本發(fā)明屬于色素提取，具體涉及一種高純度的梔子黃色素的制備方法。

背景技術(shù)：

1、梔子是一種藥食同源植物資源，可分為兩種，水梔子用于色素的提取，而山梔子作藥用梔子，同時(shí)，梔子也被廣泛用作食品著色和制作粥茶的健康食品。且梔子的各種化學(xué)成分具有降低血糖水平、降低血脂、保護(hù)肝膽、促進(jìn)胰腺分泌的能力。

2、梔子黃色素是一種水溶性天然色素，主要從梔子果實(shí)中提取，梔子黃色素的外觀顏色為橙黃色，能夠在水、乙醇、丙二醇中溶解，目前已被廣泛使用，梔子黃色素的提取手段主要采用溶劑直接提取活性物質(zhì)；但是采用現(xiàn)有手段萃取純度無(wú)法保證，萃取時(shí)間較長(zhǎng)。

3、中國(guó)專利cn102898864b公開(kāi)了一種采用溶劑結(jié)晶精制梔子黃色素的方法，包括如下步驟：在梔子黃色素粗品中加入溶劑a，在10-30℃條件下攪拌使梔子黃色素粗品溶解或加熱至35-100℃使梔子黃色素粗品溶解，過(guò)濾取濾液；所述溶劑a的組成為：親水性有機(jī)溶劑70-100％，水0-30％；將濾液結(jié)晶，干燥即得梔子黃。但是現(xiàn)有方法采用溶劑結(jié)晶精制耗時(shí)較長(zhǎng)、得率低，同時(shí)無(wú)法對(duì)梔子多糖等雜質(zhì)進(jìn)行分離，而梔子黃色素粗品中的梔子多糖會(huì)影響梔子黃色素的色澤、品質(zhì)和活性，導(dǎo)致梔子黃色素純度降低，針對(duì)上述問(wèn)題，我們提出了一種高純度的梔子黃色素的制備方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種高純度的梔子黃色素的制備方法，解決了現(xiàn)有方法采用溶劑結(jié)晶精制耗時(shí)較長(zhǎng)、得率低，同時(shí)無(wú)法對(duì)梔子多糖等雜質(zhì)進(jìn)行分離，導(dǎo)致梔子黃色素純度降低的問(wèn)題。

2、本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種高純度的梔子黃色素的制備方法，所述高純度的梔子黃色素的制備方法，具體包括：

3、取梔子果實(shí)，采用超純水清洗梔子果實(shí)3-5遍，將梔子果實(shí)置于鼓風(fēng)干燥箱中40℃干燥45h，在b型-萬(wàn)能粉碎機(jī)中粉碎成100目的梔子干粉，梔子干粉脫脂除雜處理，備用；

4、預(yù)配制黃色素夾帶劑，基于超臨界流體萃取法結(jié)合預(yù)配制的黃色素夾帶劑粗萃梔子干粉，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去黃色素夾帶劑，向黃色素粗提液中補(bǔ)入等體積的超純水，得到黃色素粗提液；

5、制備黃色素吸附樹(shù)脂，取制備好的黃色素吸附樹(shù)脂，黃色素吸附樹(shù)脂濕法裝柱，取黃色素粗提液上柱吸附，用45％乙醇溶液洗脫，分離黃色素溶液和雜質(zhì)溶液。

6、取雜質(zhì)溶液，配制純化萃取劑，純化萃取劑與雜質(zhì)溶液的體積比為10:3，將純化萃取劑與雜質(zhì)溶液混合，對(duì)雜質(zhì)溶液中綠原酸萃取純化，萃取時(shí)間為3-10min，然后采用反萃劑進(jìn)行2-10級(jí)逆流反萃，得到分離綠原酸的梔子苷溶液。

7、優(yōu)選地，所述梔子干粉脫脂除雜處理的方法，具體包括：

8、取梔子干粉，將梔子干粉與10倍體積的石油醚、正己烷1:1混合溶液在蒸發(fā)皿中混懸，將蒸發(fā)皿放置于恒溫水浴鍋中水浴3h，恒溫水浴鍋的溫度保持65-70℃，間隔15min手動(dòng)攪拌一次，每間隔30min更換等體積的石油醚、正己烷；

