本發(fā)明涉及一種木奶果提取物的制備方法，屬于植物提取技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
木奶果(Baccaurea ramiflora Lour.)，又稱水賴、麥穗、蒜瓣果，屬大戟科木奶果屬，為常綠喬木或灌木，分布于印度、馬來(lái)西亞、泰國(guó)、緬甸、越南及中國(guó)西南部。其果實(shí)富含總糖、維生素C、揮發(fā)油及人體所需的多種微量元素等，具體成分含量為：可食率為49.2％、含水分84.7％、脂肪0.06％、淀粉0.47％、纖維0.29％、VC1.57mg/100g、可滴定酸1.99％、總糖11.87％。同時(shí)，果肉多汁、酸甜可口，解暑去熱，是良好的飲品及酸味添加劑；果核姹紫嫣紅，是天然的食用色素；果皮色黃易剝，含有酚類、抗菌類等多種功能性物質(zhì)。
隨著木奶果應(yīng)用的深入，木奶果越來(lái)越吸引本領(lǐng)域科研人員的關(guān)注。文獻(xiàn)[張容鵠，夏義杰，竇志浩等人，木奶果果皮多酚提取工藝優(yōu)化及其體外抗氧化活性研究，(J)，熱帶作物學(xué)報(bào)，2016，37(5)：1009-1016]公開(kāi)了一種木奶果果皮多酚的提取工藝：木奶果果皮粉末→按比例與乙醇混合→水浴恒溫振蕩→離心→過(guò)濾→濃縮→冷凍干燥→定容→測(cè)定A760
→計(jì)算含量。該提取的成分比較單一、木奶果中的許多有效成分未能保留如總糖，揮發(fā)油等，而且提取率和效率偏低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提出了一種木奶果提取物的制備方法。
一種木奶果提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)將風(fēng)干的木奶果果實(shí)洗凈、消毒，粉碎成100～120目，并在60℃條件下干燥15～20min后，加入木奶果果實(shí)干燥后重量5～10倍的60～80％乙醇攪拌，攪拌5～10min后用膠體磨研磨30～40min；
2)將步驟1)所得的料液保持在溫度40～50℃，并調(diào)節(jié)pH為4～6，同時(shí)加入占木奶果果實(shí)干燥后重量0.2～0.4％的復(fù)合酶酶解1～2h，其中，復(fù)合酶是由3～5重量份纖維素酶和2～4重量份果膠酶混合而成；
3)將步驟2)所得的酶解液于100～110℃保持6～10min滅菌后，置于超聲頻率40～50kHz，溫度30～40℃下進(jìn)行超聲提取，提取10～20min，過(guò)濾，得到濾液1和濾渣1，備用；
4)在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量8～10倍的80～90％乙醇攪拌，攪拌10～15min后用膠體磨研磨40～60min，并置于超聲頻率40～50kHz，溫度40～60℃下進(jìn)行超聲提取，提取15～20min，過(guò)濾，得到濾液2和濾渣2，備用；
5)在步驟4)所得的濾渣2中加入濾渣2重量8～10倍的70～90％乙醇攪拌，攪拌20～25min后用膠體磨研磨40～60min，并加熱到80～90℃，回流提取1～2h，過(guò)濾，得到濾液3和濾渣3，備用；
6)在步驟5)所得的濾渣3中加入濾渣3重量6～8倍的水?dāng)嚢?，攪?0～25min后用膠體磨研磨40～60min，并加熱到90～100℃，提取40～60min，過(guò)濾，得到濾液4，備用；
7)合并濾液1、2、3、4，并將濾液置于4000～5000轉(zhuǎn)/min的離心機(jī)上離心5～10min，過(guò)濾，得到木奶果提取液1，備用；
8)先將占木奶果提取液1 0.3～0.5重量份的聚乙二醇加熱50～60℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.2～0.4重量份的明膠、0.03～0.05重量份的殼聚糖和步驟7)所得的木奶果提取液1攪拌均勻，最后于-5～5℃冷藏1～2d，過(guò)濾除去沉淀，得到木奶果提取液2，備用；
9)將步驟8)所得的木奶果提取液2依次通過(guò)孔徑為0.1～1μm的微濾膜、孔徑為0.01～0.2μm的超濾膜進(jìn)行純化，得到木奶果提取液3，備用；
10)將步驟9)所得的木奶果提取液3通過(guò)聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用20～30％乙醇水溶液、40～60％乙醇水溶液洗柱，收集40～60％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到木奶果提取物。
進(jìn)一步，
步驟2)中，將步驟1)所得的料液保持在溫度45℃，并調(diào)節(jié)pH為5，同時(shí)加入占木奶果果實(shí)干燥后重量0.3％的復(fù)合酶酶解1.5h，其中，復(fù)合酶是由4重量份纖維素酶和3重量份果膠酶混合而成。
進(jìn)一步，
步驟4)中，在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量9倍的85％乙醇攪拌，攪拌12min后用膠體磨研磨50min，并置于超聲頻率45kHz，溫度50℃下進(jìn)行超聲提取，提取18min，過(guò)濾，得到濾液2和濾渣2，備用。
進(jìn)一步，
