本發(fā)明涉及一種金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的制備方法，屬生物功能材料制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

人血紅蛋白(Hb)，作為人體血液中的一種重要的組成成分，在人的日常生活中扮演著重要的角色。它主要將氧氣分子從肺部運送到身體各處，并將身體各處組織產(chǎn)生的廢氣(如二氧化碳)運送到肺部排除體外。同時，人體中血紅蛋白的含量能夠反映人體病癥的情況，例如：白血病、貧血以及心臟病等。因此，對于人體中血紅蛋白的精確監(jiān)測，能夠反映人體中各個器官的活動情況。

目前，對于人體血紅蛋白的傳統(tǒng)檢測方法有：電化學(xué)法、質(zhì)譜法以及高效液相法等。這些方法都有著它們各自的優(yōu)勢之處，例如：高效液相法有著良好的重現(xiàn)性和較低的檢出限，但是，它仍然存在著很多的不足之處，包括需要繁瑣的樣品前處理過程。例如在前處理的過程中，通常會造成二次污染而且操作過程相對復(fù)雜、成本費用較高。因此，針對人體中成分復(fù)雜、性質(zhì)相似和含量偏低的血紅蛋白，建立和完善快速、靈敏和選擇性的分析檢測方法是做好血紅蛋白監(jiān)控的當(dāng)務(wù)之急。

近年來，分子印跡聚合物(MIPs)憑借著其構(gòu)效預(yù)定性、特異識別性和廣泛實用性等優(yōu)異的特性，逐漸吸引了越來越多的科學(xué)工作者的青睞。首先，將模板分子加入到聚合基質(zhì)中，模板分子和功能單體之間能夠通過共價鍵和非共價鍵的作用連接在一起，聚合后將模板分子移除，從而形成一定的分子印跡識別位點。表面分子印跡技術(shù)則是通過把分子識別位點建立在基質(zhì)材料的表面。因此，這種方法能夠較好的解決傳統(tǒng)分子印跡聚合物存在的一些嚴(yán)重缺陷，如機械性能差、活性位點包埋過深、模板分子的去除不徹底、吸附容量偏低和吸附-脫附的動力學(xué)性能不佳等。通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，高大明等人于2007年，在JACS上發(fā)表的一篇文章“A Surface Functional Monomer-Directing Strategy for Highly Dense Imprinting of TNT at Surface of Silica Nanoparticles”(一種硅球表面功能化的單體指向性識別TNT的方法)，該篇作者通過在硅球表面制備一種功能化的印跡聚合物，用來識別TNT，并取得了良好的實驗結(jié)果。雖然表面印跡技術(shù)有諸多優(yōu)點，但該方法仍然存在很多不足，例如：工作量較大，速度慢，靈敏度較低。因此，如何能夠優(yōu)化表面印跡技術(shù)還是一件亟待解決的問題。

在過去的十幾年中，熒光檢測技術(shù)憑借著靈敏的檢測性能，已經(jīng)在生物和化學(xué)領(lǐng)域受到了越來越廣泛的關(guān)注。與傳統(tǒng)的有機熒光素相比，熒光量子點及熒光納米粒子具有較好的耐光性，較大的斯托克斯位移和熒光光譜窄且對稱等性質(zhì)，逐漸發(fā)展成為一類新型的具有廣泛發(fā)展前景的發(fā)光生物標(biāo)記材料。其中，由于金納米粒子具有化學(xué)惰性和在生物體內(nèi)的穩(wěn)定性，從而成為生物研究的理想材料。同樣，納米尺度的金粒子對于生物細(xì)胞來說具有低毒性，并且在生物體內(nèi)和臨床生物相容性的研究中也取得了令人滿意的結(jié)果，因此，金納米粒子逐漸被應(yīng)用于生物領(lǐng)域的研究。

