本發(fā)明涉及吸附劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的吸附劑的制備方法。

背景技術(shù)：

當(dāng)歸，主產(chǎn)于甘肅東南部，其根可入藥，早在數(shù)千年前就已經(jīng)被人們作為滋補、造血、抗炎的良藥，隨著現(xiàn)代植物化學(xué)和藥理學(xué)的不斷發(fā)展，發(fā)現(xiàn)其根的主要活性成分是多糖（Carbohyd. Polym., 2012, 89, 713–722）。研究表明當(dāng)歸多糖具有造血刺激、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗糖尿病等多種生物活性，同時還能起到保護胃腸道和肝臟的作用（Carbohyd. Polym., 2012, 89, 713–722），但是其結(jié)構(gòu)與生物活性的關(guān)系及作用機理尚不明確，為解決這一問題，首先應(yīng)該分離出高純度的當(dāng)歸多糖。

熱水浸提法（Life Sci., 2001, 69, 637–646）、超聲提取法（中國藥業(yè)，2010，19，34–35）、酶提取法（中國藥學(xué)報，2012，40, 96–100）和微波提取法（安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012, 40，16573–16574）是提取當(dāng)歸多糖最常用的方法。但無論是采用哪種方式提取的當(dāng)歸多糖，均會含有蛋白質(zhì)雜質(zhì)，去除粗提物中的蛋白質(zhì)是獲得高純度當(dāng)歸多糖必不可少的步驟。

目前常用的去除當(dāng)歸多糖中蛋白質(zhì)的方法主要有：Sevag法（江西科學(xué)，2007，25，42–46）、三氯乙酸–正丁醇法（江西科學(xué)，2007，25，42–46）反復(fù)凍融法（時珍國醫(yī)國藥，2011，22（2））和澄清劑法（許會生，天津：天津大學(xué)，2007）。其中前兩種方法均要用到有機試劑，三氯乙酸和正丁醇不僅氣味大、毒性大，而且污染環(huán)境。三氯乙酸腐蝕性極強，容易對操作人員造成身體損傷。反復(fù)凍融法在去除蛋白質(zhì)的同時會有部分多糖共沉淀，造成大量多糖的損失。此外，前三種方法需要多次脫蛋白，操作復(fù)雜，能耗和時耗均較大。而對于澄清劑法脫蛋白，殘留的澄清劑為多糖的進一步純化造成負擔(dān)（許會生，天津：天津大學(xué)，2007）。因此，針對當(dāng)歸多糖及其他植物多糖提取物中蛋白質(zhì)的去除，設(shè)計合成耗能低、綠色環(huán)保、簡單快捷的吸附劑有著非常重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種反應(yīng)條件溫和、易于工業(yè)化生產(chǎn)的去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的吸附劑的制備方法。

為解決上述問題，本發(fā)明所述的去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的吸附劑的制備方法，包括以下步驟：

⑴制備介孔硅載體：

將乙烯基三氯硅烷溶于丙酮中，并在氮氣保護下緩慢滴加超純水；然后在氮氣氛圍下磁力攪拌，溶液變深紅褐色，析出白色固體；該白色固體經(jīng)冷卻至室溫后抽濾并用丙酮洗至純白色，再于25~35℃真空干燥至恒重，即得產(chǎn)物八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS；所述乙烯基三氯硅烷與所述丙酮的體積比為10 mL：80~125 mL；所述乙烯基三氯硅烷與所述超純水的體積比為10 mL：25~35 mL；

將所述八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS、四氫呋喃、聚乙二醇200按20：60：20的質(zhì)量比加到可密封的玻璃瓶中，超聲1.0 min使其混合均勻后，按所述八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS質(zhì)量的0.16倍加入自由基聚合引發(fā)劑偶氮二異丁腈，再超聲1.0 min使反應(yīng)物充分混合，通氮氣鼓泡除氧2 min，迅速密封后于58~62℃反應(yīng)24 h，得到半透明晶體材料；所述半透明晶體材料用四氫呋喃索氏提取22~26 h后，于40~60℃干燥至恒重并研成粉末狀，即得介孔硅載體PPOSS；

