本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，尤其涉及一種醫(yī)用臨床免疫分析用的分子印跡聚合物微球的制備方法。

背景技術(shù)：

隨著生物、醫(yī)藥、化工等行業(yè)的快速發(fā)展，對(duì)原料及產(chǎn)物純度的要求也越來越高，因此對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離純化顯得十分必要。然而現(xiàn)有的分離方法工藝復(fù)雜、成本較高，分子印跡技術(shù)為此提供了一條全新的有效途徑，它是在分子識(shí)別，接受體設(shè)計(jì)，超分子弱相互作用，產(chǎn)物的鑒別和分離等理論與實(shí)際需要的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型分離純化技術(shù)，基于該技術(shù)制備的分子印跡聚合物具有很強(qiáng)的抗惡劣環(huán)境能力、物理化學(xué)穩(wěn)定性好、使用壽命長(zhǎng)，其特有的空間立體結(jié)構(gòu)可在分子水平上對(duì)物質(zhì)進(jìn)行選擇性的識(shí)別和分離，在臨床醫(yī)學(xué)行業(yè)具有非常樂觀的應(yīng)用前景。

然而現(xiàn)有的分子印跡聚合物材料大多由本體聚合法制得，產(chǎn)物為塊狀，經(jīng)研磨篩分方可使用，這種方法不僅后續(xù)處理工作繁瑣，產(chǎn)物形狀不規(guī)則，且研磨過程會(huì)導(dǎo)致部分結(jié)合基團(tuán)遭到破壞，從而使其選擇性能下降。相比之下，直接在聚合過程中得到的微球形分子印跡聚合物具有吸附選擇性高，單分散性好、粒徑分布均勻、便于功能設(shè)計(jì)等優(yōu)點(diǎn)，目前已在色譜分離、酶模擬及生物模擬傳感器等領(lǐng)域獲得了應(yīng)用，同時(shí)在低濃度分析物的富集、反應(yīng)過程平衡轉(zhuǎn)移的控制和組合化學(xué)庫(kù)的放映技術(shù)等方面也取得了一定進(jìn)展。

專利號(hào)為cn101591412b的專利提出了一種氯霉素分子印跡聚合物微球的制備方法，具體是：1、將甲基丙烯酸與氯霉素溶于乙腈中震蕩后再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二異丁腈，得到混合物，將混合物超聲處理，再充氮?dú)獬鹾竺芊猓?、將密封后的混合物加熱聚合數(shù)小時(shí)后冷卻、離心，再將沉淀物自然干燥；3、將沉淀物脫除去氯霉素，再用甲醇洗滌5h、干燥，即得氯霉素分子印跡聚合物微球。采用本發(fā)明方法得到的氯霉素分子印跡聚合物微球的顆粒形狀規(guī)則，大小均一，沒有團(tuán)聚現(xiàn)象，增加了氯霉素分子印跡聚合物微球的比表面。主要解決了采用采用傳統(tǒng)方法制得的分子印跡聚合物顆粒不規(guī)則、容易團(tuán)聚的問題。但是在使用該方法制備分子印跡聚合物微球仍然無法解決團(tuán)聚現(xiàn)象，分子印跡聚合物微球的吸附性無法保證，實(shí)際應(yīng)用價(jià)值值得懷疑。

專利號(hào)為cn104371131a的專利提出了一種有親水性高分子刷的分子印跡聚合物微球的制備方法，通過表面含c＝c雙鍵的分子印跡聚合物微球與親水性大分子鏈轉(zhuǎn)移劑在普通自由基引發(fā)劑存在條件下進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)反應(yīng)制得的。合成方法簡(jiǎn)單、適用范圍廣、產(chǎn)品結(jié)構(gòu)明確。所得表面具有親水性高分子刷的分子印跡聚合物微球在醫(yī)學(xué)臨床免疫分析、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)、生物技術(shù)等眾多領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。但是采用該方法制備分子印跡聚合物微球，所使用的原料比較稀缺昂貴，成本過高，不利于大規(guī)模推廣應(yīng)用，難以普及。

本申請(qǐng)人在本發(fā)明中提出了一種醫(yī)用臨床免疫分析用的分子印跡聚合物微球的制備方法，用以解決上述問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明的目的就是提供一種醫(yī)用臨床免疫分析用的分子印跡聚合物微球的制備方法，制得顆粒形狀規(guī)則，大小均一，直徑小的分子印跡聚合物微球。通過本方法制備的分子印跡聚合物微球表面附有大量羥基，可應(yīng)用于水相處理過程，具有較大的吸附容量和選擇性。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

一種醫(yī)用臨床免疫分析用的分子印跡聚合物微球的制備方法，以氯甲基聚苯乙烯球?yàn)檩d體，在其表面修飾引發(fā)轉(zhuǎn)移終止劑二乙基二硫代氨基甲酸鈉，以三氯生為模板分子，4-乙烯吡啶為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，采用光引發(fā)聚合制備三氯生分子印跡聚合物微球；

