濾后得到的核酸在擴(kuò)增室進(jìn)行擴(kuò)增及標(biāo)記，最后，經(jīng)過(guò)標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物與受體特異性配體結(jié)合反應(yīng)，在試紙條上顯色。
[0025]本發(fā)明采取的擴(kuò)增方式是恒溫?cái)U(kuò)增方式，具有快速、高效、特異等優(yōu)點(diǎn)且無(wú)需專用設(shè)備。
[0026]本發(fā)明采用的檢測(cè)方式為核酸試紙條檢測(cè)，它是對(duì)已十分成熟的免疫層析顯色法技術(shù)加以改進(jìn)，應(yīng)用包被上特異性的核酸或蛋白質(zhì)的納米級(jí)膠體金顆粒(或其它有色顆粒)和特別標(biāo)記的核酸引物及探針，使擴(kuò)增后的檢測(cè)產(chǎn)物和膠體金顆粒結(jié)合，在試紙條的檢測(cè)線(T線)上顯色來(lái)檢測(cè)DNA擴(kuò)增產(chǎn)物;如果無(wú)目標(biāo)DNA，特異性探針則將無(wú)法把擴(kuò)增產(chǎn)物與標(biāo)記物連接，結(jié)果無(wú)顯色，即讀為陰性。密封結(jié)構(gòu)使得靶核酸無(wú)泄漏的可能。
[0027]本發(fā)明設(shè)計(jì)一種綜合提取，特異的靶核酸擴(kuò)增及檢測(cè)的便攜式裝置。本發(fā)明根據(jù)從樣本中提取核酸，擴(kuò)增特異性靶序列產(chǎn)生雙重標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物，最后通過(guò)配體-受體結(jié)合，通過(guò)膠體金在試紙條上顯色的原理而實(shí)施，本發(fā)明依賴于核酸雜交。
[0028]本發(fā)明的方法適用于確定所有的靶核酸序列。本發(fā)明完成提取擴(kuò)增并判讀結(jié)果，檢測(cè)后不打開(kāi)密封的裝置，可將其全部廢棄于安全處，大大降低了污染的可能，且能迅速而可靠的確定特異性擴(kuò)增靶核酸的存在與否。
[0029]本發(fā)明運(yùn)用氣壓法代替了離心機(jī)等大型儀器，用多重功能性濾膜過(guò)濾掉了除核酸以外的所有物質(zhì)，整個(gè)裝置成本很低，使用非常方便且不需要笨重的輔助設(shè)備。
[0030]本發(fā)明在加熱反應(yīng)時(shí)只需要一個(gè)環(huán)形的小巧的加熱環(huán)，使用方便。
[0031]本發(fā)明可使靶核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)在完全密閉狀態(tài)下完成，大大降低了傳統(tǒng)擴(kuò)增后核酸檢測(cè)法中因?yàn)殡娪緳z測(cè)而開(kāi)蓋造成的污染。此方法操作簡(jiǎn)單，快速，檢測(cè)成本低，可靠性高，對(duì)在生物學(xué)領(lǐng)域工作的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，有著很大的幫助。
[0032]由于核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的廣泛使用，所以本發(fā)明的這項(xiàng)裝置可以應(yīng)用于所有需要使用核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)法來(lái)檢測(cè)的領(lǐng)域。如臨床傳染病病原體檢測(cè)、食品致病菌檢測(cè)以及農(nóng)業(yè)工業(yè)海關(guān)牧業(yè)等領(lǐng)域在基因水平上的種類鑒定和基因突變檢測(cè)等方面的應(yīng)用。
[0033]綜上所述，本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)有:
[0034]本發(fā)明集提取、擴(kuò)增和檢測(cè)一體化，步驟簡(jiǎn)單且能直接觀察結(jié)果；
[0035]本發(fā)明提供的核酸檢測(cè)裝置既方便快捷又經(jīng)濟(jì)，操作的簡(jiǎn)便性使得實(shí)驗(yàn)易于進(jìn)行，且對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的要求也大大降低；
[0036]本發(fā)明采取的擴(kuò)增方式是恒溫?cái)U(kuò)增方式，具有快速、高效、特異等優(yōu)點(diǎn)且無(wú)需專用設(shè)備；
[0037]本發(fā)明為密閉性良好的一次性用品，消除了污染的可能性；
[0038]本發(fā)明為便攜式裝置，可以應(yīng)用于所有需要使用核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)法來(lái)檢測(cè)的領(lǐng)域。
[0039]相較于一般的實(shí)驗(yàn)室操作，使用本發(fā)明的裝置對(duì)樣品進(jìn)行核酸提取、擴(kuò)增、檢測(cè)可降低對(duì)操作者的生物危害。
【附圖說(shuō)明】
[0040]圖1是本發(fā)明裝置的整體結(jié)構(gòu)；
[0041]圖2為推桿的平面示意圖；
[0042]圖3是試紙條的平面圖；
[0043]圖4是操作流程圖；
[0044]圖5是加熱環(huán)的俯視圖。
[0045]附圖標(biāo)記:
[0046]圓筒(1)