⑵制備環(huán)氧基功能化的介孔硅材料：

將所述介孔硅載體PPOSS以1 g ：25~35 mL的比例分散于三氯甲烷中，再按每克介孔硅移取0.8~1.2 mL 濃硫酸和15~25 mL的冰乙酸；然后按照每克介孔硅逐滴加入40~50 mL 質(zhì)量分數(shù)為30%的雙氧水，經(jīng)磁力攪拌后冷卻至室溫抽濾，并用超純水洗至中性，于60~80℃干燥至恒重，即得環(huán)氧基修飾的介孔硅材料；

⑶制備絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料：

將2.0~2.8 g 的亞氨基二乙酸溶于100~150 mL 超純水中，按照亞氨基二乙酸和氫氧化鈉的物質(zhì)的量比為2 ：1的比例加入氫氧化鈉，超聲溶解后，加入1.2~1.6 g 所述環(huán)氧基修飾的介孔硅材料，再超聲5 min使其混合均勻，經(jīng)磁力攪拌后冷卻至室溫抽濾，并用超純水洗至中性；于60~80℃干燥至恒重，即得亞氨基二乙酸修飾的介孔硅材料PPOSS-IDA；

將所述亞氨基二乙酸修飾的介孔硅材料PPOSS-IDA按1 g ：80~120 mL 的比例分散于含有100 mmol/L硫酸銅的10 mmol/L 、pH 7.4~8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，室溫下攪拌2.0~3.0 h后抽濾并用超純水洗滌，去除多余的銅離子，于60~80℃干燥至恒重，即得絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料PPOSS-IDA-Cu²⁺。

所述步驟⑴中磁力攪拌的溫度為30~50℃，時間為70~74 h。

所述步驟⑵中磁力攪拌的溫度為65~75℃，時間為7~8 h。

所述步驟⑶中磁力攪拌的溫度為60~70℃，時間為6~8 h。

如上所述的去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的吸附劑的制備方法所制得的絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料PPOSS-IDA-Cu²⁺的應(yīng)用，其特征在于：首先配制采用考馬斯亮藍顯色后吸光度為0.2~0.8的當(dāng)歸多糖溶液；然后測定該當(dāng)歸多糖溶液的蛋白質(zhì)含量；其次，在每毫升所述當(dāng)歸多糖溶液中加入20~30mg的所述絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料PPOSS-IDA-Cu²⁺；最后在室溫下震蕩40~60 min后1650~1750 g離心8~12 min，測定上層清液中的蛋白質(zhì)去除率和多糖損失率即可。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明合成的吸附劑在制備過程中，反應(yīng)條件均在100 ℃以下，較為溫和，適合工業(yè)化批量生產(chǎn)。

2、采用本發(fā)明方法制得的吸附劑進行當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的去除實驗表明，本發(fā)明吸附劑對當(dāng)歸多糖中蛋白質(zhì)的去除高于傳統(tǒng)的Sevag法、澄清劑法和反復(fù)凍融法，同時多糖損失率小與傳統(tǒng)的Sevag法、澄清劑法、反復(fù)凍融法和三氯乙酸法。對于5 mL 10%的當(dāng)歸多糖提取物水溶液，加入100 mg本發(fā)明吸附劑，蛋白質(zhì)一次性去除率可達到80%以上，而多糖損失率小于5%。

3、本發(fā)明所得的吸附劑吸附多糖中蛋白質(zhì)雜質(zhì)后，能通過含有0.20~0.25 g mL^-1尿素和0.4~0.5 g mL^-1咪唑的混合溶液洗脫，達到重復(fù)利用的效果，且吸附試驗表明，經(jīng)過10次重復(fù)利用，蛋白質(zhì)去除率幾乎沒有變化。

4、本發(fā)明所得的吸附劑在去除當(dāng)歸多糖提取物中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)時，只需要將吸附劑加入到當(dāng)歸多糖提取物的水溶液中震蕩40 min即可，操作簡便，耗時短，便于工業(yè)化操作。

5、本發(fā)明所得的吸附劑在去除當(dāng)歸多糖提取物中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)以及吸附劑重復(fù)利用時，未使用到任何有機溶劑，綠色環(huán)保；同時，室溫吸附，條件溫和，能有效地保持多糖活性。

附圖說明

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細的說明。

圖1為本發(fā)明吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺的合成步驟示意圖。

圖2為本發(fā)明材料PPOSS (a)及吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺ (b)的掃描電鏡表征圖。

圖3 為本發(fā)明材料PPOSS (a)及吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺ (b)的紅外譜圖。