具體包括以下步驟：

s1、引發(fā)轉(zhuǎn)移終止劑二乙基二硫代氨基甲酸鈉修飾聚苯乙烯球：

將氯甲基聚苯乙烯球載體超聲分散于乙醇中，緩慢滴加二乙基二硫代氨基甲酸鈉乙醇溶液，反應(yīng)后將所得產(chǎn)物進(jìn)行清洗，真空干燥，得到表面接枝修飾的聚苯乙烯球；

s2、光引發(fā)聚合制備三氯生分子印跡聚合物微球：

1)將三氯生、4-乙烯吡啶、乙二醇二甲基丙烯酸酯充分溶解于磷酸緩沖溶液中，預(yù)聚10-12小時(shí)；

2)將上述的預(yù)聚反應(yīng)物中加入s1中制備好的二乙基二硫代氨基甲酸鈉修飾的聚苯乙烯微球，經(jīng)超聲脫氣后密封，在室溫下以紫外光照聚合10-12小時(shí)，制備得到的產(chǎn)物經(jīng)除去模板分子及未反應(yīng)的試劑，然后加入聚苯乙烯微球、交聯(lián)劑、引發(fā)劑和分散介質(zhì)，使其發(fā)生聚合反應(yīng)得到聚合物微球；

s3、以4-氯甲基苯基三氯硅烷對(duì)聚合物微球進(jìn)行表面改性，得到-cl修飾的聚合物微球；

s4、聚合物微球表面功能化：

將聚合物微球分散于醋酸水溶液中，加入kh550，于50-70℃下反應(yīng)4-6h，磁分離產(chǎn)物，用蒸餾水洗滌，得表面功能化的磁性復(fù)合微球；

s5、分子印跡聚合物微球的制備：

取α-甲基丙烯酸溶于乙醇中，室溫下振蕩，使物料溶解完全，然后加入乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二異丁腈和表面功能化的磁性復(fù)合微球，氮?dú)獗Ｗo(hù)，機(jī)械攪拌于50-70℃水浴反應(yīng)10-30h；反應(yīng)結(jié)束后，磁分離產(chǎn)物，洗滌，干燥，即得分子印跡聚合物微球。

優(yōu)選地，步驟s1中反應(yīng)條件為反應(yīng)溫度35-45℃，反應(yīng)時(shí)間6-10小時(shí)；采用乙醇和丙酮分別多次清洗產(chǎn)物，在40-45℃下真空干燥6-10小時(shí)。

優(yōu)選地，步驟s2中超聲脫氣條件為35-40℃下10-20min。

優(yōu)選地，步驟s2中脫除模板分子及未反應(yīng)的試劑的方法為采用10v：v％的乙酸、10wt：wt％十二烷基硫酸鈉和ph為5.4的0.01mol/l磷酸緩沖溶液反復(fù)振蕩洗滌，在40-45℃下真空干燥6-10小時(shí)。

優(yōu)選地，步驟s2中交聯(lián)劑為聚三甲基丙烯酸丙三醇酯，引發(fā)劑為偶氮二異丁腈，分散介質(zhì)為水。

優(yōu)選地，步驟s2中的聚合反應(yīng)是在索氏提取器中進(jìn)行的。

優(yōu)選地，步驟s3中4-氯甲基苯基三氯硅烷的制備方法為：將4-氯甲基苯基三氯硅烷溶解于無水二甲基甲酰胺中，加入過量nah，磁力攪拌0.5-1.5h后過濾除去過量的nah；在磁力攪拌下逐滴加入γ-丙基三甲氧基硅烷，在80℃下反應(yīng)10-14h；反應(yīng)結(jié)束，洗滌沉淀物后真空干燥10-14h。

優(yōu)選地，步驟s4中醋酸水溶液的質(zhì)量濃度為8-15％。

優(yōu)選地，步驟s5中α-甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二異丁腈的摩爾比為2：7：0.3。

優(yōu)選地，步驟s5中水浴反應(yīng)為密閉反應(yīng)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

1、采用本發(fā)明方法得到的分子印跡聚合物微球的顆粒形狀規(guī)則，大小均一，直徑小，沒有團(tuán)聚現(xiàn)象，增加了氯霉素分子印跡聚合物微球的比表面積，可實(shí)現(xiàn)聚苯乙烯微球的特異性分離，從而提高了氯霉素分子印跡聚合物微球的吸附性和選擇性；在生物醫(yī)藥及臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用前景。

2、本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，原料廉價(jià)易得，成本低廉。

3、本發(fā)明選擇具有超順磁性的鐵酸鎳作為磁性納米微粒，制備過程簡(jiǎn)單，不需要高溫煅燒，能耗低。

具體實(shí)施方式

下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。

實(shí)施例一

一種醫(yī)用臨床免疫分析用的分子印跡聚合物微球的制備方法，以氯甲基聚苯乙烯球?yàn)檩d體，在其表面修飾引發(fā)轉(zhuǎn)移終止劑二乙基二硫代氨基甲酸鈉，以三氯生為模板分子，4-乙烯吡啶為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，采用光引發(fā)聚合制備三氯生分子印跡聚合物微球；