[0047]螺旋蓋(2)
[0048]螺旋蓋外表面(3)
[0049]螺旋蓋內(nèi)表面(4)
[0050]孔眼(5)
[0051 ]推桿(6)
[0052]橡膠圈(7)
[0053]刀片(8)
[0054]刀鞘(9)
[0055]固定環(huán)(10)
[0056]固定環(huán)(11)
[0057]隔層(12)
[0058]核酸提取試劑(13)
[0059]過(guò)濾系統(tǒng)(14)
[0060]擴(kuò)增室(15)
[0061]彈性物質(zhì)(16)
[0062]樣本墊(17)
[0063]有色顆粒結(jié)合墊(18)
[0064]纖維膜(19)
[0065]吸水濾紙墊(20)
[0066]檢測(cè)線(21)
[0067]質(zhì)控線(22)
[0068]刀片(23)
[0069]吸水紙(24)
[0070]圓筒(25)
[0071]加熱環(huán)(26)
[0072]電池(27)
[0073]【具體實(shí)施方式】:
[0074]以下結(jié)合附圖進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但并非限制本發(fā)明。
[0075]本發(fā)明提供了一種檢測(cè)樣本中存在的靶核酸序列的方法及裝置。樣本可包括衍生自農(nóng)業(yè)、細(xì)菌和病毒來(lái)源和人或其他動(dòng)物來(lái)源的生物學(xué)樣品，及其其他樣品如廢水、飲用水，農(nóng)產(chǎn)品，加工的糧食產(chǎn)品，空氣等。本發(fā)明還可用于檢測(cè)表明遺傳缺陷或傳染性疾病的核酸序列。
[0076]本發(fā)明涉及在便攜式裝置的一個(gè)圓筒(1)內(nèi)提取及擴(kuò)增核酸，隨后在另一個(gè)圓筒(25)內(nèi)檢測(cè)。這些反應(yīng)腔在功能上是獨(dú)立的，相繼的且緊湊的。所有這些均在一種簡(jiǎn)單的易于操作的便攜式裝置內(nèi)發(fā)生。
[0077]如圖1所示，一種集提取、擴(kuò)增和檢測(cè)一體化的基因檢測(cè)裝置由一個(gè)中空長(zhǎng)圓筒
(1)和一個(gè)中空長(zhǎng)圓筒(25)組成，圓筒(1)密封且頂端具有一個(gè)有孔眼(5)的螺旋蓋(2)，螺旋蓋(2)包含其外表面(3)和內(nèi)表面(4)，加樣時(shí)需擰開(kāi)螺旋蓋(2)。圓形推桿(6)通過(guò)孔眼
(5)穿過(guò)螺旋蓋(2)，推桿(6)上有兩個(gè)固定環(huán)(10)和(11)。推桿(6)下端包被有一圈厚厚的橡膠圈(7)及一塊鋒利的刀片(8)，刀片(8)外包裹有刀鞘(9)，所述橡膠圈(7)的外徑與圓筒
(1)的內(nèi)徑相同。圓筒(25)通過(guò)可壓縮的彈性物質(zhì)(16)與圓筒(1)密封相連且可相對(duì)上下壓縮。圓筒(25)的特征在于其筒身為全透明的，以便于觀察試紙條結(jié)果。圓筒(25)內(nèi)部設(shè)有試紙條，所述試紙條分別由樣本墊(17)、有色顆粒結(jié)合墊(18)、纖維膜(19)和吸水濾紙墊(20)組成，各部分在相鄰處部分重疊，纖維膜(19)上還設(shè)有檢測(cè)線(21)和質(zhì)控線(22);圓筒(1)的內(nèi)部空間通過(guò)隔層(12)、過(guò)濾系統(tǒng)(14)分為三個(gè)腔室，過(guò)濾系統(tǒng)(14)以下為擴(kuò)增室(15)。此裝置的特征在于，其組成材料不會(huì)促進(jìn)核酸和蛋白質(zhì)結(jié)合以致影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。而作為進(jìn)一步的優(yōu)選方案，此裝置選用既耐熱耐冷又重量輕的，堅(jiān)硬且結(jié)實(shí)的材料。
[0078]樣本加入該裝置后，提取和擴(kuò)增在圓筒(1)中進(jìn)行，檢測(cè)在圓筒(25)中進(jìn)行。
[0079]圖2為推桿(6)的平面圖，推桿(6)的材料優(yōu)選為耐熱性好，堅(jiān)固的材料。推桿(6 )頂端的直徑大于孔眼(5)，推桿(6)桿體及底端的直徑小于孔眼(5)，使其能在孔眼(5)中上下滑動(dòng)，桿體上刻有一個(gè)刻度A，并在此處有一固定環(huán)(11)。推桿(6)底端包被有一層厚厚的橡膠圈(7)及一塊鋒利的刀片(8)，刀片(8)外包裹有刀鞘(9)，推桿(6)底端包裹的橡膠圈(7)的外徑與圓筒(1)的內(nèi)徑相同；推桿(6 )在螺旋蓋(2 )的上端有一固定環(huán)(10)，使其在未使用前固定在螺旋蓋(2)上，不能上下活動(dòng)，使用時(shí)可用剪刀等工具去掉固定環(huán)。優(yōu)選的固定環(huán)的材料是能被剪刀或刀輕易去掉的。
[0080]圖3是試紙條的平面圖，試紙條從左到右按順序有樣本墊(17)、有色顆粒結(jié)合墊
(18)、纖維膜(19)和吸水濾紙墊(20)，上述各部分在相鄰處全部重疊，纖維膜(19)上還設(shè)有檢測(cè)線(21)和質(zhì)控線(22)。
[0081]圖4示出了裝置的流程圖，樣本加入位于圓筒(1)的第一個(gè)隔層(12)后，扭緊螺旋蓋(2)，用加熱環(huán)(26)溫育一段時(shí)間后，去除螺旋蓋上端的固定環(huán)(10)，緩緩?fù)苿?dòng)推桿(6)至刻度A，即有第二個(gè)固定環(huán)(11)的位置，刺破隔層(12)，待液體全部流入過(guò)濾系統(tǒng)(14)后