圖4 為不同質(zhì)量的本發(fā)明吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺，對當(dāng)歸多糖中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的去除及多糖損失情況。

圖5 為不同吸附時間時，本發(fā)明吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺對當(dāng)歸多糖中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的去除及多糖損失情況。

圖6 為本發(fā)明吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺的重復(fù)利用情況。

具體實施方式

實施例1 如圖1所示，去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的吸附劑的制備方法，包括以下步驟：

⑴制備介孔硅載體：

將10 mL乙烯基三氯硅烷溶于80 mL丙酮中，并在氮氣保護下緩慢滴加25 mL超純水；然后在氮氣氛圍下于30℃磁力攪拌74 h，溶液變深紅褐色，析出白色固體；該白色固體經(jīng)冷卻至室溫后抽濾并用丙酮洗至純白色，再于25℃真空干燥至恒重，即得產(chǎn)物八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS。

將八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS、四氫呋喃、聚乙二醇200按20：60：20的質(zhì)量比（g/g）加到密封的玻璃瓶中，超聲1.0 min使其混合均勻后，按八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS質(zhì)量的0.16倍加入自由基聚合引發(fā)劑偶氮二異丁腈，再超聲1.0 min使反應(yīng)物充分混合，通氮氣鼓泡除氧2 min，迅速密封后于58℃反應(yīng)24 h，得到半透明晶體材料；半透明晶體材料用四氫呋喃索氏提取22 h后，于40℃干燥至恒重并研成粉末狀，即得介孔硅載體PPOSS。

⑵制備環(huán)氧基功能化的介孔硅材料：

將介孔硅載體PPOSS以1 g ：25 mL的比例分散于三氯甲烷中，再按每克介孔硅移取0.8 mL 濃硫酸和15 mL的冰乙酸；然后按照每克介孔硅逐滴加入40 mL 質(zhì)量分數(shù)為30%的雙氧水，于65℃磁力攪拌8 h后冷卻至室溫抽濾，并用超純水洗至中性，于60℃干燥至恒重，即得環(huán)氧基修飾的介孔硅材料。

⑶制備絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料：

將2.0 g 的亞氨基二乙酸溶于100 mL 超純水中，按照亞氨基二乙酸和氫氧化鈉的物質(zhì)的量比為2 ：1的比例加入氫氧化鈉，超聲溶解后，加入1.2 g 環(huán)氧基修飾的介孔硅材料，再超聲5 min使其混合均勻，于60℃磁力攪拌8 h后冷卻至室溫抽濾，并用超純水洗至中性；于60℃干燥至恒重，即得亞氨基二乙酸修飾的介孔硅材料PPOSS-IDA。

將亞氨基二乙酸修飾的介孔硅材料PPOSS-IDA按1 g ：80 mL 的比例分散于含有100 mmol/L硫酸銅的10 mmol/L 、pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，室溫下攪拌2.0 h后抽濾并用超純水洗滌，去除多余的銅離子，于60℃干燥至恒重，即得絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料PPOSS-IDA-Cu²⁺。

實施例2 如圖1所示，去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的吸附劑的制備方法，包括以下步驟：

⑴制備介孔硅載體：

將10 mL乙烯基三氯硅烷溶于125 mL丙酮中，并在氮氣保護下緩慢滴加35 mL超純水；然后在氮氣氛圍下于50℃磁力攪拌70 h，溶液變深紅褐色，析出白色固體；該白色固體經(jīng)冷卻至室溫后抽濾并用丙酮洗至純白色，再于35℃真空干燥至恒重，即得產(chǎn)物八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS。

將八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS、四氫呋喃、聚乙二醇200按20：60：20的質(zhì)量比（g/g）加到密封的玻璃瓶中，超聲1.0 min使其混合均勻后，按八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS質(zhì)量的0.16倍加入自由基聚合引發(fā)劑偶氮二異丁腈，再超聲1.0 min使反應(yīng)物充分混合，通氮氣鼓泡除氧2 min，迅速密封后于62℃反應(yīng)24 h，得到半透明晶體材料；半透明晶體材料用四氫呋喃索氏提取26 h后，于60℃干燥至恒重并研成粉末狀，即得介孔硅載體PPOSS。