具體包括以下步驟：

s1、引發(fā)轉(zhuǎn)移終止劑二乙基二硫代氨基甲酸鈉修飾聚苯乙烯球：

將氯甲基聚苯乙烯球載體超聲分散于乙醇中，緩慢滴加二乙基二硫代氨基甲酸鈉乙醇溶液，反應(yīng)后將所得產(chǎn)物進(jìn)行清洗，真空干燥，得到表面接枝修飾的聚苯乙烯球；

s2、光引發(fā)聚合制備三氯生分子印跡聚合物微球：

1)將三氯生、4-乙烯吡啶、乙二醇二甲基丙烯酸酯充分溶解于磷酸緩沖溶液中，預(yù)聚10-12小時(shí)；

2)將上述的預(yù)聚反應(yīng)物中加入s1中制備好的二乙基二硫代氨基甲酸鈉修飾的聚苯乙烯微球，經(jīng)超聲脫氣后密封，在室溫下以紫外光照聚合10-12小時(shí)，制備得到的產(chǎn)物經(jīng)除去模板分子及未反應(yīng)的試劑，然后加入聚苯乙烯微球、交聯(lián)劑、引發(fā)劑和分散介質(zhì)，使其發(fā)生聚合反應(yīng)得到聚合物微球；

s3、以4-氯甲基苯基三氯硅烷對(duì)聚合物微球進(jìn)行表面改性，得到-cl修飾的聚合物微球；

s4、聚合物微球表面功能化：

將聚合物微球分散于醋酸水溶液中，加入kh550，于50-70℃下反應(yīng)4-6h，磁分離產(chǎn)物，用蒸餾水洗滌，得表面功能化的磁性復(fù)合微球；

s5、分子印跡聚合物微球的制備：

取α-甲基丙烯酸溶于乙醇中，室溫下振蕩，使物料溶解完全，然后加入乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二異丁腈和表面功能化的磁性復(fù)合微球，氮?dú)獗Ｗo(hù)，機(jī)械攪拌于50-70℃水浴反應(yīng)10-30h；反應(yīng)結(jié)束后，磁分離產(chǎn)物，洗滌，干燥，即得分子印跡聚合物微球。

采用本發(fā)明方法得到的分子印跡聚合物微球的顆粒形狀規(guī)則，大小均一，直徑小，沒有團(tuán)聚現(xiàn)象，增加了氯霉素分子印跡聚合物微球的比表面積，可實(shí)現(xiàn)聚苯乙烯微球的特異性分離，從而提高了氯霉素分子印跡聚合物微球的吸附性。

優(yōu)選地，步驟s1中反應(yīng)條件為反應(yīng)溫度35-45℃，反應(yīng)時(shí)間6-10小時(shí)；采用乙醇和丙酮分別多次清洗產(chǎn)物，在40-45℃下真空干燥6-10小時(shí)。

優(yōu)選地，步驟s2中超聲脫氣條件為35-40℃下10-20min。

優(yōu)選地，步驟s2中脫除模板分子及未反應(yīng)的試劑的方法為采用10v：v％的乙酸、10wt：wt％十二烷基硫酸鈉和ph為5.4的0.01mol/l磷酸緩沖溶液反復(fù)振蕩洗滌，在40-45℃下真空干燥6-10小時(shí)。

優(yōu)選地，步驟s2中交聯(lián)劑為聚三甲基丙烯酸丙三醇酯，引發(fā)劑為偶氮二異丁腈，分散介質(zhì)為水。

優(yōu)選地，步驟s2中的聚合反應(yīng)是在索氏提取器中進(jìn)行的。

優(yōu)選地，步驟s4中醋酸水溶液的質(zhì)量濃度為8-15％。

優(yōu)選地，步驟s5中α-甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二異丁腈的摩爾比為2：7：0.3。

優(yōu)選地，步驟s5中水浴反應(yīng)為密閉反應(yīng)。

實(shí)施例二

一種醫(yī)用臨床免疫分析用的分子印跡聚合物微球的制備方法，其步驟s3中4-氯甲基苯基三氯硅烷的制備方法為：將4-氯甲基苯基三氯硅烷溶解于無水二甲基甲酰胺中，加入過量nah，磁力攪拌0.5-1.5h后過濾除去過量的nah；在磁力攪拌下逐滴加入γ-丙基三甲氧基硅烷，在80℃下反應(yīng)10-14h；反應(yīng)結(jié)束，洗滌沉淀物后真空干燥10-14h。

采用兩個(gè)功能單體，與模板分子協(xié)同作用，大大增加聚合物微球表面分子印跡聚合物對(duì)模板分子的吸附量以及特異性識(shí)別功能。其中至少一個(gè)功能單體包括親水和疏水結(jié)構(gòu)，使得制備出的聚合物微球可應(yīng)用于水相處理過程，并具有較大的吸附容量和較高的選擇性。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。