一種高純度葡甘露聚糖制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種由天然植物中提取的葡甘露聚糖提取物，本發(fā)明同時涉及所述葡甘露聚糖提取物在制備藥品和醫(yī)用產(chǎn)品中的應(yīng)用，屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
技術(shù)背景
[0002]葡甘露聚糖是一種常見的天然黏性多糖，其主鏈為D-甘露糖和D-葡葡糖組成，一般通過β1_4位糖苷鍵連接，并帶有部分支鏈結(jié)構(gòu)和乙?；揎?。該類多糖主要在植物中發(fā)現(xiàn)，例如魔宇、戶碁、白及(又名白發(fā)，Bletilla striata)等，在天然食品、化妝品、醫(yī)藥用品等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，具有顯著經(jīng)濟價值。
[0003]白及多糖是傳統(tǒng)中藥白及中的主要有效成份，具有收斂、止血、補肺等功能并用于相關(guān)藥品中?，F(xiàn)有白及多糖(又名白及膠)一般采用水提醇沉的生產(chǎn)工藝。周敏等公開了“一種白及多糖及其制備方法和新用途”(CN200810233680.6)，該白及多糖經(jīng)水提取、樹脂去蛋白后用乙醇沉淀出白及多糖，含量達(dá)到70?74%。宋力飛公開了 “一種白芨多糖制備的工藝組合”(CN200910302937.3)，在常溫下用80?120倍制備白芨勻漿，經(jīng)沉降離心、介質(zhì)過濾(助濾劑滑石粉、活性炭、硅藻上)處理，再用2000?10nm的陶瓷膜進(jìn)行微濾，所得截留液經(jīng)醇沉、干燥，獲得白芨多糖。本發(fā)明在前期研究中，公開了 “一種葡甘露聚糖酸水解產(chǎn)物的制備方法”(CN201010166718.X)，所述方法采用分子量不小于100kD(lkD為1000道爾頓分子量)的魔芋或白及葡甘露聚糖原料，通過在PH1.0-3.0酸度范圍和45-100°C溫度范圍內(nèi)進(jìn)行控制酸水解，經(jīng)醇沉、干燥獲得特定分子量(1?150kD)的葡甘露聚糖酸水解產(chǎn)物。
[0004]發(fā)明人在白及多糖制備工藝進(jìn)一步研制過程中，發(fā)現(xiàn)水提醇沉工藝雖然可以有效獲得白及多糖，但由于白及多糖提取液黏度較高，醇沉過程中提取液里共存的多酚類色素、不溶性微粒等雜質(zhì)會一起沉降析出，從而影響白及多糖純度和色澤;酸水解過程中寡糖等部分有機物也會在醇沉過程中同時析出。在藥物及其它醫(yī)學(xué)用品等領(lǐng)域，對功能性原料的純度、有關(guān)物質(zhì)等質(zhì)量有很高要求。為此，本發(fā)明經(jīng)深入研究，最終發(fā)現(xiàn)采用膜處理技術(shù)，并結(jié)合助濾劑輔助過濾、微濾等前處理技術(shù)，可以成功獲得純度大于90%的高純度葡甘露聚糖產(chǎn)品，從而完成了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種高純度葡甘露聚糖的制備方法。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案。
[0007]—種高純度葡甘露聚糖的制備方法，其特征在于采用以下步驟:
[0008](I)選取葡甘露聚糖原料，制備成0.5 % -10.0 %的葡甘露聚糖溶液GM-A;
[0009](2)由(I)所得葡甘露聚糖溶液GM-A，加入助濾劑處理，過濾，得葡甘露聚糖溶液GM-B ；
[0010](3)由(2)所得葡甘露聚糖溶液GM-B，采用100?100nm微濾膜過濾，得葡甘露聚糖溶液GM-C;
[0011](4)由(3)所得葡甘露聚糖溶液GM-C，采用截留分子量2?10kD的超濾膜濃縮處理，得葡甘露聚糖濃縮液GM-D;
[0012](5)由(4)所得葡甘露聚糖濃縮液GM-D，經(jīng)進(jìn)一步濃縮，干燥，得高純度葡甘露聚糖;或經(jīng)進(jìn)一步配制，分裝，滅菌，得高純度葡甘露聚糖液體制劑。
[0013]本發(fā)明所述高純度葡甘露聚糖為分子量范圍10?100kD的均一多糖，其純度大于90 %，并且分子量2kD以下的有機物含量小于5 %。步驟(I)中葡甘露聚糖原料為相應(yīng)分子量范圍10?100kD的均一多糖，選自天然來源的魔芋多糖或白及多糖，或其水解產(chǎn)物;其制備方法可參考已知文獻(xiàn)采用水提醇沉、酸水解等方法進(jìn)行制備，也可從商業(yè)途徑獲得。步驟