9、對(duì)蒸發(fā)皿混懸液中的梔子干粉采用目篩過(guò)濾，棄去混懸液中的上清液，保留混懸殘?jiān)?/p>

10、取混懸殘?jiān)糜?5℃的鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)10min，然后鼓風(fēng)干燥箱溫度降至40℃，烘干2h，得到預(yù)脫脂干粉。

11、取預(yù)脫脂干粉，采用預(yù)冷液氮研磨預(yù)脫脂干粉，然后研磨后的干粉置于反應(yīng)器中，向反應(yīng)器中滴加10倍體積的十二烷基硫酸鈉，混勻后加入3倍體積的苯酚，靜置10h后，對(duì)反應(yīng)器中混合液混合抽提，棄去有機(jī)相和上清液，取干粉沉淀物，干粉沉淀物置于60℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥20min。

12、將干粉沉淀物置于反應(yīng)管內(nèi)，然后加入12倍干粉沉淀物質(zhì)量的95％乙醇浸泡，浸泡時(shí)間為48h，浸泡完畢后，將干粉沉淀物置于60℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥50min，得到脫脂除雜后的梔子干粉。

13、優(yōu)選地，所述黃色素夾帶劑包括一下按照重量百分比的原料：

14、乙醇：65％；

15、丙酮：10％；

16、乙醚：15％；

17、乙酸乙酯：10％；

18、其中，所述預(yù)配制黃色素夾帶劑的方法，具體包括：

19、取乙酸乙酯，在氬氣保護(hù)環(huán)境下向乙酸乙酯中加入丙酮，得到夾帶劑第一組分；

20、在30℃環(huán)境下向夾帶劑第一組分鐘逐滴滴加丙酮，滴加完畢后，攪拌混合2min，靜置10min，得到夾帶劑第二組分；

21、取夾帶劑第二組分，在惰性氣體保護(hù)下向夾帶劑第二組分中加入乙醚，10-20r/min攪拌5min，得到黃色素夾帶劑，將黃色素夾帶劑置于20℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?/p>

22、優(yōu)選地，所述基于超臨界流體萃取法結(jié)合預(yù)配制的黃色素夾帶劑粗萃梔子干粉的方法，具體包括：

23、取脫脂除雜后的梔子干粉，將梔子干粉置于超臨界萃取器中，加蓋密封，設(shè)定萃取溫度為50℃；

24、開(kāi)啟二氧化碳鋼瓶和空壓器，設(shè)定萃取的壓力為30mpa，并設(shè)定300w功率的輔助微波；

25、溫度達(dá)到50℃后，穩(wěn)定5min，向超臨界萃取器中通入二氧化碳和預(yù)配制的黃色素夾帶劑，循環(huán)萃取15min，其中，二氧化碳的流速設(shè)定為3-3.5l/min，黃色素夾帶劑的流速為0.4-0.5ml/min；

26、萃取結(jié)束后，超臨界萃取器靜置10min，收集超臨界萃取器物料出口處的出料液，以300-350r/min的速度離心15min，去除出料液底部的殘?jiān)?，然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去出料液中的黃色素夾帶劑，得到黃色素粗提液。

27、優(yōu)選地，所述黃色素吸附樹(shù)脂包括以下按照重量份的原料：聚乙烯醇10-20份、馬來(lái)海松酸丙烯酸乙二醇酯20-60份、引發(fā)劑1-10份、致孔劑1-5份、表面活性劑1-15份、去離子水100-120份、六甲基磷酸三酰胺10-15份；

28、其中，引發(fā)劑為偶氮二異戊腈，表面活性劑為十二烷基苯磺酸鈉，致孔劑為聚乙烯吡咯烷酮、甲苯的1:1混合物；

29、其中，制備黃色素吸附樹(shù)脂的方法，具體包括：

30、取馬來(lái)海松酸丙烯酸乙二醇酯、聚乙烯醇、引發(fā)劑置于燒杯中，作為油相；

31、將去離子水、六甲基磷酸三酰胺、表面活性劑置于三口燒瓶中作為水相，然后油相和水相在氮?dú)獗Ｗo(hù)下混合攪拌，攪拌速度為200-250r/min，并采用空氣浴加熱至85-90℃，反應(yīng)2h；

