L亞硝酸鈉試劑，至亞硝 酸鹽氮含量低于l〇mg/L時(shí)，重新加入亞硝酸鈉試劑，如此反復(fù)2次。關(guān)閉攪拌器、控溫儀和 曝氣栗，菌劑靜置2小時(shí)，棄去上清液，重新加入等量的相同鹽度的滅菌自來(lái)水，攪拌均勻， 分裝。
[0031] 實(shí)施例3
[0032] 為驗(yàn)證實(shí)施例1和2方法的可靠性，采用熒光原位雜交技術(shù)（FISH)對(duì)利用該方 法培養(yǎng)的制劑中亞硝酸細(xì)菌和硝酸細(xì)菌數(shù)量進(jìn)行分析，全菌采用EUBmix探針，F(xiàn)ITC熒光標(biāo) 記，氨氧化細(xì)菌采用NS01225探針，Cyts熒光標(biāo)記，亞硝酸鹽氧化細(xì)菌采用NIT3探針，Cyts 熒光標(biāo)記，結(jié)果見圖2,其中淡水型菌劑（實(shí)施例1)中亞硝酸細(xì)菌平均含量為63. 5%，硝酸 細(xì)菌平均含量為35. 6%，海水型菌劑（實(shí)施例2)中中亞硝酸細(xì)菌平均含量為34. 8%，硝酸 細(xì)菌平均含量為64. 7%，說(shuō)明本方法可以調(diào)控菌劑中亞硝酸細(xì)菌和硝酸細(xì)菌的比例。
[0033] 實(shí)施例4
[0034] 為驗(yàn)證按照實(shí)施例1制備菌劑對(duì)氨氮的實(shí)際去除效果，取菌劑10毫升接種至裝有 200mL亞硝酸細(xì)菌培養(yǎng)液的三角瓶中，培養(yǎng)液中氨氮含量為50毫克/升，用無(wú)菌紗布封住 瓶口，置于28°C溫度條件下150rpm振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中通過(guò)投加20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH，使其始終維持在7. 2~7. 5范圍，每隔8小時(shí)測(cè)定氨氮含量，同時(shí)設(shè)定空白實(shí)驗(yàn)與平行 樣。
[0035] 為驗(yàn)證按照實(shí)施例1制備菌劑對(duì)亞硝酸鹽氮的實(shí)際去除效果，取菌劑10毫升接種 至200mL硝酸細(xì)菌培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液中亞硝酸鹽含量為50毫克/升，用無(wú)菌紗布封住瓶口， 置于28°C溫度條件下150rpm振蕩培養(yǎng)，每隔8小時(shí)測(cè)定亞硝酸鹽氮含量，同時(shí)設(shè)定空白實(shí) 驗(yàn)與平行樣。
[0036] 試驗(yàn)結(jié)果見圖3?？梢钥闯觯凑諏?shí)施例1制備的菌劑對(duì)氨鹽和亞硝酸鹽都有一定 的去除效果，對(duì)氨氮的去除效果較好，24小時(shí)即可將50mg/L氨氮降至檢測(cè)不出，56小時(shí)可 以將將50mg/L亞硝酸鹽氮降至檢測(cè)不出。
[0037] 實(shí)施例5
[0038] 為驗(yàn)證按照實(shí)施例2制備的菌劑對(duì)氨鹽和亞硝酸鹽的實(shí)際去除效果，取菌劑10毫 升接種至裝有200mL亞硝酸細(xì)菌培養(yǎng)液的三角瓶中（鹽度3% )，培養(yǎng)液中氨氮含量為50 毫克/升，用無(wú)菌紗布封住瓶口，置于28°C溫度條件下150rpm振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中通過(guò)投 加20%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH，使其始終維持在7. 2~7. 5范圍，每隔8小時(shí)測(cè)定氨氮含量，同時(shí) 設(shè)定空白實(shí)驗(yàn)與平行樣。
[0039] 為驗(yàn)證按照實(shí)施例1制備菌劑對(duì)亞硝酸鹽的實(shí)際去除效果，取菌劑10毫升接種至 200mL硝酸細(xì)菌培養(yǎng)液中（鹽度3% )，溶液中亞硝酸鹽含量為50毫克/升，用無(wú)菌紗布封 住瓶口，置于28°C溫度條件下150rpm振蕩培養(yǎng)，每隔8小時(shí)測(cè)定亞硝酸鹽氮含量，同時(shí)設(shè)定 空白實(shí)驗(yàn)與平行樣。
[0040] 試驗(yàn)結(jié)果見圖4?？梢钥闯?，按照實(shí)施例2制備的菌劑對(duì)氨和亞硝酸鹽都有一定的 去除效果，對(duì)亞硝酸鹽的去除效果較好，24小時(shí)即可將50mg/L亞硝酸鹽降至檢測(cè)不出，48 小時(shí)可以將將50mg/L氨氮降至檢測(cè)不出。
[0041] 實(shí)施例6