步驟8)中，先將占木奶果提取液1 0.4重量份的聚乙二醇加熱55℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.3重量份的明膠、0.04重量份的殼聚糖和步驟7)所得的木奶果提取液1攪拌均勻，最后于0℃冷藏1.5d，過(guò)濾除去沉淀，得到木奶果提取液2，備用。
進(jìn)一步，
步驟10)中，將步驟9)所得的木奶果提取液3通過(guò)聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用25％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液洗柱，收集50％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到木奶果提取物。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：
1、本發(fā)明采用膠體磨研磨、纖維素酶和果膠酶酶解技術(shù)、超聲提取技術(shù)、乙醇回流、水提技術(shù)以及濾膜和聚酰胺柱純化技術(shù)等，使木奶果保留許多有效成分如多酚、總糖和揮發(fā)油等，且能提高木奶果有效成分的提取率和效率。其中，多次膠體磨研磨，提高了細(xì)胞破碎率，且粒度均勻，從而提高提取效率；濾膜和聚酰胺柱純化技術(shù)，提高了除雜率，從而提高提取物純化率。
2、本發(fā)明采用整個(gè)木奶果的果實(shí)(包括果皮、果肉、果核)來(lái)提取木奶果，使木奶果提取物的有效成分更加豐富，同時(shí)達(dá)到了合理利用原料的目的，避免浪費(fèi)。
3、本發(fā)明在木奶果提取液中加入聚乙二醇、明膠和殼聚糖，并結(jié)合冷藏處理，減少了木奶果提取物中多酚、總糖和揮發(fā)油等有效成分因氧化、揮發(fā)等因素而導(dǎo)致的損失，同時(shí)，也延長(zhǎng)了木奶果提取物的貯存期。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種木奶果提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)將風(fēng)干的木奶果果實(shí)洗凈、消毒，粉碎成120目，并在60℃條件下干燥18min后，加入木奶果果實(shí)干燥后重量8倍的70％乙醇攪拌，攪拌8min后用膠體磨研磨35min；
2)將步驟1)所得的料液保持在溫度45℃，并調(diào)節(jié)pH為5，同時(shí)加入占木奶果果實(shí)干燥后重量0.3％的復(fù)合酶酶解1.5h，其中，復(fù)合酶是由4重量份纖維素酶和3重量份果膠酶混合而成；
3)將步驟2)所得的酶解液于105℃保持8min滅菌后，置于超聲頻率45kHz，溫度35℃下進(jìn)行超聲提取，提取15min，過(guò)濾，得到濾液1和濾渣1，備用；
4)在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量9倍的85％乙醇攪拌，攪拌12min后用膠體磨研磨50min，并置于超聲頻率45kHz，溫度50℃下進(jìn)行超聲提取，提取18min，過(guò)濾，得到濾液2和濾渣2，備用；
5)在步驟4)所得的濾渣2中加入濾渣2重量9倍的80％乙醇攪拌，攪拌22min后用膠體磨研磨50min，并加熱到85℃，回流提取1.5h，過(guò)濾，得到濾液3和濾渣3，備用；
6)在步驟5)所得的濾渣3中加入濾渣3重量7倍的水?dāng)嚢?，攪?2min后用膠體磨研磨50min，并加熱到95℃，提取50min，過(guò)濾，得到濾液4，備用；
7)合并濾液1、2、3、4，并將濾液置于4500轉(zhuǎn)/min的離心機(jī)上離心8min，過(guò)濾，得到木奶果提取液1，備用；
8)先將占木奶果提取液1 0.4重量份的聚乙二醇加熱55℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.3重量份的明膠、0.04重量份的殼聚糖和步驟7)所得的木奶果提取液1攪拌均勻，最后于0℃冷藏1.5d，過(guò)濾除去沉淀，得到木奶果提取液2，備用；
9)將步驟8)所得的木奶果提取液2依次通過(guò)孔徑為1μm的微濾膜、孔徑為0.2μm的超濾膜進(jìn)行純化，得到木奶果提取液3，備用；
10)將步驟9)所得的木奶果提取液3通過(guò)聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用25％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液洗柱，收集50％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到木奶果提取物。
實(shí)施例2
一種木奶果提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)將風(fēng)干的木奶果果實(shí)洗凈、消毒，粉碎成100目，并在60℃條件下干燥15min后，加入木奶果果實(shí)干燥后重量5倍的60％乙醇攪拌，攪拌5min后用膠體磨研磨30min；
2)將步驟1)所得的料液保持在溫度40℃，并調(diào)節(jié)pH為4，同時(shí)加入占木奶果果實(shí)干燥后重量0.2％的復(fù)合酶酶解1h，其中，復(fù)合酶是由3重量份纖維素酶和2重量份果膠酶混合而成；