因此，將高靈敏性的熒光檢測與高選擇性的分子印跡技術(shù)相結(jié)合用于對人血紅蛋白的檢測，利用熒光信號彌補分子印跡聚合物缺乏信號傳導(dǎo)的缺陷，制備分子印跡熒光傳感器，滿足了傳感器材對抗干擾、高選擇、高靈敏等方面的需求，成為了當(dāng)前傳感、分離等領(lǐng)域的研究熱點。表面分子印跡熒光傳感器的制備使分子印跡技術(shù)在分析檢測中的應(yīng)用范圍和使用方法得到進(jìn)一步擴展，同時分子印跡聚合物的選擇性也使復(fù)合型熒光探針的靈敏度和選擇性得到顯著提高。利用分子印跡表面熒光傳感器進(jìn)行光學(xué)分析，使得快速、方便檢測殘留量的研究成為必要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的制備方法，首先，將正硅酸四乙酯(TEOS)加入到乙醇、水的混合溶劑中，攪拌均勻后加入氨水(NH₃·H₂O)，待硅球生成后，加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)對生成的SiO₂球進(jìn)行表面氨基化處理，反應(yīng)后，反復(fù)洗滌，離心分離，烘干備用；其次，將四氯金酸(HAuCl₄)與谷胱甘肽(GSH)同時加入到去離子水中，充分?jǐn)嚢?，反?yīng)數(shù)小時，生成金納米粒子，將合成的產(chǎn)物儲存在4℃條件下，待用；然后，將合成的金納米粒子與含有1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)的2-嗎啉乙磺酸(MES)溶液相混合，攪拌條件下再滴加一定量的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，然后將其加入到含有SiO₂球的MES溶液中，充分?jǐn)嚢瑁沟媒鸺{米粒子能夠接到SiO₂球的表面；最后，將制備的SiO₂/Au納米粒子分散在去離子水中，通過硅基印跡法，合成以人血紅蛋白為模板分子，SiO₂納米球為載體，金納米粒子為熒光物質(zhì)，3-氨基丙基三乙氧基硅烷為功能單體的核殼型表面分子印跡聚合物，并用于光學(xué)檢測人血紅蛋白。制備的表面熒光分子印跡聚合物具有良好的光學(xué)性質(zhì)，且對于人血紅蛋白具有良好的選擇性能。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的制備方法，步驟如下：

步驟1、3-氨基丙基三乙氧基硅烷修飾的SiO₂球的合成

在單口燒瓶中，加入體積比9：1的乙醇/水的混合溶劑，攪拌條件下，逐滴加入正硅酸四乙酯，充分?jǐn)嚢韬?，加入氨水，攪?～3h后，逐滴加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷，攪拌12～14h；隨后，將合成的產(chǎn)物離心分離，洗滌，真空干燥待用；

步驟2、羧基修飾的金納米粒子的合成

在單口燒瓶中，將濃度為20mmol/L的HAuCl₄溶液分散在去離子水中，攪拌條件下，加入50mmol/L的谷胱甘肽溶液，升溫至70～90℃，持續(xù)攪拌20～24h；將得到的羧基修飾的金納米粒子分散液密封儲存在4℃條件下，待用；

步驟3、SiO₂/Au納米粒子的合成

將步驟2得到的羧基修飾的金納米粒子分散液加入到1mmol/L 2-嗎啉乙磺酸溶液中，攪拌條件下，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽溶液，繼續(xù)攪拌，再逐滴加入10mg/mL N-羥基琥珀酰亞胺溶液，隨后靜置，得到混合液A，待用；另將SiO₂球分散在1mmol/L 2-嗎啉乙磺酸溶液中，得到混合液B；攪拌條件下，將混合液A逐滴加入到混合液B中，隨后將反應(yīng)體系避光，繼續(xù)攪拌12～14h；將產(chǎn)物離心分離，洗滌，隨后分散在PBS緩沖溶液中，得到SiO₂/Au納米粒子分散液，待用；

步驟4、金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的制備

在單口燒瓶中，依次加入SiO₂/Au納米粒子分散液、血紅蛋白(Hb)、3-氨基丙基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯、氨水，超聲分散，將反應(yīng)體系密封，將燒瓶至于磁力攪拌器上，常溫攪拌12～14h；反應(yīng)結(jié)束后，收集并洗滌產(chǎn)物，以除去未反應(yīng)的物質(zhì)，最終用曲拉通X-100洗滌，脫除模板分子，室溫下真空干燥，得到金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物；最后，產(chǎn)物在真空烘箱中干燥，得到金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物，在干燥器中存儲。

步驟1中，正硅酸四乙酯與乙醇/水的混合溶劑的體積比為1:16～20，正硅酸四乙酯與氨水的體積比為1：0.2～0.6，正硅酸四乙酯與3-氨基丙基三乙氧基硅烷的體積比為1：0.2～0.6；氨水的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28％，所述的洗滌為乙醇和水分別洗滌3次。

