洗 脫，洗脫劑為乙醇與水的體積比為10:90，洗脫3個柱體積，收集洗脫液，命名為MM-1，備用；
[0095] S3.將步驟S2中收集到的流分MM-1用反相ODS柱層析進行洗脫，洗脫劑為甲醇-水 系統(tǒng)，其體積比為28:72，洗脫18個柱體積，按每3個柱體積收集一個流分的洗脫液，按順序 收集 6 個流分，分別命名為:MM-11，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16備用；
[0096] S4.將步驟S3中的收集到的流分MM-13用制備液相分離，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*250mm，流速：10ml /min，流動相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇：水：乙酸的體積比為10: 90:0.01，按出峰順序收集洗脫液，共收集4個流分，分別命名為MM-131，MM-13 2，MM-133，MM- 134,備用；
[0097] S5.將步驟S4中收集到的流分MM-132用制備液相純化，制備液相色譜柱為:YMC， 20mm*250mm，流速:5ml /min，流動相為甲醇-水-乙酸系統(tǒng)，甲醇:水：乙酸的體積比為15:85: 0.01，收集洗脫液，重結(jié)晶后得到所述苯丙素類化合物。
[009引將實施例1至實施例5制備得到的化合物進行質(zhì)譜、核磁共振氨譜、核磁共振碳譜 的檢測，結(jié)果證明所得化合物為:3-徑基-4-甲氧基-5-葡萄糖基-9，9-二甲基苯丙醇。其結(jié) 構(gòu)式如式(I)所示：
[0099]
[0100] 其質(zhì)譜、核磁共振氨譜、核磁共振碳譜的譜圖數(shù)據(jù)如下：
[0101] 皿-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z 411.1713，結(jié)合核磁特征，可得分子式為(：1姐28〇9，不 飽和度為5。
[0102] iH-NMR(600MHz，CD3〇D):6.97(d，lH)，6.29(d，lH)，4.89(d，lH)，3.80(s，3H)，3.56 (m，2H)，3.12-3.89^H，glc-H)，3.03(m，2H)，1.34(s，3H)，1.18(s，3H)。
[0103] "C-匪R(150MHz，CD30D):158.2(C-5),155.6(C-4),131.4(C-3),130.0(C-2), 129.5(C-1),117.5(C-6),102.2(C-r),61.0-72.4(C2'-6'），68.7(C-9),58.1(-0C曲）， 48.5(C-7)，43.9(C-8)，27.8(-CH3)，21.0(-CH3)。
[0104] 實施例6苯丙素類化合物鹽的制備
[0105] 苯丙素類化合物鹽酸鹽的制備：
[0106] 攬拌下將該苯丙素類化合物甲醇溶液中滴加飽和鹽酸至pH值2-3，攬拌下滴加乙 臘，抽濾，干燥得到白色粉末固體，即為苯丙素類化合物的鹽酸鹽。
[0107] 苯丙素類化合物橫酸鹽的制備：
[0108] 在含有該苯丙素類化合物、溶劑、橫酸、中性油和促進劑的反應(yīng)體系中加入堿金屬 的氨氧化物，加入溶劑、低級醇和助促進劑，通入二氧化碳，分離得到白色粉末固體，即為苯 丙素類化合物的橫酸鹽。
[0109] 苯丙素類化合物鐘鹽或鋼鹽的制備：
[0110] 將溶于乙醇中的K0H或化0H加入該苯丙素類化合物中，攬拌下加熱回流反應(yīng)，冷制 室溫，攬拌下滴加乙臘，抽濾，干燥得白色固體，即為該苯丙素類化合物的鐘鹽或鋼鹽。
[0111] 苯丙素類化合物錠鹽的制備：
[0112] 攬拌下將該苯丙素類化合物甲醇溶液中滴加飽和氨水至pH值9-11，攬拌下滴加乙 臘，抽濾，干燥得到白色固體，即為苯丙素類化合物的錠鹽。
[0113] 上述化合物鹽的譜圖數(shù)據(jù)：
[0114] 苯丙素類化合物鹽酸鹽：ESIMS顯示m/z 424.67，核磁特征1片匪3(6001化， CD30D):6.40(d，lH)，6.19(d，lH)，5.09(d，lH)，3.90(s，3H)，3.34(m，2H)，3.13(m，2H)，1.44 (s,3H),1.28(s,3H)〇
[0115] 苯丙素類化合物橫酸鹽：ESIMS顯示為m/z 452.17，核磁特征4-顯3(6001化， CD30D):6.28(d,lH),6.25(d,lH),4.87(d,lH),3.84(s,3H),3.51(m,2H),3.00(m,2H),1.24 (s，3H)，l.ll(s，3H)。
[0116] 苯丙素類化合物鐘鹽或鋼鹽：
[0117] 鐘鹽:ESIMS顯示m/z 426.87，核磁特征 1h-NMR(600MHz，CD30D): 6.23(d，1H)，6.20 (d，lH)，4.41(d，lH)，3.57(s，3H)，3.41(m，2H)，3.01(m，2H)，1.15(s，3H)，1.02(s，3H)。
[011 引 鋼鹽:ESIMS顯示m/z 411.17，核磁特征 1h-NMR(600MHz，CD30D): 6.25 (d，1H)，6.21 (d，lH)，4.47(d，lH)，3.58(s，3H)，3.44(m，2H)，3.01(m，2H)，1.17(s，3H)，1.08(s，3H)。
