溫度為60°C下干燥24小時，制得頂P晶體產(chǎn)品。如圖2所示。
[0038] 所得IMP產(chǎn)品在Malvern Mastersizer 2000中測得晶體平均粒徑為164. 4 μ m， 標準方差為±85. 9 μπι。與直接反溶劑結(jié)晶方法（如對比例2所述）所得產(chǎn)品（如圖3所 示，晶體平均粒徑為113. 6 μ m，標準方差為±119. 7 μ m)對比可知：按本發(fā)明方法實施所得 頂P產(chǎn)品的平均粒徑增加了約51 μπι，標準方差減小約34μπι，由此表明本發(fā)明方法能獲得 晶粒尺寸更大、分布更均勻的結(jié)晶產(chǎn)品。
[0039] 實施例3
[0040] 稱取20g 5 ^ -呈味核苷酸二鈉（I+G)，量取200mL水，二者充分混合后加入到結(jié)晶 釜中，水浴升溫至60°C，300r/min的攪拌速度下攪拌使得I+G充分溶解。以3mL/min的添加 速率加入反溶劑無水乙醇300mL，溶液中有晶體析出，充分攪拌lOmin，以便晶體充分生長。 降低體系壓力至40 - 50kPa，揮發(fā)液體體積為30mL，充分攪拌5min，以便晶體小顆粒的充 分溶解。降溫至50°C，降低體系壓力至30 - 40kPa，揮發(fā)液體體積為10mL，充分攪拌5min， 以便晶體小顆粒的充分溶解。在布氏漏斗中減壓抽濾獲得I+G晶體，加入30mL無水乙醇洗 滌，在絕對壓力為40kPa、溫度為60°C下干燥24小時，制得I+G晶體產(chǎn)品。
[0041 ] 在Malvern Mastersizer 2000中測得采用反溶劑-真空蒸發(fā)-冷卻（或反溶劑） 制得的I+G晶體平均粒徑及標準方差為99. 4±44. 9 μπι。
[0042] 對比例1
[0043] 稱取20g甘氨酸，量取90mL 7Κ，二者充分混合后加入到結(jié)晶釜中，水浴升溫至 60°C、300r/min的攪拌速度下攪拌使甘氨酸充分溶解。以3mL/min的添加速率加入反溶劑 無水乙醇270mL，然后在布氏漏斗中減壓抽濾獲得甘氨酸晶體，加入30mL無水乙醇洗滌，在 絕對壓力為40kPa、溫度為60°C下干燥24小時，制得甘氨酸晶體產(chǎn)品。
[0044] 在與實施例1相同的儀器上，采用相同的放大倍率觀測甘氨酸晶體產(chǎn)品的形貌， 如圖5所示。對比實施例1產(chǎn)品，對比例產(chǎn)品的晶粒尺寸較小，而且晶粒間尺寸差異較大。 對比例1所得產(chǎn)品尺寸在Malvern Mastersizer 2000中測得為243. 1± 101. 3 μ m〇
[0045] 對比例2
[0046] 稱取20g頂P，量取190mL水，二者充分混合后加入到結(jié)晶釜中，水浴升溫至60°C、 300r/min的攪拌速度下攪拌使頂P充分溶解。以3mL/min的添加速率加入反溶劑無水乙醇 270mL，然后在布氏漏斗中減壓抽濾獲得頂P晶體，加入30mL無水乙醇洗滌，在絕對壓力為 40kPa、溫度為60°C下干燥24小時，制得頂P晶體產(chǎn)品。
[0047] 對比例2所得產(chǎn)品尺寸在Malvern Mastersizer 2000中測得為 113. 6±119· 7 μπι〇
[0048] 對比例3
[0049] 稱取20g I+G，量取190mL水，二者充分混合后加入到結(jié)晶釜中，水浴升溫至60°C、 300r/min的攪拌速度下攪拌使I+G充分溶解。以3mL/min的添加速率加入反溶劑無水乙醇 270mL，然后在布氏漏斗中減壓抽濾獲得I+G晶體，加入30mL無水乙醇洗滌，在絕對壓力為 40kPa、溫度為60°C下干燥24小時，制得I+G晶體產(chǎn)品。
[0050] 對比例3所得產(chǎn)品尺寸在Malvern Mastersizer 2000中測得為57. 9±60· 4。