步驟2中，HAuCl₄溶液與去離子水的體積比為1:6～10，HAuCl₄溶液與谷胱甘肽溶液的體積比為1：0.6～1。

步驟3中，制備混合液A時，羧基修飾的金納米粒子分散液與2-嗎啉乙磺酸溶液的體積比為1：0.6～1，羧基修飾的金納米粒子分散液與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽溶液的體積比為1：0.01～0.014，羧基修飾的金納米粒子分散液與NHS溶液的體積比為1：0.6～0.8；制備混合液B時，SiO₂球與2-嗎啉乙磺酸溶液的用量比為3～4mg：3mL，SiO₂球與混合液A中的羧基修飾的金納米粒子分散液的用量比為6～8mg：1mL；所述的洗滌為乙醇和水分別洗滌3次；所使用的PBS緩沖溶液與羧基修飾的金納米粒子分散液的體積比為1:1，PBS緩沖溶液的pH為7.0，濃度為0.01M。

步驟4中，SiO₂/Au納米粒子分散液、血紅蛋白、3-氨基丙基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯和氨水的用量比為1mL：1mg：8μL：0.01～0.02μL：0.01～0.02μL；氨水的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28％，所述的洗滌為乙醇和水分別洗滌3次。

本發(fā)明對應(yīng)的非印跡聚合物的制備方法類似合成方法如上，但不加Hb。

有益效果：

本發(fā)明將熒光檢測技術(shù)與表面分子印跡技術(shù)相結(jié)合，使得制備的產(chǎn)物兼具靈敏的檢測性質(zhì)與特異性的選擇性質(zhì)；本發(fā)明將具有生物低毒性的金納米粒子選作熒光檢測物質(zhì)，用于對人血紅蛋白的檢測，拓寬了熒光檢測的應(yīng)用范圍；在本發(fā)明中，將具有熒光性質(zhì)的金納米粒子與硅基表面分子印跡技術(shù)相結(jié)合，使得聚合產(chǎn)物具有生物良好的生物兼容性，能夠應(yīng)用于對血紅蛋白的檢測。金納米粒子近幾年，逐漸成為了科學(xué)研究熱點。金納米粒子符合材料是獲取材料新特性的一種有效手段，對于改善現(xiàn)有的熒光光學(xué)性質(zhì)以及促進(jìn)熒光傳感器的發(fā)展，有著十分重要的意義。本發(fā)明預(yù)示著金納米粒子在生物熒光傳感器領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的透射電鏡圖；

圖2為金納米粒子以及SiO₂/Au/MIPs的熒光穩(wěn)定性；

圖3為不同濃度的Hb對金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物(左圖)和非印跡聚合物(右圖)熒光光譜的影響；

圖4為不同濃度的Hb與金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物(左圖)和非印跡聚合物(右圖)作用后的相對熒光強度線性圖；

圖5為不同蛋白質(zhì)類物質(zhì)在同一濃度下對金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物和非印跡聚合物作用的相對熒光強度。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施實例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。

實施例1：

(1)APTES修飾的SiO₂球的合成：

在250mL三口燒瓶中，加入80mL乙醇、水混合溶劑(體積比9/1)，攪拌條件下，加入5mL TEOS。充分?jǐn)嚢韬螅尤?mL氨水，室溫條件下持續(xù)攪拌1h。隨后加入1mL APTES，繼續(xù)攪拌12h。將產(chǎn)物離心分離，洗滌烘干，待用。

(2)羧基修飾的金納米粒子的合成：

在100mL單口燒瓶中，將5mL濃度為20mmol/L的HAuCl₄溶液分散在30mL去離子水中，充分?jǐn)嚢韬?，加?mL濃度為50mmol/L的GSH溶液，升溫至70℃，持續(xù)攪拌20h。將合成的金納米粒子密封儲存在4℃條件下，待用。

(3)SiO₂/Au納米粒子的合成：

在100mL單口燒瓶中，加入6mL MES(1mmol/L)，攪拌條件下，逐滴加入10mL羧基修飾的金納米粒子分散液，充分?jǐn)嚢韬?，加?00μLEDC，繼續(xù)攪拌，逐滴加入6mL NHS(10mg/mL)溶液，隨后靜置；另取100mL單口燒瓶，加入60mL MES(1mmol/L)，攪拌條件下，加入60mg APTES修飾的SiO₂球，攪拌條件下，將含有金納米粒子的MES溶液逐滴加入到SiO₂的溶液中，隨后將反應(yīng)體系避光，繼續(xù)攪拌12h。將產(chǎn)物離心分離，反復(fù)洗滌，隨后分散在10mL PBS緩沖溶液中，待用。