[0119] 苯丙素類化合物錠鹽:ESIMS顯示m/z 403.47，核磁特征1h-NMR(600MHz，CD30D): 6.22(d,lH),6.21(d,lH),4.97(d,lH),3.80(s,3H),3.51(m,2H),3.03(m,2H),1.44(s,3H), 1.38(s，3H)。
[0120] 上述苯丙素類化合物鹽的結(jié)構(gòu)式如式(IV)~式(Μ)所示。
[0121]
[0122]
[0123] 其中，式(IV)為制備得到的苯丙素類化合物鹽酸鹽，式（V)為制備得到的苯丙素 類化合物的其中一種橫酸鹽，式（VI)為制備得到的苯丙素類化合物的其中一種鐘鹽，式 (W)為制備得到的苯丙素類化合物的其中一種鋼鹽，式(VDI)為制備得到的苯丙素類化合物 的其中一種錠鹽。
[0124] 實驗例7應(yīng)用試驗
[0125] 本發(fā)明所述化合物W及鹽對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7巨隧細胞氧化應(yīng)激與炎癥的影 響。（為了實驗過程中記錄方便，W下將本發(fā)明所述的苯丙素類化合物標號為:藥物MM-132， 即本發(fā)明中所述的藥物MM-132即是指本發(fā)明式（I)所示苯丙素類化合物或其藥學(xué)上可接受 的鹽。）
[0126] 1材料與方法
[0127] 1.1藥品及儀器
[0128] 脂多糖（lipopolysaccharide，LPS)，MTT購自 Sigma公司；小鼠巨隧細胞Raw 264.7 購自湘雅細胞庫；PBS; DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素與鏈霉素；全自動酶標儀；恒溫 C02培養(yǎng)箱。
[01巧]小鼠白介素 l-f3(IL-1-f3化LISA檢測試劑盒，批號：2014/06(96T);小鼠白介素6 (IL-6化LISA檢測試劑盒，批號：2014/06(96T);小鼠腫瘤壞死因子-a(TNF-c〇ELISA檢測試 劑盒，批號:2014/06(96T);小鼠一氧化氮(NO化LISA檢測試劑盒，批號:2014/10(96T);小鼠 徑基自由基(0H化LISA檢測試劑盒，批號:2014/10(96Τ)。
[0130] 1.2藥物制備
[0131] 首先用少量DMS0溶解，然后用DMEM稀釋至一定的濃度，使終濃度中DMS0含量少于 1%〇。
[0132] 1.3細胞培養(yǎng)
[0133] 小鼠巨隧細胞Raw 264.7培養(yǎng)于含10%熱滅活（56°(：，3〇111111)的胎牛血清巧85)、 lOU/mL青霉素鋼、lOOyg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，37°C、5 % C〇2恒溫培養(yǎng)箱中解育生長。
[0134] 1.4細胞活力測定
[0135] 細胞活力通過MTT法來測定。將細胞制成細胞懸液接種于96孔板(1 X 104個/孔)解 育2地，再同步化2地，然后將不同濃度的藥物作用于細胞化，然后再加入LPS(30yg/mL)刺激 2地，吸棄原培養(yǎng)基，每孔加入10化L的MTT(0.5mg/mL)繼續(xù)解育4h，吸棄培養(yǎng)基，每孔加入 150化的DMS0，搖床振搖lOmin，在490nm處測定吸光度。
[0136] 1.5N0含量測定
[0137] Raw 264.7細胞接種于96孔板2地，再同步化2地，然后將不同濃度的藥物作用于細 胞化，然后再加入LPS( 30yg/mL)刺激2地，最后收集上清液，并于1000化pm離屯、5min，分裝上 清并置于-80°C保存?zhèn)溆?。通過小鼠 NO試劑盒測定NO含量。
[013引 1.6炎癥因子TNF-a，比-1β，比-6測量
[0139] 樣品取1.5制備好的樣品用于后續(xù)炎癥因子測定。細胞產(chǎn)生TNF-a，化-1β，化-6的 量通過小鼠 TNF-a，比-1β，比-6試劑盒來測定。
[0140] 1.70Η含量測定
[0141] 樣品取1.5制備好的樣品用于0Η因子測定。通過0訊式劑盒測定含量。
[0142] 1.8統(tǒng)計分析
[0143] 采用SPSS17.0軟件，實驗數(shù)據(jù)W(x±s表示;所得數(shù)據(jù)通過用單因素方差分析，方 差齊性用LSD檢驗，方差不齊用Dunnett T3檢驗。
[0144] 2實驗結(jié)果
[0145] 2.1細胞活力
[0146] 藥物對細胞活力的影響通過MTT法來評價。如圖3所示，藥物MM-132在1.50-13.50μ g/mL濃度范圍內(nèi)對Raw 264.7細胞活力沒有顯著影響；因此在此范圍濃度下的藥物濃度對 于后續(xù)實驗是合適的。
[0147] 2.2藥物抑制NO的產(chǎn)生
[014引如圖4所示，通過LPS刺激Raw 264.7細胞，其產(chǎn)生N0(65.81 ±2.93IU/mL)含量與正 常組N0(33.61±2.19IU/mL)相比明顯升高(p<0.01)。藥物MM