一種紙基核酸擴(kuò)增與檢測(cè)一體化的檢測(cè)裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型屬于生物試紙檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種紙基核酸擴(kuò)增與檢測(cè)一體 化的檢測(cè)裝置及檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 核酸擴(kuò)增是分子生物學(xué)的研究基礎(chǔ)，是基因診斷技術(shù)中一種最常用的方 法。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，許多種類的核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)已被開(kāi)發(fā)，如環(huán)介導(dǎo)等溫 擴(kuò)增（loop mediated isothermal amplification，LAMP)、重組酶聚合酶擴(kuò)增技 術(shù)（Recombinase Polymerase Amplification，RPA)、依賴核酸序列擴(kuò)增（nucleic acid sequence-based amplification， NASBA)、鏈置換技術(shù)(strand displacement amplification, SDA)及解鏈酶擴(kuò)增（helicase dependent amplification, HDA)等。核酸 擴(kuò)增技術(shù)被認(rèn)為是可替代目前最常規(guī)的合酶鏈反應(yīng)（PCR)的前沿技術(shù)。常規(guī)PCR必須經(jīng)過(guò) 變性、退火、延伸三個(gè)步驟，使得現(xiàn)有的PCR儀設(shè)備昂貴，且檢測(cè)耗時(shí)耗力。相比而言，等溫 核酸擴(kuò)增在特定的溫度下即可實(shí)現(xiàn)，無(wú)需PCR要求的精密溫度循環(huán)裝置，因此可實(shí)現(xiàn)便攜 式的快速檢測(cè)。
[0003] LAMP技術(shù)具有反應(yīng)時(shí)間短、特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，敏感性高于常規(guī)PCR方法 的10倍，同時(shí)保持了 PCR技術(shù)的高特異性檢測(cè)，因此LAMP技術(shù)綜合表現(xiàn)是優(yōu)于目前常規(guī) PCR技術(shù)的。然而，LAMP -般都需使用外接電源或大功率加熱器加熱。隨著微流體技術(shù)的 發(fā)展，低成本、小型化、便捷化的試紙檢測(cè)法日漸受人們的重視。紙張資源豐富、可再生、生 物相容性好，具有天然的微孔結(jié)構(gòu)，可通過(guò)毛細(xì)力自動(dòng)栗送液體，易于實(shí)現(xiàn)試劑混勻、流速 控制、及檢測(cè)時(shí)間控制，因此適合作為簡(jiǎn)單、廉價(jià)的LAMP平臺(tái)。目前的紙基核酸擴(kuò)增研究， 包括使用紙實(shí)現(xiàn)RPA及HDA，但是紙基擴(kuò)增與試紙檢測(cè)分步進(jìn)行，沒(méi)有實(shí)現(xiàn)兩者的一體化集 成，使得核酸擴(kuò)增和檢測(cè)的操作步驟復(fù)雜，無(wú)法進(jìn)行高效、快速的檢測(cè)。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0004] 為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本實(shí)用新型的目的在于提供一種紙基核酸擴(kuò) 增與檢測(cè)一體化的檢測(cè)裝置，該檢測(cè)裝置設(shè)計(jì)合理，溫度可控，操作簡(jiǎn)單。
[0005] 本實(shí)用新型是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：
[0006] -種紙基核酸擴(kuò)增與檢測(cè)一體化的檢測(cè)裝置，包括內(nèi)部設(shè)有加熱控溫設(shè)備的箱 體，在箱體頂部開(kāi)設(shè)腔體，腔體內(nèi)設(shè)有加熱腔和檢測(cè)腔，加熱腔的深度大于檢測(cè)腔；在檢測(cè) 腔上方設(shè)有透明的蓋板。
[0007] 在箱體頂部設(shè)有手提，在箱體的側(cè)面上設(shè)有溫度調(diào)節(jié)觸控顯示屏。
[0008] 所述加熱腔內(nèi)的控溫范圍為環(huán)溫+5°C~100°C，控溫精度達(dá)± 0.1 °C。
[0009] 所述箱體的體積為20cmX 14cmX 13cm。
