滴定孔中，37°C解育20小時(shí)。隨后 用微量滴定板讀數(shù)器在600nM檢測，并結(jié)合視檢確定最低抑制濃度MIC。
[0100] 實(shí)驗(yàn)所用菌種均通過北京中原公司購自美國ATCC生物制品中屯、。
[0101] 實(shí)施例6化合物11、15、20、23對LpxC酶抑制的ICso
[0102] 酶抑制試驗(yàn)表明化合物11、15、20、2 3在1-1 OOnM能夠?qū). COli LpxC和 P. aeruginosa LpxC酶的催化活性產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制作用，其IC日日見表2。
[0103] 表2化合物11、15、20、23對LpxC酶酶抑制作用
[0104]
[01化]IC日日的具體測試方法是：
[0106] 按照文獻(xiàn)（Hyland S A,Eveland S S,Anderson M S Journal of bacteriology, 1997,179(6): 2029-2037)的方法轉(zhuǎn)染表達(dá)并純化E. COIiLpxC和P.aeruginosa LpxC酶。利 用P.aeruginosa LpxC酶將UDP-3-〇-(R-3-hydroxyacyl)-N_acetylglucosamine(購自 SigmaAl化ich Co.Ltd)水解為UDP-3-〇-(R-3-hy化oxyac}^)-glucosamine，并繪制成含量 標(biāo)準(zhǔn)曲線備用。
[0107] 測試過程：
[〇1〇引 向每孔包含50mM PH7.5的憐酸鋼緩沖液和0.005%Trition X-IOO的總體積為50y L的36孔板中，加入不同濃度的待測化合物的DMSO溶液和等體積的LpxC酶，使待測化合物終 濃度為1碰、5〇1、10碰、25碰，酶終濃度為1碰，然后加入終濃度為2咖的底物師?-3-0-(1?-3-hy化oxya巧l)-N-acetylglucosamine，反應(yīng)20min后向每孔中加入20%的醋酸中止反應(yīng)。將 反應(yīng)混合物離屯、，用液質(zhì)聯(lián)用分析得到產(chǎn)物的峰面積，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出產(chǎn)物的含量。 將不加抑制劑(待測化合物)時(shí)的抑制率指定為〇%，反應(yīng)開始前用醋酸中止反應(yīng)的抑制率 定為100%。將測得的酶催化產(chǎn)物含量轉(zhuǎn)化為百分抑制率，計(jì)算得到ICso值。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一類新型鋅離子螯合基團(tuán)化合物，其結(jié)構(gòu)如式1所示：其中： Ri為磷酸基、硼酸基、硅酸基和三氟乙酰基； R2為少于4個(gè)碳原子的烷基，少于4個(gè)碳原子的羥烷基； Χ = ΝΗ,0； Y=羰基，亞甲基； Α為炔基，^炔基； B為6個(gè)碳原子以下(含6個(gè)碳原子)的飽和、不飽和的烷烴，氫原子； 以上Ri、R2、X、A、B之間可以任意組合。2. 制備權(quán)利要求1所述化合物的方法，其步驟是，將式II和式III所示化合物通過縮合 反應(yīng)得到，其中：1?1、辦、乂、￥^、8的定義同權(quán)利要求1，且1?1、1?2、乂、￥^、8之間可以任意組合。3. 權(quán)利要求2所述的方法，其特征是，所使用的縮合劑為HATU、HBTU、EDC、DCC、DIC、 PyBOP和PyAOP;所使用的堿為TEA、DIEA和DMAP。4. 權(quán)利要求2所述的方法，其中式II所示化合物是通過金屬催化的的偶聯(lián)反應(yīng)制得;式 III所示化合物是通過還原、溴代、消除和加成等反應(yīng)制得。5. 權(quán)利要求1所述化合物在制備LpxC抑制劑和抗革蘭氏陰性菌感染藥物中的應(yīng)用。6. 以權(quán)利要求1所述化合物為有效成分與藥學(xué)上可接受的一種或多種載體組成的組合 物。7. 權(quán)利要求6所述組合物在制備LpxC抑制劑和抗革蘭氏陰性菌感染藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求5、7所述的應(yīng)用，其抗革蘭氏陰性菌的藥物包括但不限于抗綠假單胞菌、耐 碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌的藥物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及含有新型鋅離子螯合基團(tuán)的化合物及其制備方法和在制備抗革蘭氏陰性菌感染藥物中的應(yīng)用；試驗(yàn)研究表明，所述鋅離子螯合基團(tuán)化合物及其組合物有望用于制備抗革蘭氏陰性敏感菌和耐藥菌感染藥物。
【IPC分類】A61K31/5375, A61K31/675, A61K31/69, C07F9/6533, C07D295/155, A61P31/04, C07F7/08, C07F5/02, A61K31/695
【公開號】CN105669750
【申請?zhí)枴緾N201610115005
【發(fā)明人】王玉成, 張國寧, 王菊仙, 李強(qiáng), 白曉光, 游雪甫, 李子強(qiáng), 周磊, 朱梅, 任金鳳, 趙越
【申請人】中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年3月1日