[0051] 實施例1 - 3所得結(jié)晶產(chǎn)品分別與對比例1 - 3結(jié)晶產(chǎn)品進行比較，實施例1對應(yīng) 對比例1，實施例2對應(yīng)對比例2,實施例3對應(yīng)對比例3,見表1。由表1可知，實施例1 -3 均為真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑循環(huán)用于反溶劑結(jié)晶，對比例1 - 3均為直接加入反溶劑結(jié) 晶。實施例1 - 3中甘氨酸、頂P和I+G的平均粒徑均顯著大于對比例1 - 3,而實施例1 - 3 中標準差均小于對比例1 - 4,由此表明實施例比對比例的產(chǎn)品粒度更大、尺寸分布更均勻。 故此采用本發(fā)明方法能顯著增大結(jié)晶產(chǎn)品粒徑、減少粒度分布不均，從而得到質(zhì)量較好的 結(jié)晶廣品。
[0052] 表1實施例與對比例效果對比
[0054] 表1為真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑循環(huán)用于反溶劑結(jié)晶對比直接反溶劑加入結(jié)晶。 從表1可以看出，當反溶劑相對溶劑沸點較低時，采用真空蒸發(fā)可使結(jié)晶液相體系中的溶 劑濃度增加，從而促進溶質(zhì)溶解。由于晶體小顆粒具有較大的比表面積而先溶解，進而通過 降溫或者繼續(xù)添加反溶劑獲得大尺寸晶體，由此實現(xiàn)晶體小顆粒的減少、大顆粒的增加。通 過真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑循環(huán)操作，實現(xiàn)對晶體小顆粒的溶解以及晶體生長的控制，最終 獲得粒徑大、分布窄的結(jié)晶產(chǎn)品。
[0055] 晶體粒度及其分布是結(jié)晶產(chǎn)品的關(guān)鍵指標，在反溶劑結(jié)晶過程中，反溶劑加入和 混合過程中，極易因局部混合不均勻引發(fā)爆發(fā)成核，從而造成晶體粒度小且分布寬，同時雜 質(zhì)也容易夾帶進晶體產(chǎn)品中，影響產(chǎn)品的純度。合理控制晶體的生長以得到較大的平均粒 徑和較窄的分布，不僅能夠提高有效成份的含量和產(chǎn)品品質(zhì)，而且能使產(chǎn)品的分離、洗滌、 包裝、運輸和貯藏得到不同程度的改善。本發(fā)明方法真空蒸發(fā)能有效地控制晶體產(chǎn)品中小 顆粒比例，克服了溶劑或反溶劑加入過程中產(chǎn)生的局部濃度不均勻問題、溫度控制的滯后 效應(yīng)問題、升溫溶解小顆粒能耗高且在反溶劑結(jié)晶過程中適用范圍較窄等問題。
[0056] 本發(fā)明通過簡單便捷的真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑循環(huán)操作，實現(xiàn)對晶體小顆粒的 溶解以及晶體生長的控制，制備粒徑大、分布窄的氨基酸晶體。采用本發(fā)明方法不僅能夠提 高純度和結(jié)晶過程收率，而且有利于產(chǎn)品的分離、洗滌、包裝、運輸和貯藏，對現(xiàn)代生物、醫(yī) 藥和功能保健品生產(chǎn)具有重要意義。
【主權(quán)項】
1. 一種集成反溶劑-真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑的結(jié)晶方法，其特征在于包括如下步 驟： (1) 初步反溶劑結(jié)晶：將待結(jié)晶的氨基酸物料置于結(jié)晶器中，加入溶劑水使其充分溶 解，控制溶液濃度為l〇g/L~500g/L ;升溫至30~80°C，將反溶劑加入到結(jié)晶器中，控制反 溶劑與溶劑體積比為1:4~2:1，充分攪拌，使溶液中溶質(zhì)部分結(jié)晶析出；待結(jié)晶物料； (2) 真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑結(jié)晶：繼續(xù)攪拌，將步驟（1)所得固液體系在絕對壓力為 20~60kPa下蒸發(fā)，控制蒸發(fā)量為步驟（1)所述反溶劑加入量的1/40~1/4后，將所得固 液體系冷卻或加入與步驟（1)相同的反溶劑，促使晶體繼續(xù)生長； 重復步驟（2) 1~3次，使結(jié)晶產(chǎn)品達到預定的晶粒尺寸； (3) 過濾干燥：將步驟（2)所得固液體系過濾后取出結(jié)晶固體；加入步驟（1)所述相同 的反溶劑洗滌晶體固體，控制反溶劑加入量為固體晶體質(zhì)量的1~2倍；干燥24小時后制 得結(jié)晶產(chǎn)品； 選用的反溶劑的正常沸點溫度低于溶劑的正常沸點；所述反溶劑為水溶性醇。