一種大米蛋白/阿魏酸復(fù)合物或交聯(lián)物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于谷物蛋白深加工領(lǐng)域，具體是一種大米蛋白/阿魏酸復(fù)合物或交聯(lián)物 的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人體新陳代謝產(chǎn)生的自由基對機(jī)體組織細(xì)胞具有很強(qiáng)的殺傷作用，可引起細(xì)胞死 亡和組織損傷，如動脈粥樣硬化、癌癥、肺損傷和衰老等。植物蛋白作為一種，因其具有加工 特性和營養(yǎng)特性而成為近年來研究的熱點(diǎn)。大米蛋白（Rice protein,RP)是一種優(yōu)質(zhì)的植 物蛋白，具有氨基酸組成平衡合理，口感溫和，低過敏性和降低膽固醇等優(yōu)點(diǎn)；而且大米蛋 白中含有人體所需的各種氨基酸，配比合理，符合WH0/FA0推薦的理想模式。但是W大米蛋 白制備的富含油脂的食品易發(fā)生抗氧化降解，多酪類物質(zhì)由于其具有天然的抗氧化特性， 越來越多的應(yīng)用到富含油脂的食品加工中，從而起到抗氧化作用。蛋白與多酪的結(jié)合即保 留蛋白質(zhì)的功能性質(zhì)，同時又賦予了蛋白質(zhì)更高的抗氧化特性，運(yùn)些具有更高活性的產(chǎn)物 應(yīng)用于食品、化妝品保健、醫(yī)藥領(lǐng)域有很好市場前景。
[0003] 阿魏酸(Ferulic acid,FA)是谷物中的常見的酪酸類物質(zhì)，有較強(qiáng)的抑制脂類的 氧化降解的能力和低毒性，廣泛使用在食品和藥品行業(yè)。研究發(fā)現(xiàn)自然條件下，阿魏酸與蛋 白質(zhì)會發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，阿魏酸與蛋白質(zhì)能夠W非共價(jià)鍵(氨鍵、疏水或離子的相互作用)或 共價(jià)鍵相連。此外，堿性或者高溫的反應(yīng)條件將會促進(jìn)蛋白與酪酸更好的交聯(lián)，可能是由于 阿魏酸在堿性條件下易被氧化成釀，釀可W與蛋白質(zhì)分子中的氨基和琉基發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)。 但是化學(xué)法存在W下不足:反應(yīng)條件在高溫W及堿性條件下可能會產(chǎn)生有毒中間產(chǎn)物，食 用性差，顏色深，反應(yīng)條件不穩(wěn)定。一般來說，酶法交聯(lián)條件比較溫和。
[0004] 漆酶化accase，LAC)是一種多酪氧化酶，能結(jié)合多個銅離子，屬于銅藍(lán)氧化酶。漆 酶作為生物催化劑，不僅具有高效率的催化效果，而且其催化的最終產(chǎn)物是水，因此也是一 種綠色催化劑。漆酶催化酪酸與蛋白質(zhì)交聯(lián)有效改善蛋白的功能性質(zhì)和生理活性(抑菌作 用、抗氧化活性），可能歸因于酪酸經(jīng)漆酶氧化后能夠與蛋白質(zhì)中氨基、琉基發(fā)生反應(yīng)引起 蛋白質(zhì)的交聯(lián)，交聯(lián)物保留了酪類活性基團(tuán)，從而提高蛋白質(zhì)的天然屬性，運(yùn)些產(chǎn)物可W應(yīng) 用到一些抗氧化能力強(qiáng)的醫(yī)療、食品與高分子領(lǐng)域。因此，本文選擇阿魏酸與大米蛋白相互 結(jié)合W期在獲得高抗氧化活性的同時改善其功能性質(zhì)，運(yùn)對充分有效地利用大米蛋白資源 具有深遠(yuǎn)的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明針對現(xiàn)有大米蛋白與阿魏酸相互作用及其抗氧化機(jī)制研究并不完善，制備 具有更高抗氧化活性的阿魏酸/大米蛋白交聯(lián)物，并且在體系中添加多酪氧化酶，從而獲得 具有更高抗氧化活性的功能性大米蛋白配料，提供一種新型的酶法制備功能性米慷蛋白的 方法。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] -種大米蛋白/阿魏酸復(fù)合物或交聯(lián)物的制備方法，包括如下步驟：
[0008] (1)配制大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液，所述大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液中，大 米蛋白的質(zhì)量濃度為8~12mg/mL，阿魏酸的質(zhì)量濃度為0.05~0.4mg/mL，漆酶的質(zhì)量濃度 為0~0.Img/mL，
[0009] (2)大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液經(jīng)攬拌充分反應(yīng)后，通過透析除去未與大米蛋 白結(jié)合的游離阿魏酸，再冷凍干燥得到大米蛋白/阿魏酸復(fù)合物或大米蛋白/阿魏酸交聯(lián) 物。
[0010] 所述大米蛋白的制備方法如下，
[0011] (1)將脫脂的大米粉按l:l〇(w/v)的料液比分散于水中，攬拌均勻得到大米粉分散 液，
[001^ (2)將大米粉分散液的抑調(diào)節(jié)至10.0,室溫25°C攬拌化，再離屯、得到上清液，
[001引（3)將上清液pH調(diào)節(jié)至4.8得到蛋白質(zhì)沉淀，蛋白質(zhì)沉淀加水得到蛋白液，蛋白液 經(jīng)中和、透析、冷凍干燥后獲得大米蛋白。
[0014] 所述大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液配制方法如下：
[0015] (1)將大米蛋白溶解在抑=7.0、50mmol/L的PBS緩沖液中，攬拌使其充分溶解得到 大米蛋白分散液；
[0016] (2)將阿魏酸溶解在pH = 7.0、50mmol/L的PBS緩沖液中，水浴加熱促進(jìn)其完全溶 解，得到阿魏酸溶液；
