分離自臭常山正丁醇提取物的化合物及其抗蟲(chóng)用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及植物病害防治技術(shù)，具體設(shè)及一種分離自臭常山正下醇提取物的化合 物及其抗蟲(chóng)用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 臭常山（Orixa japonica)為蕓香科臭常山屬植物，分布于河南、安徽、江蘇、浙江、 江西、湖北、湖南、貴州、四川、云南等地。在民間常用于治療風(fēng)熱感冒、追疾等。對(duì)于臭常山， 無(wú)論是醫(yī)學(xué)方面藥效藥理的研究，還是對(duì)其本身化學(xué)成分和生物活性的研究，都少有報(bào)道。
[0003] 南方根結(jié)線蟲(chóng)（Meloidogyne incognita)屬墊刃目（Tylenchida)，墊刃亞目 (Tylenchina)，異皮科（Heteroderidae)，根結(jié)亞科（Meloidogyninae)，根結(jié)線蟲(chóng)屬 (Meloidogyne)。南方根結(jié)線蟲(chóng)是一種高度?；偷碾s食性植物病原線蟲(chóng)，雌雄異體，主要 危害各種蔬菜的根部，表現(xiàn)為側(cè)根和須根較正常增多，并在幼根的須根上形成球形或圓錐 形大小不等的白色根瘤，有的呈念珠狀，被害株地上部分生長(zhǎng)矮小、緩慢、葉色異常，結(jié)果 少，產(chǎn)量低，甚至造成植株提早死亡。
[0004] 松材線蟲(chóng)（Bursaphelenchus xylophilus)屬滑刃目（Aphelenchida)，滑刃亞目 (Aphelenchina)，滑刃總科（Aphelenchoidoidea)，滑刃科（A地elenchoididae)，傘滑刃屬 (Bursaphelenchus)。松材線蟲(chóng)病又稱松枯萎病，是一種毀滅性蟲(chóng)害。它是通過(guò)松墨天牛 (Monochamus alterna化S)等媒介昆蟲(chóng)傳播于松樹(shù)體內(nèi)，從而引發(fā)松樹(shù)病害。被松材線蟲(chóng)感 染后的松樹(shù)，針葉黃褐色或紅褐色，萎黨下垂，樹(shù)脂分泌停止，樹(shù)干可觀察到天牛侵入孔或 產(chǎn)卵痕跡，病樹(shù)整株干枯死亡，最終腐爛。
[0005] 目前，對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)和松材線蟲(chóng)的防治主要采用化學(xué)防治的方法。常用殺根結(jié) 線蟲(chóng)劑多為有機(jī)憐或氨基甲酸醋類的單劑或復(fù)配制劑，如嚷挫憐、硫線憐、涕滅威、克百威 等。在松材線蟲(chóng)侵染前數(shù)星期，用豐索憐、乙伴憐、治線憐等內(nèi)吸性殺蟲(chóng)和殺線劑施于松樹(shù) 根部±壤中，或用豐索憐注射樹(shù)干，預(yù)防松材線蟲(chóng)侵入和繁殖。采用內(nèi)吸性殺線劑注射樹(shù) 干，能有效地預(yù)防松材線蟲(chóng)的侵入?；瘜W(xué)防治在南方根結(jié)線蟲(chóng)和松材線蟲(chóng)的防治過(guò)程中占 有重要地位，見(jiàn)效快、防效好，深受青睞。但目前使用的化學(xué)殺線劑存在毒性大、環(huán)境污染嚴(yán) 重、易產(chǎn)生抗藥性等諸多問(wèn)題。因此，隨著農(nóng)民環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)和線蟲(chóng)抗藥性的增加，化學(xué) 殺線蟲(chóng)劑的應(yīng)用前景黯淡。
[0006] 因此，需要開(kāi)發(fā)一種毒性小、不易使線蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性的環(huán)保型藥物，提高蔬菜的產(chǎn) 量和品質(zhì)，保護(hù)我國(guó)森林資源安全和造林綠化成果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為滿足上述領(lǐng)域的需求，本發(fā)明提供一種從臭常山根的正下醇提取物中分離的新 化合物，該化合物能夠有效殺滅南方根結(jié)線蟲(chóng)和松材線蟲(chóng)。本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù)方案如 下：
[000引如式（I)所示的化合物：
[0009]
[0010] 式(I)所示化合物與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成的鹽。
[0011] 式(I)所示化合物或權(quán)利要求2所述的鹽在防治線蟲(chóng)中的用途。
[0012] 式(I)所示化合物或權(quán)利要求2所述的鹽在制備抗蟲(chóng)制品中的用途。
