一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及多糖提取液的脫蛋白的技術領域，特別是涉及一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法。
【背景技術】
[0002]猴頭燕(Hericiumerinaceus)是珍貴的藥膳兼用菌?，F(xiàn)代研究表明猴頭燕含有多種活性成分，如多糖、萜類、酚類化合物等。其中，已經(jīng)證實猴頭菇中具有功能活性的主要成分為猴頭菇多糖。關于猴頭菇多糖的研究相對較多，研究表明其具有免疫調節(jié)、抗腫瘤、護胃等生理活性，而猴頭菇多糖制成的藥物和保健品也深受人們喜愛，開發(fā)前景廣闊。但是猴頭菇相關保健品多是猴頭菇提取液制成，而猴頭菇多糖的功能活性與其中純度有關，受其中的蛋白質等雜質影響。猴頭菇提取液是多糖、蛋白質、纖維素等組成的混合物，活性效果受到了影響，也不利于產品質量的提高。因此，提高猴頭菇制品的多糖濃度，降低其他成分的濃度，對提尚猴頭燕相關制品的活性效果具有重要的意義。猴頭燕制品的成分中，除多糖夕卜，含量較高的是蛋白質，因此，對猴頭菇提取液進行脫蛋白是提高多糖濃度的重要環(huán)節(jié)。
[0003]目前現(xiàn)有技術中常用的猴頭菇提取液脫蛋白方法是Sevage法，在真菌多糖提取液的脫蛋白方法中還有三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法、鹽酸法、氫氧化鈉法等。鹽酸法、氫氧化鈉法由于使用到酸堿，容易使多糖發(fā)生水解，部分糖苷鍵斷裂，影響多糖的結構及活性。Sevage法、三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法等由于都使用到有機溶劑，容易造成有機溶劑的殘留，且Sevage法中用到的氯仿、正丁醇，三氯乙酸法用到的三氯乙酸均為有毒化學試劑，不利于人體的健康，具有安全隱患，因此不適用于食品產品的開發(fā)。為了保持猴頭菇多糖的結構與活性，且減少有機試劑的使用及殘留，開發(fā)安全無毒、綠色環(huán)保且條件溫和的脫蛋白技術方法就具有重要的應用意義和實際價值。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術中的不足之處而提供一種安全無毒、綠色環(huán)保的猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法。
[0005]為達到上述目的，本發(fā)明通過以下技術方案來實現(xiàn)。
[0006]提供一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，它包括以下步驟:
步驟一，配制殼聚糖-醋酸溶液:將殼聚糖溶解于醋酸溶液中，攪拌均勻，即制得殼聚糖-醋酸溶液；
步驟二，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合:將猴頭菇多糖提取液與步驟一制得的殼聚糖-醋酸溶液混合均勻，得到第一混合物；
步驟三，第一次離心處理:將步驟二得到的第一混合物進行第一次離心處理，得到第一上清液，然后將第一上清液處于一定溫度下靜置一定時間；
步驟四，第二次離心處理:將步驟三中靜置后的第一上清液進行第二次離心處理，得到第二上清液，然后將第二上清液處于一定溫度下放置一定時間，即制得脫蛋白后的猴頭菇多糖提取液。
[0007]上述技術方案中，所述步驟一配制殼聚糖-醋酸溶液步驟中，所述醋酸溶液中醋酸的體積百分比濃度為0.5%?3%，所述殼聚糖-醋酸溶液中的殼聚糖的質量百分比濃度為1%?
3% ο
[0008]上述技術方案中，所述步驟二猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合步驟中，所述猴頭菇多糖提取液與所述殼聚糖-醋酸溶液的體積比為40?60:1。
[0009]上述技術方案中，所述步驟三第一次離心處理步驟中，將所述第一上清液處于2°C?6 °C下放置2h?3h。
[0010]上述技術方案中，所述步驟三第一次離心處理步驟中，所述第一次離心處理的離心速度為2500r/min?3500r/min，離心時間為1min?15min。
[0011]上述技術方案中，所述步驟四第二次離心處理步驟中，將第二上清液處于2°C>6°C下放置2h~3h。
[0012]上述技術方案中，所述步驟四第二次離心處理步驟中，所述第二次離心處理的離心速度為2500r/min?3500r/min，離心時間為1min?15min。
[0013]上述技術方案中，所述步驟二猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合步驟中，所述猴頭菇多糖提取液是以猴頭菇子實體粉末為原料，然后進行熱水浸提，并離心處理后得到的猴頭菇多糖提取液。
[0014]上述技術方案中，所述步驟二猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合步驟中，猴頭菇多糖提取液與步驟一制得的殼聚糖-醋酸溶液的混合是采用旋渦混合器進行混合均勻。
[0015]本發(fā)明的有益效果:
(I)本發(fā)明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，相對于現(xiàn)有技術中的Sevage法、三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法，不會造成有機溶劑的殘留，具有安全無毒、綠色環(huán)保的優(yōu)點，因此，該猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法適用于食品產品的開發(fā)。另外，該猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，相對于現(xiàn)有技術的鹽酸法、氫氧化鈉法，不會使多糖發(fā)生水解，能避免糖苷鍵斷裂，進而能夠保證多糖的結構及活性。