[0017] (3)將大米蛋白分散液和阿魏酸溶液混合均勻，再加入漆酶攬拌均勻，得到大米蛋 白/阿魏酸/漆酶混合液。
[0018] 步驟(2)中，大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液的反應(yīng)工藝條件如下:反應(yīng)溫度為25~ 30°(：，反應(yīng)時間為0.5~地。
[0019] 步驟(2)中，當(dāng)大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液中漆酶的質(zhì)量濃度不為零時，反應(yīng)工 藝條件如下:反應(yīng)溫度為25~30°C，反應(yīng)時間為3~地。
[0020] 步驟(2)中，所述透析的工藝條件如下:透析溫度為4°C，透析時間為2地。
[0021 ]步驟(1)中，阿魏酸與漆酶的質(zhì)量濃度之比為4:1。
[0022] 上述大米蛋白/阿魏酸復(fù)合物或交聯(lián)物的制備方法，當(dāng)漆酶的添加量為零時，得到 的是大米蛋白/阿魏酸復(fù)合物，當(dāng)漆酶的添加量不為零時，由于發(fā)生了酶法接枝反應(yīng)，得到 的是大米蛋白/阿魏酸交聯(lián)物。
[0023] 本發(fā)明相對現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及有益效果：
[0024] (1)本發(fā)明可實(shí)現(xiàn)連續(xù)化生產(chǎn)，大米蛋白/阿魏酸交聯(lián)物具有較好的體外抗氧化活 性;可應(yīng)用到一些抗氧化能力強(qiáng)的醫(yī)療、食品與高分子領(lǐng)域。
[0025] (2)本發(fā)明方法為一種酶法手段，溫和、安全;實(shí)驗(yàn)操作簡單。
【具體實(shí)施方式】 [00%] 實(shí)施例1
[0027] -種大米蛋白/阿魏酸復(fù)合物的制備方法，包括如下步驟：
[0028] (1)配制大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液，所述大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液中，大 米蛋白的質(zhì)量濃度為1 Omg/mL，阿魏酸的質(zhì)量濃度為0.4mg/mL，漆酶的質(zhì)量濃度為Omg/mL。
[0029] (2)大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液經(jīng)攬拌充分反應(yīng)后，反應(yīng)溫度為25°C，反應(yīng)時間 為地，通過透析除去未與大米蛋白結(jié)合的游離阿魏酸，透析溫度為4°C，透析時間為24h，再 冷凍干燥得到大米蛋白/阿魏酸復(fù)合物。
[0030] 所述大米蛋白的制備方法如下，
[0031] (1)將脫脂的大米粉按l:l〇(w/v)的料液比分散于水中，攬拌均勻得到大米粉分散 液，
[0032] (2)將大米粉分散液的抑調(diào)節(jié)至10.0,室溫25°C攬拌化，再離屯、得到上清液，
[0033] (3)將上清液pH調(diào)節(jié)至4.8得到蛋白質(zhì)沉淀，蛋白質(zhì)沉淀加水得到蛋白液，蛋白液 經(jīng)中和、透析、冷凍干燥后獲得大米蛋白。
[0034] 所述大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液配制方法如下：
[0035] (1)將大米蛋白溶解在抑=7.0、50mmol/L的PBS緩沖液中，攬拌使其充分溶解得到 大米蛋白分散液；
[0036] (2)將阿魏酸溶解在pH = 7.0、50mmol/L的PBS緩沖液中，水浴加熱促進(jìn)其完全溶 解，得到阿魏酸溶液；
[0037] (3)將大米蛋白分散液和阿魏酸溶液混合均勻，再加入漆酶攬拌均勻，得到大米蛋 白/阿魏酸/漆酶混合液。
[0038] 表1實(shí)施例1的指標(biāo)
[0039]
[0040] 從表1可W看出，相比較大米蛋白清除DPPH自由基能力（32.305%)，大米蛋白與阿 魏酸結(jié)合后清除DPPH自由基能力增加到46.578%，總抗氧化能力指標(biāo)(清除ABTS自由基能 力和氧自由基吸收能力0RAC)同樣高于未處理的大米蛋白，說明大米蛋白/阿魏酸在自然條 件下形成的大米蛋白/阿魏酸的復(fù)合改善大米蛋白的抗氧化活性。
[0041 ] 實(shí)施例2
[0042] -種大米蛋白/阿魏酸交聯(lián)物的制備方法，包括如下步驟：
[0043] (1)配制大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液，所述大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液中，大 米蛋白的質(zhì)量濃度為lOmg/mL，阿魏酸的質(zhì)量濃度為0.4mg/mL，漆酶的質(zhì)量濃度為0 . Img/ rnL ο
[0044] (2)大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液經(jīng)攬拌充分反應(yīng)后，反應(yīng)溫度為25°C，反應(yīng)時間 為地，通過透析除去未與大米蛋白結(jié)合的游離阿魏酸，透析溫度為4°C，透析時間為24h，再 冷凍干燥得到大米蛋白/阿魏酸交聯(lián)物。
[0045] 所述大米蛋白的制備方法如下，
[0046] (1)將脫脂的大米粉按l:l〇(w/v)的料液比分散于水中，攬拌均勻得到大米粉分散 液，
[0047] (2)將大米粉分散液的抑調(diào)節(jié)至10.0,室溫25°C攬拌化，再離屯、得到上清液，
[004引（3)將上清液pH調(diào)節(jié)至4.8得到蛋白質(zhì)沉淀，蛋白質(zhì)沉淀加