(4)金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的制備

在50mL單口燒瓶中，加入SiO₂/Au納米粒子的PBS分散液，充分?jǐn)嚢韬?，依次加?0mg Hb，80μL APTES，100μL TEOS，充分?jǐn)嚢韬?，加?00μL氨水，隨后，將反應(yīng)體系密封，然后置于磁力攪拌器上，常溫攪拌12h，反應(yīng)結(jié)束后，洗滌數(shù)次，以除去未反應(yīng)完的物質(zhì)，最終用曲拉通X-100反復(fù)洗滌，脫除模板分子，室溫下真空干燥，得到金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物。最后，產(chǎn)物在真空烘箱中干燥，得到金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物，記為SiO₂/Au/MIPs，并在干燥器中存儲。

步驟(1)中所述的反應(yīng)體系中，TEOS與混合溶劑的體積比為5mL:80mL，TEOS與氨水的體積比為5mL:1mL，TEOS與APTES的體積比為5mL:1mL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

步驟(2)中所述的反應(yīng)體系中，HAuCl₄溶液與溶劑水的體積比為5mL:30mL，HAuCl₄溶液與GSH溶液的體積比為5mL:3mL。

步驟(3)中所述的反應(yīng)體系中，羧基修飾的金納米粒子分散液與MES溶液的體積比為10mL:6mL，羧基修飾的金納米粒子分散液與EDC溶液的體積比為10mL:100μL，羧基修飾的金納米粒子分散液與NHS溶液的體積比為10mL:6mL，羧基修飾的金納米粒子分散液與SiO₂球的體積質(zhì)量比為10mL:60mg，SiO₂球與MES溶液的質(zhì)量體積比為60mg:60mL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

步驟(4)所述的反應(yīng)體系中，SiO₂/Au納米粒子分散液的體積為10mL，Hb、APTES與TEOS的質(zhì)量體積比為10mg:80μL:100μL，氨水的體積為100μL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

本發(fā)明對應(yīng)的非印跡聚合物的制備方法類似合成方法如上，但不加Hb。

實施例2：

(1)APTES修飾的SiO₂球的合成：

在250mL三口燒瓶中，加入100mL乙醇、水混合溶劑(體積比9/1)，攪拌條件下，加入5mL TEOS。充分?jǐn)嚢韬?，加?mL氨水，室溫條件下持續(xù)攪拌1h。隨后加入3mL APTES，繼續(xù)攪拌14h。將產(chǎn)物離心分離，洗滌烘干，待用。

(2)羧基修飾的金納米粒子的合成：

在100mL單口燒瓶中，將5mL濃度為20mmol/L的HAuCl₄溶液分散在50mL去離子水中，充分?jǐn)嚢韬?，加?mL濃度為50mmol/L的GSH溶液，升溫至90℃，持續(xù)攪拌24h。將合成的金納米粒子密封儲存在4℃條件下，待用。

(3)SiO₂/Au納米粒子的合成：

在100mL單口燒瓶中，加入10mL MES(1mmol/L)，攪拌條件下，逐滴加入10mL羧基修飾的金納米粒子分散液，充分?jǐn)嚢韬?，加?40μLEDC，繼續(xù)攪拌，逐滴加入8mL NHS(10mg/mL)溶液，隨后靜置；另取100mL單口燒瓶，加入60mL MES(1mmol/L)，攪拌條件下，加入80mg APTES修飾的SiO₂球，攪拌條件下，將含有金納米粒子的MES溶液逐滴加入到SiO₂的溶液中，隨后將反應(yīng)體系避光，繼續(xù)攪拌14h。將產(chǎn)物離心分離，反復(fù)洗滌，隨后分散在10mL PBS緩沖溶液中，待用。

(4)金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的制備

在50mL單口燒瓶中，加入SiO₂/Au納米粒子的PBS分散液，充分?jǐn)嚢韬螅来渭尤?0mg Hb，80μL APTES，200μL TEOS，充分?jǐn)嚢韬?，加?00μL氨水，隨后，將反應(yīng)體系密封，然后置于磁力攪拌器上，常溫攪拌14h，反應(yīng)結(jié)束后，洗滌數(shù)次，以除去未反應(yīng)完的物質(zhì)，最終用曲拉通X-100反復(fù)洗滌，脫除模板分子，室溫下真空干燥，得到金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物。最后，產(chǎn)物在真空烘箱中干燥，得到金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物，記為SiO₂/Au/MIPs，并在干燥器中存儲。