⑵制備環(huán)氧基功能化的介孔硅材料：

將介孔硅載體PPOSS以1 g ：35 mL的比例分散于三氯甲烷中，再按每克介孔硅移取1.2 mL 濃硫酸和25 mL的冰乙酸；然后按照每克介孔硅逐滴加入50 mL 質(zhì)量分數(shù)為30%的雙氧水，于75℃磁力攪拌7 h后冷卻至室溫抽濾，并用超純水洗至中性，于80℃干燥至恒重，即得環(huán)氧基修飾的介孔硅材料。

⑶制備絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料：

將2.8 g 的亞氨基二乙酸溶于150 mL 超純水中，按照亞氨基二乙酸和氫氧化鈉的物質(zhì)的量比為2 ：1的比例加入氫氧化鈉，超聲溶解后，加入1.6 g 環(huán)氧基修飾的介孔硅材料，再超聲5 min使其混合均勻，于70℃磁力攪拌6h后冷卻至室溫抽濾，并用超純水洗至中性；于80℃干燥至恒重，即得亞氨基二乙酸修飾的介孔硅材料PPOSS-IDA。

將亞氨基二乙酸修飾的介孔硅材料PPOSS-IDA按1 g ：120 mL 的比例分散于含有100 mmol/L硫酸銅的10 mmol/L 、pH 8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，室溫下攪拌3.0 h后抽濾并用超純水洗滌，去除多余的銅離子，于80℃干燥至恒重，即得絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料PPOSS-IDA-Cu²⁺。

實施例3 如圖1所示，去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的吸附劑的制備方法，包括以下步驟：

⑴制備介孔硅載體：

將10 mL乙烯基三氯硅烷溶于100 mL丙酮中，并在氮氣保護下緩慢滴加30 mL超純水；然后在氮氣氛圍下于40℃磁力攪拌72 h，溶液變深紅褐色，析出白色固體；該白色固體經(jīng)冷卻至室溫后抽濾并用丙酮洗至純白色，再于30℃真空干燥至恒重，即得產(chǎn)物八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS。

將八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS、四氫呋喃、聚乙二醇200按20：60：20的質(zhì)量比（g/g）加到密封的玻璃瓶中，超聲1.0 min使其混合均勻后，按八乙烯基多面體低聚倍半硅氧烷ovPOSS質(zhì)量的0.16倍加入自由基聚合引發(fā)劑偶氮二異丁腈，再超聲1.0 min使反應(yīng)物充分混合，通氮氣鼓泡除氧2 min，迅速密封后于60℃反應(yīng)24 h，得到半透明晶體材料；半透明晶體材料用四氫呋喃索氏提取24 h后，于50℃干燥至恒重并研成粉末狀，即得介孔硅載體PPOSS。

⑵制備環(huán)氧基功能化的介孔硅材料：

將介孔硅載體PPOSS以1 g ：30 mL的比例分散于三氯甲烷中，再按每克介孔硅移取1.0 mL 濃硫酸和20 mL的冰乙酸；然后按照每克介孔硅逐滴加入45 mL 質(zhì)量分數(shù)為30%的雙氧水，于70℃磁力攪拌7.5 h后冷卻至室溫抽濾，并用超純水洗至中性，于70℃干燥至恒重，即得環(huán)氧基修飾的介孔硅材料。

⑶制備絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料：

將2.4 g 的亞氨基二乙酸溶于125 mL 超純水中，按照亞氨基二乙酸和氫氧化鈉的物質(zhì)的量比為2 ：1的比例加入氫氧化鈉，超聲溶解后，加入1.4 g 環(huán)氧基修飾的介孔硅材料，再超聲5 min使其混合均勻，于65℃磁力攪拌7 h后冷卻至室溫抽濾，并用超純水洗至中性；于70℃干燥至恒重，即得亞氨基二乙酸修飾的介孔硅材料PPOSS-IDA。

將亞氨基二乙酸修飾的介孔硅材料PPOSS-IDA按1 g ：100 mL 的比例分散于含有100 mmol/L硫酸銅的10 mmol/L 、pH 7.7的磷酸鹽緩沖溶液中，室溫下攪拌2.5 h后抽濾并用超純水洗滌，去除多余的銅離子，于70℃干燥至恒重，即得絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料PPOSS-IDA-Cu²⁺。