[0016](2)本發(fā)明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，是利用殼聚糖-醋酸溶液對猴頭菇多糖提取液進行脫蛋白，其中，殼聚糖-醋酸溶液與猴頭菇多糖提取液中的蛋白質的絡合原理是:殼聚糖-醋酸溶液中的殼聚糖用于吸附絡合蛋白質，殼聚糖與蛋白質結合過程包括靜電作用和疏水作用；殼聚糖的分子鏈上含有大量的游離氨基和羥基，這些游離氨基和羥基易于與蛋白質發(fā)生交聯(lián)反應;其中，殼聚糖的質子化主要指其分子中氨基的質子化，在醋酸存在的條件下，隨著氨基的質子化，殼聚糖能夠表現(xiàn)出陽離子型聚電解質的作用，因此能夠有效地吸附溶液中帶負電的蛋白質膠粒，進而達到脫蛋白的目的。
[0017](3)本發(fā)明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，所制得的脫蛋白后的猴頭菇多糖提取液，其蛋白質含量只為12.3?12.8%，具有蛋白質去除率高的優(yōu)點，其中，蛋白質去除率達到59.64%?60.58%，高于現(xiàn)有技術的Sevage法的蛋白質去除率(52%?53.8%)。
[0018](4)本發(fā)明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，具有多糖損失率低的優(yōu)點，其猴頭菇多糖的損失率為12%?16.5%，遠遠低于現(xiàn)有技術的Sevage法的多糖損失率(52%?55%)ο
[0019](5)本發(fā)明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，由于脫蛋白的試劑為殼聚糖-醋酸溶液，其使用量低，殘留量低，且殼聚糖具有降血脂、降血糖等生理活性，因此，該猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法具有安全無毒、綠色環(huán)保的優(yōu)點。
[0020](6)本發(fā)明提供的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，具有處理方法簡單，易操作，生產成本低，且能夠適用于大規(guī)模生產的特點，并能夠應用于相關食品保健產品的生產。
【具體實施方式】
[0021]為了使本發(fā)明所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0022]實施例1。
[0023]本實施例的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，它包括以下步驟:
步驟一，配制殼聚糖-醋酸溶液:將殼聚糖溶解于醋酸溶液中，攪拌均勻，即制得殼聚糖-醋酸溶液;本實施例中，醋酸溶液中醋酸的體積百分比濃度為1%，殼聚糖-醋酸溶液中的殼聚糖的質量百分比濃度為2.5%;
步驟二，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合:將猴頭菇多糖提取液與步驟一制得的殼聚糖-醋酸溶液采用旋渦混合器混合均勻，得到第一混合物;本實施例中，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的體積比為50:1;
其中，步驟二的猴頭菇多糖提取液是以猴頭菇子實體粉末為原料，然后進行熱水浸提，并離心處理后得到的猴頭菇多糖提取液；
步驟三，第一次離心處理:將步驟二得到的第一混合物進行第一次離心處理，得到第一上清液，然后將第一上清液處于4°C下靜置2.5h;本實施例中，第一次離心處理的離心速度為3000r/min，離心時間為13min;
步驟四，第二次離心處理:將步驟三中靜置后的第一上清液進行第二次離心處理，得到第二上清液，然后將第二上清液處于4°C下放置2.5h，即制得脫蛋白后的猴頭菇多糖提取液;本實施例中，第二次離心處理的離心速度為3000r/min，離心時間為13min。
[0024]本實施例的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，其所制得的脫蛋白后的猴頭菇多糖提取液的蛋白含量12.5%。另外，根據(jù)考馬斯亮藍法測定得到蛋白質的去除率達到60.01%，多糖損失率僅為16.40%，殼聚糖殘留率為0.21%。
[0025]實施例2。
[0026]本實施例的一種猴頭菇多糖提取液的脫蛋白方法，它包括以下步驟:
步驟一，配制殼聚糖-醋酸溶液:將殼聚糖溶解于醋酸溶液中，攪拌均勻，即制得殼聚糖-醋酸溶液;本實施例中，醋酸溶液中醋酸的體積百分比濃度為0.5%，殼聚糖-醋酸溶液中的殼聚糖的質量百分比濃度為1%;
步驟二，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的混合:將猴頭菇多糖提取液與步驟一制得的殼聚糖-醋酸溶液采用旋渦混合器混合均勻，得到第一混合物;本實施例中，猴頭菇多糖提取液與殼聚糖-醋酸溶液的體積比為40:1;
其中，步驟二的猴頭菇多糖提取液是以猴頭菇子實體粉末為原料，然后進行熱水浸提，并離心處理后得到的猴頭菇多糖提取液；
步驟三，第一次離心處理:將步驟二得到的第一混合物進行第一次離心處理，得到第一上清液，然后將第