[0042] 為了驗(yàn)證利用該方法制備不同鹽度的菌劑的凈化效果，分別用海水素配制鹽度為 0. 3 %、1. 0 %、2. 0 %、3. 0 %、4. 0 %的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液的其他成分與實(shí)施例1和2相同，然后 按照實(shí)施例1和2的方法制備亞硝酸細(xì)菌和硝酸細(xì)菌占優(yōu)勢(shì)的微生物制劑，分別取制備的 菌劑10毫升接種至裝有200mL氨氮含量為100毫克/升的亞硝酸細(xì)菌培養(yǎng)液以及亞硝酸鹽 含量為1〇〇毫克/升的硝酸細(xì)菌培養(yǎng)液的三角瓶中（鹽度分別設(shè)置為〇. 3%、1. 0%、2. 0%、 3. 0%、4. 0 % )，用無(wú)菌紗布封住瓶口，置于28°C溫度條件下150rpm振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中 通過(guò)投加碳酸鈉調(diào)節(jié)PH，使其始終維持在7. 2~7. 5范圍，每隔8小時(shí)測(cè)定氨氮和硝酸鹽氮 含量，同時(shí)設(shè)定空白實(shí)驗(yàn)與平行樣。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2、表3。
[0043] 表2不同鹽度條件下制備微生物制劑對(duì)氨氮的去除效果
[0044]
[0045] 表3不同鹽度條件下制備微生物制劑對(duì)亞硝酸鹽氮的去除效果
[0046]
[0047] 實(shí)施例7
[0048] 為驗(yàn)證本發(fā)明制備菌劑的活性保持情況，將制備的菌劑用塑料瓶密封后，置于室 溫環(huán)境（15-25°C)下保存。自保存之日起，每30d檢測(cè)硝化細(xì)菌制劑活性。具體方法為： (1)氨氧化活性的測(cè)定：從保存的菌劑取10mL加至200mL氨氮濃度為50mg/L的氯化銨溶 液中，在28°C、150rpm/min條件下?lián)u床培養(yǎng)，每隔24h測(cè)定氨氮濃度。同時(shí)設(shè)定對(duì)照組（空 白實(shí)驗(yàn)）和平行樣。硝化細(xì)菌活性用單位時(shí)間內(nèi)單位菌劑去除氨氮量表示，并將初始活性 設(shè)定為100%。（2)亞硝酸鹽氧化活性的測(cè)定：從保存的菌劑取10mL加至200mL亞硝酸鹽 濃度為50mg/L的亞硝酸鈉溶液中，在28°C、150rpm/min條件下?lián)u床培養(yǎng)，每隔24h測(cè)定亞 硝酸鹽濃度。同時(shí)設(shè)定對(duì)照組（空白實(shí)驗(yàn)）和平行樣。硝化細(xì)菌活性用單位時(shí)間內(nèi)單位菌 劑去除亞硝酸鹽量表示，并將初始活性設(shè)定為100%。
[0049] 試驗(yàn)結(jié)果見圖5,可以看出，淡水型硝化細(xì)菌和海水型硝化細(xì)菌在密閉室溫條件下 保存1年后，菌劑仍能保持60%以上氨氧化活性和亞硝酸鹽氧化活性。
[0050] 應(yīng)當(dāng)理解的是，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可以根據(jù)上述說(shuō)明加以改進(jìn)或變換， 而所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：（1)在具備攪 拌、控溫和充氧功能的培養(yǎng)裝置中加入經(jīng)滅菌后冷卻的營(yíng)養(yǎng)液，所述營(yíng)養(yǎng)液采用在滅菌自 來(lái)水中加入海水素和微量元素液制備而成；（2)加入無(wú)機(jī)礦物質(zhì)作為載體；(3)接種亞硝酸 細(xì)菌和硝酸細(xì)菌；(4)啟動(dòng)攪拌器、曝氣栗和控溫儀，培養(yǎng)期間通過(guò)間歇加入不同類型無(wú)機(jī) 氮源調(diào)控亞硝酸細(xì)菌和硝酸細(xì)菌數(shù)量比例；（5)培養(yǎng)過(guò)程結(jié)束后，關(guān)閉攪拌器、控溫儀和曝 氣栗，靜置菌劑，待菌劑沉降后棄去上清液，然后加入與步驟（1)相同體積相同鹽度的滅菌 自來(lái)水，攪拌均勻后分裝即得微生物制劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟 (1) 中，如果是培養(yǎng)海水型硝化細(xì)菌制劑，將鹽度調(diào)至3%，如果是培養(yǎng)淡水型硝化細(xì)菌制 劑，將鹽度調(diào)至〇. 3% ;然后按0. 5~1. 5%。（V/V)比例加入微量元素液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述微量 元素液為：硫酸銅7. 5mg，硫酸鋅0. 287mg，氯化猛14. 85mg，氯化鐵3. 9g，鉬酸鈉6. 8mg，六 水氯化鈷12mg，硫酸鎳2. 4mg，蒸餾水1000ml。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟 (2) 中，所述無(wú)機(jī)礦物質(zhì)按2~6% (W/V)比例加入，最佳比例3. 0~3. 5 (W/V)，無(wú)機(jī)礦物質(zhì) 為娃藻土、石灰石中的一種或不同比例的組合，粒徑范圍為5~30微米，最佳為15~20微 米。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟 (3) 中，培養(yǎng)時(shí)按照20~40% (V/V)比例接入市售硝化細(xì)菌作為種子液，亞硝酸細(xì)菌和硝 酸細(xì)菌比例為I : I (V/V)，最佳接種量30~35% (V/V)。