如圖2 (a)和(b)所示，由熱引發(fā)OvPOSS自由基聚合生成的PPOSS材料的掃描電鏡表明材料表面凹凸不平，呈現(xiàn)多孔狀，修飾后得到的吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺的結(jié)構(gòu)與載體PPOSS的形貌相似，基本維持載體PPOSS的形貌。表 1顯示載體PPOSS經(jīng)后修飾，平均孔徑由4.28 nm增大到6.79 nm，比表面積由738 m² g^-1變?yōu)?08 m² g^-1。

表 1本發(fā)明材料PPOSS及吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺的氮吸附分析數(shù)據(jù)

圖3是材料PPOSS和PPOSS-IDA-Cu²⁺的紅外譜圖。修飾前后均能明顯觀察到1121、774 cm^-1附近Si-O-Si特征峰；對比發(fā)現(xiàn)1630 cm^-1處C=C的伸縮振動峰明顯減弱，表明材料的雙鍵參與了反應(yīng)；1724 cm^-1附近的峰是載體PPOSS經(jīng)亞氨基二乙酸與環(huán)氧基開環(huán)反應(yīng)后引入羧基的C=O產(chǎn)生的伸縮振動峰。

此外，原子吸收法測定的材料絡(luò)合銅離子的量為70.56 mg/g，進一步表明材料的成功修飾，絡(luò)合上的大量銅離子，有助于提高材料對蛋白質(zhì)雜質(zhì)的去除率。

實施例4 對吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的條件進行優(yōu)化，確定了材料用量和吸附時間。

a) 首先考察吸附劑的用量對當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)雜質(zhì)去除率和多糖損失率的影響：將市場上銷售的10%的當(dāng)歸多糖提取物配成20 mg mL^-1的水溶液（為確保準確度，所配的當(dāng)歸多糖溶液用考馬斯亮藍顯色后吸光度應(yīng)在0.2~0.8），在1698 g離心10 min，除去多糖中的不溶物。分別稱取10 mg、20 mg、40 mg、60 mg、80 mg、100 mg和120 mg的吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺于可密封的容器中，并各加入5 mL配好的當(dāng)歸多糖水溶液。室溫下震蕩240 min后1698 g離心10 min，測定上層清液中的蛋白質(zhì)去除率和多糖損失率，具體測定方法如下：

當(dāng)歸多糖中多糖含量的測定采用苯酚-硫酸法：1 mL的稀釋合適倍數(shù)后的待測溶液（使得吸光度在0.2~0.8）置于25 mL的玻璃管中，加入1 mL 5%的苯酚水溶液，然后快速加入5 mL的濃硫酸（與液面垂直加入，并避免接觸管壁），室溫靜置10 min后，震蕩使充分反應(yīng)，并置于30 ℃的水浴中20 min。測定其在490 nm處的吸光度。

當(dāng)歸多糖中蛋白質(zhì)含量的測定采用考馬斯亮藍法：0.5 mL的待測樣品加入到2.5 mL考馬斯亮藍溶液（100 mg的考馬斯亮藍G-250溶于50 mL 95%的乙醇和100 mL的磷酸（85%）中，用超純水定容至1000 mL并過濾即得）中，并在5~20 min內(nèi)測定其在595 nm處的吸光度。

蛋白質(zhì)去除率(%) =

多糖損失率(%) =

其中A₀和B₀分別為未經(jīng)吸附劑處理的當(dāng)歸多糖溶液中測定的蛋白質(zhì)和多糖含量的吸光度；A和B分別為經(jīng)吸附劑處理后的當(dāng)歸多糖溶液中測定的蛋白質(zhì)和多糖含量的吸光度。

如圖4所示，當(dāng)吸附劑的質(zhì)量小于100 mg時，隨著吸附劑質(zhì)量的增加，蛋白質(zhì)去除率不斷增大，而120 mg吸附劑的去除率與100 mg的一樣，可見已經(jīng)達到吸附飽和。而對于多糖而言，隨吸附劑量的增加，多糖損失率變化不大，均在5%以下，因此采用100 mg進行接下來的試驗。

b) 吸附時間對蛋白質(zhì)去除率和多糖損失率的影響：將市場上銷售的10%的當(dāng)歸多糖提取物配成20 mg mL^-1的水溶液（為確保準確度，所配的當(dāng)歸多糖溶液用考馬斯亮藍顯色后吸光度應(yīng)在0.2~0.8），在1698 g離心10 min，除去多糖中的不溶物。稱取100 mg吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺于可密封的容器中，并加入5 mL配好的當(dāng)歸多糖水溶液。密封后，在室溫下震蕩不同時間后1698 g離心10 min，測定上層清液中的蛋白質(zhì)去除率和多糖損失率，具體測定方法同a)。