[0010] 加熱腔為長(zhǎng)方體，體積為5_X 10_X 25mm ;檢測(cè)腔為圓柱體，直徑為5mm，深度為 10mnin
[0011] 加熱腔由鋁合金制成，加熱腔外部包覆隔熱材料。
[0012] 箱體內(nèi)置有能夠?yàn)榧訜峥販卦O(shè)備供電的可充電鋰離子電池。
[0013] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型具有以下有益的技術(shù)效果：
[0014] 本實(shí)用新型公開(kāi)的紙基核酸擴(kuò)增與檢測(cè)一體化的檢測(cè)裝置，包括內(nèi)部設(shè)有加熱控 溫設(shè)備的箱體，箱體頂部開(kāi)設(shè)測(cè)試腔，測(cè)試腔包括一個(gè)加熱腔和一個(gè)常溫的檢測(cè)腔。試紙條 放置在加熱腔內(nèi)進(jìn)行核酸擴(kuò)增，待擴(kuò)增完成后轉(zhuǎn)移到檢測(cè)腔內(nèi)進(jìn)行核酸檢測(cè)。本裝置可以 根據(jù)不同的擴(kuò)增溫度進(jìn)行溫度的調(diào)節(jié)和控制，操作簡(jiǎn)單，使用方便。
[0015] 利用實(shí)用新型公開(kāi)裝置進(jìn)行檢測(cè)，先用膠紙將測(cè)試紙上的擴(kuò)展區(qū)遮蓋，使測(cè)試紙 的擴(kuò)展區(qū)和檢測(cè)區(qū)隔開(kāi)，以提防液體蒸發(fā)，然后將測(cè)試紙放置在加熱腔內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增，待擴(kuò)增 完成后，通過(guò)單面粘膠讓測(cè)試紙兩個(gè)區(qū)域結(jié)合，并滴加緩沖液后在檢測(cè)腔中進(jìn)行檢測(cè)。該檢 測(cè)裝置能夠?qū)θ我饽繕?biāo)核酸進(jìn)行任何一種擴(kuò)增及檢測(cè)一體化操作，尤其是在紙基上實(shí)現(xiàn)核 酸擴(kuò)增（LAMP)及其檢測(cè)一體化集成，紙基LAMP核酸擴(kuò)增適宜的溫度范圍為63°C，過(guò)程僅需 15分鐘。總擴(kuò)增及檢測(cè)時(shí)間不超過(guò)30分鐘。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1為本實(shí)用新型檢測(cè)裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0017] 圖2為本實(shí)用新型檢測(cè)裝置的結(jié)構(gòu)俯視圖；
[0018] 圖3為本實(shí)用新型的試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0019] 其中，1為箱體；2為腔體；3為加熱腔；4為檢測(cè)腔；5為手提；6為溫度調(diào)節(jié)觸控顯 示屏；7為擴(kuò)增區(qū)；8為結(jié)合墊；9為層析膜；10為吸收墊；11為支持墊；12為膠紙；13為檢 測(cè)區(qū)；14為對(duì)照區(qū)。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，所述是對(duì)本實(shí)用新型 的解釋而不是限定。
[0021] 參見(jiàn)圖1和2,本實(shí)用新型公開(kāi)的一種紙基核酸擴(kuò)增與檢測(cè)一體化的檢測(cè)裝置，該 裝置為便攜一體式結(jié)構(gòu)，包括內(nèi)部設(shè)有加熱控溫設(shè)備的箱體1，在箱體1頂部開(kāi)設(shè)腔體2,腔 體2內(nèi)設(shè)有加熱腔3和檢測(cè)腔4,加熱腔3的深度大于檢測(cè)腔4 ;在檢測(cè)腔4上方設(shè)有透明 的蓋板。在箱體1頂部設(shè)有手提5,在箱體1的側(cè)面上設(shè)有溫度調(diào)節(jié)觸控顯示屏6,能夠?qū)?現(xiàn)實(shí)測(cè)溫度與設(shè)定溫度的雙數(shù)碼顯示。
[0022] 優(yōu)選地，檢測(cè)裝置體積不超過(guò)20cmX 14cmX 13cm。腔體2內(nèi)的加熱腔3是個(gè)長(zhǎng)方 體，體積不超過(guò)5_X 10_X 25_。檢測(cè)腔4是個(gè)圓柱體或其它截面形狀，直徑不超5_，深 度不超過(guò)1〇_，檢測(cè)腔體不加熱，為常溫環(huán)境。檢測(cè)腔3是由耐腐蝕的聚甲醛構(gòu)成，其頂部 設(shè)有塑料上蓋。
[0023] 加熱腔3由導(dǎo)熱性能良好耐腐蝕的金屬材料構(gòu)成，如鋁合金等。其底面由電加熱 膜加熱，外部有隔熱材料保溫，以減小腔體內(nèi)的溫度波動(dòng)。加熱腔3的內(nèi)控溫范圍為環(huán)溫 +5°C~100°C，控溫精度可達(dá)最高±0. 1°C。
[0024] 紙基LAMP核酸擴(kuò)增適宜的溫度范圍為63°C