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)過(guò)程 中，啟動(dòng)攪拌器、曝氣栗和控溫儀，控制攪拌器轉(zhuǎn)速使培養(yǎng)液能充分混勻并且無(wú)機(jī)礦物質(zhì) 能夠懸浮在培養(yǎng)液中，控制反應(yīng)裝置內(nèi)溫度在25~35°C，最適宜溫度為28~30°C ;pH為 7. 0~8. 5,海水型最適宜pH為8. 0~8. 2,淡水型最適宜pH為7. 2~7. 5 ;溶解氧為2. 5~ 6. Omg/L，最適宜溶解氧為4. 0~5. 5mg/L。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟 (4) 中，加入氨鹽和亞硝酸鹽試劑，通過(guò)調(diào)控添加氨鹽和亞硝酸鹽試劑的劑量來(lái)調(diào)控菌劑中 亞硝酸細(xì)菌和硝酸細(xì)菌相對(duì)數(shù)量。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，具體做法 是：如果培養(yǎng)亞硝酸細(xì)菌數(shù)量占優(yōu)勢(shì)的菌劑，則首先往培養(yǎng)裝置中加入銨鹽試劑，使氨氮含 量達(dá)到100~200mg/L，監(jiān)測(cè)反應(yīng)器內(nèi)溶解氧、pH、氨氮和亞硝酸鹽氮含量變化，至檢測(cè)不出 氨氮，并且亞硝酸鹽氮含量低于l〇mg/L時(shí)，然后再次加入100~200mg/L銨鹽試劑，如此反 復(fù)2~3次，待系統(tǒng)在24小時(shí)內(nèi)能將100mg/L氨氮轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽氮，并且進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為 硝酸鹽氮，停止加入銨鹽試劑；如果培養(yǎng)硝酸細(xì)菌數(shù)量占優(yōu)勢(shì)的菌劑，則首先往培養(yǎng)裝置中 加入亞硝酸鹽試劑，使亞硝酸鹽氮含量達(dá)到100~200mg/L，定期監(jiān)測(cè)反應(yīng)器內(nèi)溶解氧、pH、 亞硝酸鹽氮含量變化，至亞硝酸鹽氮含量低于l〇mg/L時(shí)，重新加入亞硝酸鹽試劑，使其含 量達(dá)到100~200mg/L，如此反復(fù)3~4次，待系統(tǒng)對(duì)亞硝酸鹽氮的去除效果能夠達(dá)到24小 時(shí)去除l〇〇mg/L以上時(shí)，往培養(yǎng)裝置中加入銨鹽試劑，使氨氮含量達(dá)到50~100mg/L，定期 監(jiān)測(cè)反應(yīng)器內(nèi)溶解氧、pH、氨氮和亞硝酸鹽氮含量變化，至檢測(cè)不出氨氮并且亞硝酸鹽氮含 量低于lOmg/L時(shí)，重新加入銨鹽試劑，使氨氮含量達(dá)到50~100mg/L，如此反復(fù)2~3次， 然后再次往培養(yǎng)裝置中加入100~200mg/L亞硝酸鹽試劑，至亞硝酸鹽氮含量低于10mg/L 時(shí)，重新加入亞硝酸鹽試劑，如此反復(fù)2~3次。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述銨鹽 試劑選擇氯化銨、硫酸銨、碳酸銨、碳酸氫銨，亞硝酸鹽試劑選擇亞硝酸鈉、亞硝酸鉀。10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9任一所述的制備方法制備獲得的水質(zhì)凈化用微生物制劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種水質(zhì)凈化用微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：(1)在具備攪拌、控溫和充氧功能的培養(yǎng)裝置中加入經(jīng)滅菌后冷卻的營(yíng)養(yǎng)液；(2)加入無(wú)機(jī)礦物質(zhì)作為載體；(3)接種亞硝酸細(xì)菌和硝酸細(xì)菌；(4)啟動(dòng)攪拌器、曝氣泵和控溫儀，培養(yǎng)期間通過(guò)間歇加入不同類型無(wú)機(jī)氮源調(diào)控亞硝酸細(xì)菌和硝酸細(xì)菌數(shù)量比例；(5)培養(yǎng)過(guò)程結(jié)束后，關(guān)閉攪拌器、控溫儀和曝氣泵，靜置菌劑，待菌劑沉降后棄去上清液，然后加入與步驟(1)相同體積相同鹽度的滅菌自來(lái)水，攪拌均勻后分裝即得微生物制劑。通過(guò)調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的鹽度，可制備適用于不同鹽度環(huán)境產(chǎn)品；制成的微生物制劑可保持生物活性1年以上。
【IPC分類】C02F3/34
【公開號(hào)】CN105152361
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510629058
【發(fā)明人】宋志文
【申請(qǐng)人】宋志文
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年9月29日