[0013] -種抗蟲(chóng)制品，其特征在于，其抗蟲(chóng)活性成份包含權(quán)利要求1所述的化合物或權(quán)利 要求2所述的鹽。
[0014] 式（I)所示化合物的制備方法，其特征在于，包括W下步驟臭常山根為原料進(jìn) 行分離提純獲得式(I)所示的化合物或其鹽。
[0015] 優(yōu)選地，所述分離提純包括采用乙醇浸提、正下醇萃取、大孔樹(shù)脂分離和硅膠柱層 析。
[0016] 優(yōu)選地，所述乙醇浸提:將干燥的臭常山根依次用95%乙醇、75 %乙醇、50%乙醇 和蒸饋水分別浸泡3天；
[0017] 所述正下醇萃取:所得乙醇浸提液在50°C蒸發(fā)濃縮后，室溫下經(jīng)過(guò)正下醇萃取將 水相棄去，留正下醇相在60-70°C水浴鍋中進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，然后除去正下醇得正下醇萃 取物；
[001引所述大孔樹(shù)脂分離：先用5%氨氧化鋼浸泡大孔樹(shù)脂4-化，然后用蒸饋水洗至中 性，再用5%鹽酸浸泡4-化，然后用蒸饋水洗至中性;將預(yù)處理后的大孔樹(shù)脂裝入玻璃色譜 柱，然后將臭常山根的正下醇萃取物用蒸饋水溶解后，加入玻璃色譜柱中；最后用蒸饋水- 無(wú)水乙醇按極性從大到小進(jìn)行梯度洗脫，采用等饋分收集法收集得到粗分離物；
[0019] 所述硅膠柱層析:用丙酬溶解粗分離物，加30-50g硅膠攬拌均勻，用電吹風(fēng)將拌過(guò) 樣品的硅膠吹干后加入硅膠柱中，W石油酸:乙酸乙醋為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，按等饋分 收集法收集活性成分。
[0020] 臭常山根在防治線蟲(chóng)中的用途。
[0021] -種抗蟲(chóng)制品，其特征在于，其藥效成分為臭常山根的正下醇提取物。
[0022] 本發(fā)明提供一種新化合物，其結(jié)構(gòu)如圖1所示，所述新化合物是采用乙醇浸提、正 下醇萃取、大孔樹(shù)脂分離和硅膠柱層析法從臭常山根部分離而得。經(jīng)鑒定，該化合物是一種 生物堿，為無(wú)色結(jié)晶，艦化祕(mì)鐘反應(yīng)顯陽(yáng)性，分子式為Cl姐17N03，分子量為295.34，其化學(xué)命 (2)-3-( 4-hydroxybenzy 1 idene)-4-(4-hydroxypheny 1)-1-methyl pyrrol idin-2- one。將所述化合物分別對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)和松材線蟲(chóng)幼蟲(chóng)進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，結(jié)果 表明該化合物具有殺線蟲(chóng)活性。與殺線蟲(chóng)化合物2%阿維菌素相比，新化合物對(duì)南方根結(jié)線 蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)和松材線蟲(chóng)幼蟲(chóng)的LDso分別是陽(yáng)性對(duì)照2 %阿維菌素的107倍和59倍，有望成為 新一代生物農(nóng)藥。
[0023] 本發(fā)明分離獲得的新化合物，可使用二甲苯、甲苯、CIO芳控、乙醇、乙臘等作為溶 劑，加入吐溫、甘油等作為助溶劑，制成抗蟲(chóng)制品，用于殺滅線蟲(chóng)。由于本發(fā)明分離獲得的新 化合物是從臭常山根部提取而得，在自然條件下易分解，因此不會(huì)引起生物富集現(xiàn)象，并且 對(duì)人畜安全，可W作為天然農(nóng)藥長(zhǎng)期使用而不會(huì)產(chǎn)生環(huán)境污染的問(wèn)題。在本發(fā)明的一些實(shí) 施例中，所述抗蟲(chóng)制品也可W包含化學(xué)上相容的其它的本領(lǐng)域已知的具有抗蟲(chóng)活性的化合 物，從而增強(qiáng)抗蟲(chóng)效果。
[0024] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，將本發(fā)明的新化合物與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成生理上可 接受的鹽，使化合物結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，有利于保存和制備抗蟲(chóng)制品，發(fā)揮抗蟲(chóng)活性。
[0025] 實(shí)驗(yàn)證明，臭常山根的正下醇提取物也具有殺線蟲(chóng)活性，可將其粗提物直接用于 殺滅線蟲(chóng)，或與適合的溶劑及輔助試劑一起制成抗蟲(chóng)制品。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，可W 將臭常山根的正下醇提取物與本領(lǐng)域公知的具有殺蟲(chóng)活性的其它化合物同時(shí)使用，發(fā)揮綜 合的抗蟲(chóng)作用。