步驟(1)中所述的反應(yīng)體系中，TEOS與混合溶劑的體積比為5mL:100mL，TEOS與氨水的體積比為5mL:3mL，TEOS與APTES的體積比為5mL:3mL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

步驟(2)中所述的反應(yīng)體系中，HAuCl₄溶液與溶劑水的體積比為5mL:50mL，HAuCl₄溶液與GSH溶液的體積比為5mL:5mL。

步驟(3)中所述的反應(yīng)體系中，羧基修飾的金納米粒子分散液與MES溶液的體積比為10mL:10mL，羧基修飾的金納米粒子分散液與EDC溶液的體積比為10mL:140μL，羧基修飾的金納米粒子分散液與NHS溶液的體積比為10mL:10mL，羧基修飾的金納米粒子分散液與SiO₂球的體積質(zhì)量比為10mL:80mg，SiO₂球與MES溶液的質(zhì)量體積比為80mg:60mL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

步驟(4)所述的反應(yīng)體系中，SiO₂/Au納米粒子分散液的體積為10mL，Hb、APTES與TEOS的質(zhì)量體積比為10mg:80μL:200μL，氨水的體積為200μL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

本發(fā)明對應(yīng)的非印跡聚合物的制備方法類似合成方法如上，但不加Hb。

實施例3：

(1)APTES修飾的SiO₂球的合成：

在250mL三口燒瓶中，加入90mL乙醇、水混合溶劑(體積比9/1)，攪拌條件下，加入5mL TEOS。充分?jǐn)嚢韬?，加?mL氨水，室溫條件下持續(xù)攪拌1h。隨后加入2mL APTES，繼續(xù)攪拌13h。將產(chǎn)物離心分離，洗滌烘干，待用。

(2)羧基修飾的金納米粒子的合成：

在100mL單口燒瓶中，將5mL濃度為20mmol/L的HAuCl₄溶液分散在40mL去離子水中，充分?jǐn)嚢韬?，加?mL濃度為50mmol/L的GSH溶液，升溫至80℃，持續(xù)攪拌22h。將合成的金納米粒子密封儲存在4℃條件下，待用。

(3)SiO₂/Au納米粒子的合成：

在100mL單口燒瓶中，加入8mL MES(1mmol/L)，攪拌條件下，逐滴加入10mL羧基修飾的金納米粒子分散液，充分?jǐn)嚢韬?，加?20μL EDC，繼續(xù)攪拌，逐滴加入7mL NHS(10mg/mL)溶液，隨后靜置；另取100mL單口燒瓶，加入60mL MES(1mmol/L)，攪拌條件下，加入70mg APTES修飾的SiO₂球，攪拌條件下，將含有金納米粒子的MES溶液逐滴加入到SiO₂的溶液中，隨后將反應(yīng)體系避光，繼續(xù)攪拌13h。將產(chǎn)物離心分離，反復(fù)洗滌，隨后分散在10mL PBS緩沖溶液中，待用。

(4)金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的制備

在50mL單口燒瓶中，加入SiO₂/Au納米粒子的PBS分散液，充分?jǐn)嚢韬?，依次加?0mg Hb，80μL APTES，150μL TEOS，充分?jǐn)嚢韬?，加?50μL氨水，隨后，將反應(yīng)體系密封，然后置于磁力攪拌器上，常溫攪拌13h，反應(yīng)結(jié)束后，洗滌數(shù)次，以除去未反應(yīng)完的物質(zhì)，最終用曲拉通X-100反復(fù)洗滌，脫除模板分子，室溫下真空干燥，得到金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物。最后，產(chǎn)物在真空烘箱中干燥，得到金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物，記為SiO₂/Au/MIPs，并在干燥器中存儲。

步驟(1)中所述的反應(yīng)體系中，TEOS與混合溶劑的體積比為5mL:90mL，TEOS與氨水的體積比為5mL:2mL，TEOS與APTES的體積比為5mL:2mL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