3)將步驟2)所得的酶解液于100℃保持6min滅菌后，置于超聲頻率40kHz，溫度30℃下進(jìn)行超聲提取，提取10min，過(guò)濾，得到濾液1和濾渣1，備用；
4)在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量8倍的80％乙醇攪拌，攪拌10min后用膠體磨研磨40min，并置于超聲頻率40kHz，溫度40℃下進(jìn)行超聲提取，提取15min，過(guò)濾，得到濾液2和濾渣2，備用；
5)在步驟4)所得的濾渣2中加入濾渣2重量8倍的70％乙醇攪拌，攪拌20min后用膠體磨研磨40min，并加熱到80℃，回流提取1h，過(guò)濾，得到濾液3和濾渣3，備用；
6)在步驟5)所得的濾渣3中加入濾渣3重量6倍的水?dāng)嚢?，攪?0min后用膠體磨研磨40min，并加熱到90℃，提取40min，過(guò)濾，得到濾液4，備用；
7)合并濾液1、2、3、4，并將濾液置于4000轉(zhuǎn)/min的離心機(jī)上離心5min，過(guò)濾，得到木奶果提取液1，備用；
8)先將占木奶果提取液1 0.3重量份的聚乙二醇加熱50℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.2重量份的明膠、0.03重量份的殼聚糖和步驟7)所得的木奶果提取液1攪拌均勻，最后于-5℃冷藏1d，過(guò)濾除去沉淀，得到木奶果提取液2，備用；
9)將步驟8)所得的木奶果提取液2依次通過(guò)孔徑為0.1μm的微濾膜、孔徑為0.01μm的超濾膜進(jìn)行純化，得到木奶果提取液3，備用；
10)將步驟9)所得的木奶果提取液3通過(guò)聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用20％乙醇水溶液、40％乙醇水溶液洗柱，收集40％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到木奶果提取物。
實(shí)施例3
一種木奶果提取物的制備方法，包括以下步驟：
1)將風(fēng)干的木奶果果實(shí)洗凈、消毒，粉碎成120目，并在60℃條件下干燥20min后，加入木奶果果實(shí)干燥后重量10倍的80％乙醇攪拌，攪拌10min后用膠體磨研磨40min；
2)將步驟1)所得的料液保持在溫度50℃，并調(diào)節(jié)pH為6，同時(shí)加入占木奶果果實(shí)干燥后重量0.4％的復(fù)合酶酶解2h，其中，復(fù)合酶是由5重量份纖維素酶和4重量份果膠酶混合而成；
3)將步驟2)所得的酶解液于110℃保持10min滅菌后，置于超聲頻率50kHz，溫度40℃下進(jìn)行超聲提取，提取20min，過(guò)濾，得到濾液1和濾渣1，備用；
4)在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量10倍的90％乙醇攪拌，攪拌15min后用膠體磨研磨60min，并置于超聲頻率50kHz，溫度60℃下進(jìn)行超聲提取，提取20min，過(guò)濾，得到濾液2和濾渣2，備用；
5)在步驟4)所得的濾渣2中加入濾渣2重量10倍的90％乙醇攪拌，攪拌25min后用膠體磨研磨60min，并加熱到90℃，回流提取2h，過(guò)濾，得到濾液3和濾渣3，備用；
6)在步驟5)所得的濾渣3中加入濾渣3重量8倍的水?dāng)嚢?，攪?5min后用膠體磨研磨60min，并加熱到100℃，提取60min，過(guò)濾，得到濾液4，備用；
7)合并濾液1、2、3、4，并將濾液置于5000轉(zhuǎn)/min的離心機(jī)上離心10min，過(guò)濾，得到木奶果提取液1，備用；
8)先將占木奶果提取液1 0.5重量份的聚乙二醇加熱60℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.4重量份的明膠、0.05重量份的殼聚糖和步驟7)所得的木奶果提取液1攪拌均勻，最后于5℃冷藏2d，過(guò)濾除去沉淀，得到木奶果提取液2，備用；
9)將步驟8)所得的木奶果提取液2依次通過(guò)孔徑為1μm的微濾膜、孔徑為0.2μm的超濾膜進(jìn)行純化，得到木奶果提取液3，備用；
10)將步驟9)所得的木奶果提取液3通過(guò)聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用30％乙醇水溶液、60％乙醇水溶液洗柱，收集60％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到木奶果提取物。
另外，申請(qǐng)人對(duì)實(shí)施例1～3和背景技術(shù)(文獻(xiàn))制備的提取物進(jìn)行多酚、總糖和揮發(fā)油測(cè)定，測(cè)定結(jié)果如表1所示。
表1提取物的多酚、總糖和揮發(fā)油測(cè)定結(jié)果
當(dāng)然，上面只是本發(fā)明優(yōu)選的具體實(shí)施方式作了詳細(xì)描述，并非以此限制本發(fā)明的實(shí)施范圍，凡依本發(fā)明的原理、構(gòu)造以及結(jié)構(gòu)所作的等效變化，均應(yīng)涵蓋于本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。