(2)中所述助濾劑選自滑石粉、活性炭、硅藻土中的一種或幾種的混合物，其中優(yōu)選活性炭，其過濾方式可采用常見的板框過濾、鈦棒過濾等方式，并可根據(jù)需要在過濾前采用離心方法除去活性炭。步驟(3)中所述微濾膜孔徑選自100?100nm范圍，更優(yōu)選200?500nm范圍。步驟(4)中所述超濾膜截留分子量在2?100kD，并且在葡甘露聚糖原料分子量的1/5以下。步驟(5)中所述高純度葡甘露聚糖干燥方法選自冷凍干燥、噴霧干燥、真空干燥中的一種；所述高純度葡甘露聚糖液體制劑為口服液或注射液。
[0014]本發(fā)明進(jìn)一步提供一種高純度葡甘露聚糖的制備方法，其特征在于采用以下步驟:
[0015](I)選取分子量范圍10?200kD的葡甘露聚糖原料，制備成1.0%_10.0%的葡甘露聚糖溶液GM-A;
[0016](2)由(I)所得葡甘露聚糖溶液GM-A，加入活性炭助濾劑處理，過濾，得葡甘露聚糖溶液GM-B;
[0017](3)由(2)所得葡甘露聚糖溶液GM-B，采用200?500nm微濾膜過濾，得葡甘露聚糖溶液GM-C;
[0018](4)由(3)所得葡甘露聚糖溶液GM-C，采用截留分子量2?40kD的超濾膜濃縮處理，得葡甘露聚糖濃縮液GM-D;
[0019](5)由(4)所得葡甘露聚糖濃縮液GM-D，經(jīng)進(jìn)一步濃縮，干燥，得高純度葡甘露聚糖;或經(jīng)進(jìn)一步配制，分裝，滅菌，得高純度葡甘露聚糖液體制劑。
[0020]本發(fā)明針對傳統(tǒng)水提醇沉工藝制備的白及多糖產(chǎn)品純度低、相關(guān)雜質(zhì)含量高等缺陷，通過反復(fù)實驗和大量研究，采用助濾劑輔助過濾-微濾-超濾-干燥等組合技術(shù)工藝，成功研制出高純度葡甘露聚糖的生產(chǎn)工藝，所述制備工藝簡潔、可控，容易實現(xiàn)放大生產(chǎn)。所獲得的葡甘露聚糖產(chǎn)品純度高、有關(guān)物質(zhì)含量低、穩(wěn)定性好，質(zhì)量可控，可滿足藥用原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因而所述高純度葡甘露聚糖可根據(jù)已公開的葡甘露聚糖應(yīng)用文獻(xiàn)，應(yīng)用于制備藥物以及藥用輔料、醫(yī)療器械等相關(guān)醫(yī)用產(chǎn)品。
[0021]本
【發(fā)明內(nèi)容】
是通過系統(tǒng)研究和大量創(chuàng)造性實驗完成的，以下述具體實施例進(jìn)行說明。
【具體實施方式】
[0022]本發(fā)明所述的高純度葡甘露聚糖，以白及多糖和魔芋多糖制備方法為例，是按如下實施例所表示的方法制造或發(fā)現(xiàn)的，所涉及到的方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠掌握和運用的技術(shù)手段。但以下實施例不得理解為任何意義上的對本發(fā)明權(quán)利要求的限制。
[0023]本發(fā)明所述實施例中，葡甘露聚糖原料的制備及相關(guān)樣品分析方法參考發(fā)明人已公開專利(CN201010166718.X)、論著[張燕，白及多糖的酸水解動力學(xué)研究，蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文，2010]等文獻(xiàn)進(jìn)行。本發(fā)明所述葡甘露聚糖分子量均為平均重均分子量(Mw)，所述均一多糖的多分散系數(shù)(PI =Mw/Mn)—般在1.5?3.5范圍。
[0024]實施例1:白及多糖BT180的制備
[0025]白及藥材為市售品，其中所含白及多糖經(jīng)HPGPC分析為Mwl86kD的均一多糖。
[0026](I)稱取白及藥材飲片4.0kg，分別加入80kg、70kg水提取2次，每次1.5hr，提取液濃縮至40L，加入1.5倍95 %乙醇使沉淀，用200目濾布過濾，得白及多糖粗品GM-A(按固含物計得率15%);取GM-A60g(按固含物計，下同)，用3L水在60 °C溶解，配制成2.0 %的GM-A溶液；
[0027](2)在2.0%GM-A中加入20g顆?；钚蕴恐鸀V劑，煮沸30min，室溫靜置過夜，脫脂棉和濾紙過濾，得淺黃色溶液GM-B 2.7L；
[0028](3)采用450nm水系微孔濾膜過濾GM-B，得透明淺黃色溶液GM-C 2.6L;
[0029](4)采用截留分子量40kD的聚砜超濾膜組件對GM-C進(jìn)行濃縮處理，同時超濾循環(huán)液中補加純凈水總計6L，最終得透明無色截留液GM-D2.2L;
[0030](5)由(4)所