步驟(2)中所述的反應(yīng)體系中，HAuCl₄溶液與溶劑水的體積比為5mL:40mL，HAuCl₄溶液與GSH溶液的體積比為5mL:4mL。

步驟(3)中所述的反應(yīng)體系中，羧基修飾的金納米粒子分散液與MES溶液的體積比為10mL:8mL，羧基修飾的金納米粒子分散液與EDC溶液的體積比為10mL:120μL，羧基修飾的金納米粒子分散液與NHS溶液的體積比為10mL:8mL，羧基修飾的金納米粒子分散液與SiO₂球的體積質(zhì)量比為10mL:70mg，SiO₂球與MES溶液的質(zhì)量體積比為70mg:60mL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

步驟(4)所述的反應(yīng)體系中，SiO₂/Au納米粒子分散液的體積為10mL，Hb、APTES與TEOS的質(zhì)量體積比為10mg:80μL:150μL，氨水的體積為150μL。步驟中所述的洗滌，為乙醇和水分別洗滌3次。

本發(fā)明所使用的氨水的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為28％，PBS緩沖溶液的pH均為7.0，濃度為均0.01M。

本發(fā)明對應(yīng)的非印跡聚合物的制備方法類似合成方法如上，但不加Hb。

本發(fā)明所制備的材料的透射電鏡圖如圖1，由圖1中可以看出，該印跡聚合物形貌明顯，已經(jīng)成功合成，聚合物尺寸為200～300nm，且分散性良好。

本發(fā)明具體實施方式中識別和光學(xué)檢測性能評價按照下述方法進(jìn)行：將適量金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物的水溶液和一系列已知濃度的目標(biāo)物溶液加入到10mL比色管中。用分子熒光光度計測量系統(tǒng)檢測溶液的熒光強度。根據(jù)Stern-Volmer equation(F₀/F＝1+K_sv[c])以濃度[c]為橫坐標(biāo)，相對熒光強度(F₀/F)為縱坐標(biāo)繪制熒光響應(yīng)曲線。選擇幾種蛋白質(zhì)類物質(zhì)，作為對比物質(zhì)，參與表面熒光分子印跡聚合物識別性能的研究。

試驗例1：首先考察了聚合物的熒光時間穩(wěn)定性(如圖2所示，所制得的金納米粒子熒光分子印跡聚合物在制備后的7天之間內(nèi)，熒光強度基本穩(wěn)定，且SiO₂/Au/MIPs的熒光穩(wěn)定性要優(yōu)于純的金納米粒子)。將熒光分子印跡材料配置成100mg/L的水溶液，蛋白質(zhì)類目標(biāo)物配置成為0.1mmol/L的水溶液。取3.3mL聚合物溶液和0-2mL目標(biāo)物人血紅蛋白溶液加入到比色管中，并用PBS緩沖溶液定容至10mL，然后用熒光分光光度計檢測溶液的熒光強度。根據(jù)Stern-Volmer equation(F₀/F＝1+K_sv[c])以濃度[c]為橫坐標(biāo)，相對熒光強度(F₀/F)為縱坐標(biāo)繪制熒光響應(yīng)曲線。如圖3所示，隨著人血紅蛋白濃度的升高，熒光強度減弱，根據(jù)Stern-Volmer equation(F₀/F＝1+K_sv[c])以濃度[c]為橫坐標(biāo)，相對熒光強度(F₀/F)為縱坐標(biāo)繪制熒光響應(yīng)曲線，分別得到相關(guān)系數(shù)為0.9995和0.9943的直線(如圖4所示)。結(jié)果表明，金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物具有很好的光學(xué)檢測人血紅蛋白的能力。

試驗例2：選擇牛血清蛋白(BSA)、牛血紅蛋白(BHb)和雞蛋白蛋白(ACE)三種目標(biāo)物，分別配置以上幾種蛋白質(zhì)類物質(zhì)0.1mmol/L水溶液。取3.3mL配置好的聚合物的水溶液和2mL酚類物質(zhì)的水溶液加入到比色管中，并用PBS緩沖溶液定容，室溫下振蕩后，用熒光分光光度計檢測溶液的熒光強度。由圖5為不同蛋白質(zhì)類物質(zhì)在同一濃度下(10μmol/L)對金納米粒子表面熒光分子印跡聚合物和非印跡聚合物作用的相對熒光強度，由圖5可知，人血紅蛋白對熒光分子印跡聚合物的猝滅量最大，說明熒光分子印跡聚合物對模板分子人血紅蛋白具有特異性識別能力。結(jié)果表明，本發(fā)明制備的熒光分子印跡聚合物對人血紅蛋白有明顯的專一識別性，猝滅效果高于其它蛋白質(zhì)類物質(zhì)。