32、向三口燒瓶中加入致孔劑，繼續(xù)反應(yīng)1h，然后采用0.5mol/l的蘋(píng)果酸調(diào)節(jié)ph值至6.0-6.5，冷卻至室溫，然后向三口燒瓶中加入3倍體積的無(wú)水乙醇索提2h，去除引發(fā)劑和致孔劑的殘留物，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到含有松香基的黃色素吸附樹(shù)脂。

33、優(yōu)選地，所述取黃色素粗提液上柱吸附，用45％乙醇溶液洗脫，分離黃色素溶液和雜質(zhì)溶液的方法，具體包括：

34、取黃色素吸附樹(shù)脂，向黃色素吸附樹(shù)脂中加入等體積的草酰氯和無(wú)水乙醇，100-120r/min下機(jī)械攪拌30min，在氬氣氛圍下加入無(wú)水氯化鋁，常溫環(huán)境下反應(yīng)4h；

35、加入等體積的乙醇洗滌過(guò)濾3-5次后，再加入等體積的乙醇浸泡過(guò)夜，烘干處理30min，將黃色素吸附樹(shù)脂放入三頸燒瓶?jī)?nèi)，加入4倍重量的二氯乙烷攪拌混合，然后緩慢滴加90％濃硫酸至ph為4.5-5；

36、三頸燒瓶水浴加熱至80℃，反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束后，將三頸燒瓶?jī)?nèi)的黃色素吸附樹(shù)脂轉(zhuǎn)移至層析柱內(nèi)，采用超純水反向沖洗3-5次至中性。

37、黃色素吸附樹(shù)脂濕法裝柱，取黃色素粗提液上柱吸附6h，黃色素粗提液的上樣流速為5ml/min，黃色素粗提液與黃色素吸附樹(shù)脂的重量比為5:2，用45％乙醇溶液洗脫，分離黃色素溶液和雜質(zhì)溶液。

38、優(yōu)選地，對(duì)雜質(zhì)溶液中綠原酸萃取純化時(shí)，所述純化萃取劑為丙酮、椰油酰胺丙基甜菜堿5:1重量比的混合物；

39、所述反萃劑為乙醇、蘋(píng)果酸4:1體積比的混合物。

40、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本技術(shù)實(shí)施例主要有以下有益效果：

41、本發(fā)明提供了的高純度的梔子黃色素的制備方法，在梔子黃色素制備時(shí)通過(guò)采用梔子干粉脫脂除雜處理、黃色素吸附樹(shù)脂對(duì)黃色素粗提液吸附提純的技術(shù)手段，從而得到純度、色價(jià)較高的梔子黃色素，同時(shí)能夠從梔子黃色素中分離梔子苷和綠原酸，能夠顯著降低梔子多糖、梔子苷和綠原酸導(dǎo)致梔子黃色素出現(xiàn)綠變和顏色暗沉的問(wèn)題。

42、本發(fā)明實(shí)施例提供了黃色素吸附樹(shù)脂及其制備方法，制備出來(lái)的黃色素吸附樹(shù)脂以馬來(lái)海松酸丙烯酸乙二醇酯為主體，同時(shí)結(jié)合表面活性劑、致孔劑和引發(fā)劑條件下合成，能夠充分的對(duì)梔子黃色素吸附，并輔助提高梔子黃色素的色價(jià)，同時(shí)還能將其他雜質(zhì)如梔子苷、綠原酸等分離出去，從而提高產(chǎn)品的純度。

43、本發(fā)明實(shí)施例中采用十二烷基硫酸鈉、苯酚對(duì)預(yù)脫脂干粉進(jìn)行脫糖處理，從而能夠避免梔子黃色素中梔子多糖的存在增加梔子黃色素黏度，包裹梔子黃色素，從而對(duì)梔子黃色素活性抑制的問(wèn)題，同時(shí)十二烷基硫酸鈉、苯酚能夠?qū)d子多糖萃取至有機(jī)相中，從而避免梔子多糖干擾梔子黃色素色素和純度。