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的集成反溶劑-真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑的結(jié)晶方法，其特征 在于：所述氨基酸為甘氨酸、5'肌苷酸鈉或5'-呈味核苷酸二鈉。3. 根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的集成反溶劑-真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑的結(jié)晶方法，其 特征在于：步驟（2)冷卻結(jié)晶過程控制結(jié)晶溫度降低5~50°C。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的集成反溶劑-真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑的結(jié)晶方法，其特 征在于：步驟（2)反溶劑結(jié)晶過程中反溶劑加入量為步驟（1)所述反溶劑加入量的1/5~ 1/2〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的集成反溶劑-真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑的結(jié)晶方法，其特征 在于：步驟（1)控制溶液濃度為50g/L~200g/L。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的集成反溶劑-真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑的結(jié)晶方法，其特征 在于：步驟（2)控制蒸發(fā)量為步驟（1)所述反溶劑加入量的1/20~1/10。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的集成反溶劑-真空蒸發(fā)-冷卻或反溶劑的結(jié)晶方法，其特征 在于：所述水溶性醇為乙醇。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種集成反溶劑‐真空蒸發(fā)‐冷卻或反溶劑的結(jié)晶方法。該方法步驟如下步驟：(1)初步反溶劑結(jié)晶：將待結(jié)晶的氨基酸物料置于結(jié)晶器中，加入溶劑水使其充分溶解，升溫至30～80℃，將反溶劑加入到結(jié)晶器中，充分攪拌，使溶液中溶質(zhì)部分結(jié)晶析出；待結(jié)晶物料；(2)真空蒸發(fā)‐冷卻或反溶劑結(jié)晶：繼續(xù)攪拌，將所得固液體系在絕對壓力為20～60kPa下蒸發(fā)，將所得固液體系冷卻或加入與步驟(1)相同的反溶劑，促使晶體繼續(xù)生長；重復步驟(2)1～3次；(3)過濾干燥：采用過濾、洗滌、干燥，制得結(jié)晶產(chǎn)品。本發(fā)明方法具有操作便捷、產(chǎn)率高和易于實現(xiàn)工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點，能獲得粒度分布窄、粒徑大的結(jié)晶產(chǎn)品。
【IPC分類】C07H1/06, C07C229/08, C07H19/20, C07C227/42, B01D9/00
【公開號】CN105031963
【申請?zhí)枴緾N201510398995
【發(fā)明人】江燕斌, 魏卓, 關(guān)國強
【申請人】華南理工大學
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年7月8日