如圖5所示，前40 min蛋白質(zhì)去除率不斷增大，之后基本上保持不變，達到了吸附平衡。圖5顯示，多糖損失率隨時間幾乎沒有變化，并且均保持在5%以下。在節(jié)省時間且保證效率的情況下，我們選用40 min進行下面的試驗。

綜合考慮，隨材料用量增大和吸附時間的延長，蛋白質(zhì)去除率不斷增大，直至達到平衡，而多糖損失情況基本沒有變化，且保持在5%以下，可見本發(fā)明吸附劑能用于當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的去除，且多糖損失率低，而實際應(yīng)用時，應(yīng)根據(jù)提取物中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的含量選擇合適的吸附劑用量，以保證在蛋白質(zhì)雜質(zhì)充分去除的情況下，盡量的節(jié)約資源。

實施例5 實施例1~3中所制得的絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料PPOSS-IDA-Cu²⁺的應(yīng)用是指：首先配制采用考馬斯亮藍顯色后吸光度為0.2~0.8的當(dāng)歸多糖溶液；然后測定該當(dāng)歸多糖溶液的蛋白質(zhì)含量；其次，在每毫升當(dāng)歸多糖溶液中加入20~30mg的絡(luò)合了銅離子的功能化介孔硅材料PPOSS-IDA-Cu²⁺；最后在室溫下震蕩40~60 min后1650~1750 g離心8~12 min，測定上層清液中的蛋白質(zhì)去除率和多糖損失率即可。

實施例6 為驗證本發(fā)明吸附劑能用于工業(yè)化大批量當(dāng)歸中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的去除，將實施例4擴大了10倍：

市場上銷售的10%的當(dāng)歸多糖提取物配成20 mg mL^-1的水溶液（為確保準確度，所配的當(dāng)歸多糖溶液用考馬斯亮藍顯色后吸光度應(yīng)在0.2~0.8），在1698 g離心10 min，除去多糖中的不溶物。稱取1.0 g吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺于塑料杯中，并加入50 mL配好的當(dāng)歸多糖水溶液。在室溫下震蕩40 min后1698 g離心10 min，測定上層清液中的蛋白質(zhì)去除率和多糖損失率，具體測定方法同實施例4。

三次試驗結(jié)果表明，蛋白質(zhì)雜質(zhì)的平均去除率為81.58%，標準偏差小于3%，多糖平均損失率為4.94%，標準偏差小于1%，可見本發(fā)明吸附劑能用于工業(yè)化大批量去除當(dāng)歸多糖提取物中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)。

此外，申請人比較了本發(fā)明吸附劑和傳統(tǒng)的去除當(dāng)歸多糖提取物中蛋白質(zhì)的方法（見表2）。本發(fā)明吸附劑對當(dāng)歸多糖中蛋白質(zhì)的去除高于傳統(tǒng)的Sevag法、澄清劑法和反復(fù)凍融法，同時多糖損失率小與傳統(tǒng)的Sevag法、澄清劑法、反復(fù)凍融法和三氯乙酸法，占有絕對優(yōu)勢。

表2本發(fā)明吸附劑與傳統(tǒng)的去除當(dāng)歸多糖提取物中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)方法的比較

實施例7 吸附劑PPOSS-IDA-Cu²⁺的重復(fù)利用研究：

將吸附了蛋白質(zhì)雜質(zhì)的材料用含有0.2 g mL^-1尿素和0.4 g mL^-1咪唑的混合溶液抽濾洗滌，直至上清液無色后用超純水洗去殘余的尿素和咪唑，并分散于含有100 mmol/L硫酸銅的10 mmol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液中，室溫攪拌2.0 h，抽濾并用超純水洗滌，去除多余的銅離子，在溫度為65 ℃的真空干燥箱中干燥至恒重，再進行第二次吸附實驗，如此重復(fù)10次。

如圖6所示，經(jīng)過10次重復(fù)利用后吸附劑對蛋白質(zhì)的去除率仍在80%左右，多糖損失率保持在5%以下，可見本發(fā)明吸附劑能夠通過簡單的洗滌，無需使用任何有機溶劑，就能達到較好的重復(fù)利用效果，綠色環(huán)保。