【附圖說(shuō)明】
[0026] 圖1.式(I)化合物的結(jié)構(gòu)式；
[0027] 圖2.式(I)化合物的iH-NMR譜圖；
[002引圖3.式（I)化合物的"C-NIR譜圖；
[0029] 圖4.式(I)化合物的HMBC譜圖；
[0030] 圖5.式（I)化合物的服QC譜圖；
[0031] 圖6.式(I)化合物的HRMS譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，需要理解的是，下述實(shí)施方式僅作 為解釋說(shuō)明，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的任何限制。
[0033] 生物材料：
[0034] 臭常山：采自貴州省安順市西秀區(qū)。
[0035] 南方根結(jié)線蟲(chóng):為中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)系人工飼養(yǎng)。
[0036] 松材線蟲(chóng):為中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)系人工飼養(yǎng)。
[0037] 實(shí)驗(yàn)儀器：
[0038] Br址er ACF300和AMX500超導(dǎo)核磁共振儀，瑞:t化址er公司；
[0039] 玻璃色譜柱：直徑與長(zhǎng)度85X 550mm、40X400mm、35X400mm、30X400mm、25X 400mm、20 X 350mm，購(gòu)于北京博美玻璃有限公司。
[0040] 材料與試劑：
[0041] 層析硅膠(200-300目）采自青島海洋研究所；
[0042] 薄層層析硅膠板(GF254)購(gòu)于青島海洋化工有限公司；
[0043] 石油酸、乙酸乙醋、乙醇、丙酬等均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；
[0044] 95%酒精采購(gòu)自北京廣達(dá)恒益有限公司。
[0045] 本實(shí)施例未特別說(shuō)明的生物化學(xué)試劑均為本領(lǐng)域常規(guī)試劑，可通過(guò)本領(lǐng)域常規(guī)方 法配制而得，或商購(gòu)獲得，規(guī)格為實(shí)驗(yàn)室純級(jí)即可。
[0046] 實(shí)施例1、式(I)化合物的分離
[0047] 1、臭常山根的正下醇萃取物的制備
[004引將干燥的臭常山根剪碎后，依次用95%乙醇、75%乙醇、50%乙醇和蒸饋水分別浸 泡3天，在50°C水浴鍋中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后，得到的乙醇浸提物先在室溫下用正己燒萃取， 分層后，取水相，在室溫下用Ξ氯甲燒萃取，分層后取水相，在室溫下用乙酸乙醋萃取分層， 取水相（由于目標(biāo)產(chǎn)物存在于極性較大的正下醇相中，將酒精浸提物先依次用極性小于正 下醇的正己燒、Ξ氯甲燒、乙酸乙醋萃取后，除去極性較小的非目標(biāo)化合物，得到的水相再 用正下醇萃取，可W提高提取分離效率），室溫經(jīng)過(guò)正下醇萃取，將水相棄去，留正下醇相在 60-70°C水浴鍋中進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，然后除去正下醇，得到正下醇萃取物，即本發(fā)明中的 臭常山根正下醇萃取物。
[0049] 2、提取物的大孔樹(shù)脂粗分離
[0050] (1)大孔樹(shù)脂預(yù)處理
[0051] 取lOOOg新購(gòu)入的AB-8型大孔樹(shù)脂（鄭州艾諾化工科技有限公司），先用2-化5% 氨氧化鋼溶液浸泡4-化，除去漂浮在上層的顆粒，用蒸饋水洗至中性，再用2-化5%鹽酸溶 液浸泡4-化，除去漂浮在上層的顆粒，用蒸饋水洗至中性備用。
[0052] (2)裝柱
[0053] 將玻璃色譜柱(85 X 550mm)垂直固定在鐵架臺(tái)上，在玻璃色譜柱底部塞一小塊脫 脂棉，W防樹(shù)脂流失。將預(yù)處理后的大孔樹(shù)脂在蒸饋水中搖勻，緩慢倒入玻璃色譜柱中，沉 淀后，打開(kāi)色譜柱下面的閥口，待蒸饋水流干后，關(guān)掉閥口。
[0054] (3)加樣
[0055] 將臭常山根的正下醇萃取物(30g)用蒸饋水溶解稀釋后，沿玻璃色譜柱壁緩慢倒 入色譜柱中，下端閥口打開(kāi)，用Ξ角瓶接收，將接收到的液體從上端倒回色譜柱中，使更多 的樣品吸附在大孔樹(shù)脂上。待接收到的液體接近淡黃色至無(wú)色時(shí)，表示上樣完畢，將柱內(nèi)的 液體放干，棄去。
[0056] (4)洗脫
[0057] 洗脫劑采用蒸饋水-無(wú)水乙醇，按極性