一種層析儀改裝用于灌流培養(yǎng)純化的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬分離純化領(lǐng)域和灌流培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種層析儀改裝用于灌 流培養(yǎng)純化的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 傳統(tǒng)的補(bǔ)料分批細(xì)胞培養(yǎng)通常使用數(shù)千至上萬升的反應(yīng)罐，培養(yǎng)時(shí)間為7-21天， 不同抗體的產(chǎn)品收率范圍為2_6g/L。而灌流培養(yǎng)技術(shù)通過向反應(yīng)器內(nèi)連續(xù)補(bǔ)加新鮮培養(yǎng) 基，同時(shí)取出耗竭的培養(yǎng)基，可維持更長的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間，最高可達(dá)數(shù)月。
[0003] 灌流培養(yǎng)工藝的優(yōu)勢(shì)在于可以獲得更高的細(xì)胞密度，以及在同等規(guī)模反應(yīng)器水 平，能得到更多的產(chǎn)物產(chǎn)量。一般情況下，灌流培養(yǎng)的操作濃度是補(bǔ)料分批培養(yǎng)的10-30 倍，例如，使用50L的生物反應(yīng)器，配用灌流培養(yǎng)技術(shù)，其產(chǎn)量可達(dá)到1，000L補(bǔ)料分批生物 反應(yīng)器的生產(chǎn)能力。
[0004] 此外，灌流培養(yǎng)技術(shù)在產(chǎn)品質(zhì)量方面也具有明顯優(yōu)勢(shì)，在細(xì)胞灌流培養(yǎng)過程中，廢 液不會(huì)累積，因?yàn)楹慕叩呐囵B(yǎng)基被新鮮培養(yǎng)基連續(xù)替換并清除。產(chǎn)物的收獲和純化也更快 速，這尤其有益于不穩(wěn)定產(chǎn)品（如VIII因子）的生產(chǎn)。隨著工藝的進(jìn)步和對(duì)連續(xù)培養(yǎng)的逐 漸了解，未來10到15年內(nèi)，連續(xù)培養(yǎng)可能將成為"未來工廠"的主流生產(chǎn)平臺(tái)。
[0005] 但灌注培養(yǎng)也受到一定的限制，比如大量的收獲液連續(xù)積累，加大了下游處理量。 一般層析儀的流路只有一條，系統(tǒng)栗和樣品栗接于七通閥上，然后與流向閥連接，再接兩個(gè) 柱位閥，最后與系統(tǒng)的檢測(cè)器和收集器連接。此種流路只能運(yùn)行單根柱子，即樣品栗的溶液 和系統(tǒng)栗的溶液只能有一種進(jìn)入柱子。這種層析儀是針對(duì)批次性生產(chǎn)設(shè)計(jì)的，不能進(jìn)行連 續(xù)層析。本發(fā)明針對(duì)收獲液連續(xù)積累的問題設(shè)計(jì)改裝層析儀，可實(shí)現(xiàn)對(duì)收獲液的連續(xù)處理， 直接從收獲液中連續(xù)捕獲目的產(chǎn)品，同時(shí)能實(shí)現(xiàn)填料滿載狀態(tài)運(yùn)行，大大減少了下游的固 定成本和人力成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種層析儀改裝用于灌流培養(yǎng)純化的方法，解 決層析儀對(duì)收獲液不能連續(xù)處理的問題，減少下游的固定成本和人力成本，且具有兩條流 路并行同時(shí)運(yùn)行多根柱子的功能。
[0007] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：提供一種層析儀改裝用于灌流培養(yǎng) 純化的方法，其中所述的方法為：在層析儀上使用兩個(gè)閥，所述的兩個(gè)閥為七通閥時(shí)，將第 一個(gè)七通閥的⑤號(hào)口和⑦號(hào)口分別與第二個(gè)七通閥的③號(hào)口、①號(hào)口連接，所述的第二個(gè) 七通閥的⑤號(hào)口封死，所述的第二個(gè)七通閥的⑦號(hào)口為產(chǎn)品出口、接于系統(tǒng)儀器的檢測(cè)器 上，所述的兩個(gè)七通閥的④號(hào)口均為廢液口，兩根柱子分別裝在兩個(gè)七通閥的②和⑥號(hào)口 之間，系統(tǒng)栗溶液由第一個(gè)七通閥的①號(hào)口進(jìn)入，樣品栗溶液由第一個(gè)閥的③號(hào)口進(jìn)入，通 過切換兩個(gè)七通閥的閥位狀態(tài)實(shí)現(xiàn)兩條流路并行同時(shí)運(yùn)行兩根柱子，一條流路和柱子用于 樣品上樣，另一條流路和柱子同時(shí)進(jìn)行平衡洗脫，且具有自動(dòng)切換的功能。
[0008] 所述的兩個(gè)閥為七通閥時(shí)，將第一個(gè)七通閥的③號(hào)口與⑤號(hào)口用三通連接并接于 第一根柱子的上端，將第二個(gè)七通閥的③號(hào)口與⑤號(hào)口用三通連接并接于第一根柱子的下 端，將第一個(gè)七通閥的①號(hào)口接于第二根柱子的上端，第二個(gè)七通閥的①號(hào)口接于第二根 柱子的下端，將第一個(gè)七通閥的④號(hào)口與⑥號(hào)口用三通連接并接于第三根柱子的上端，將 第二個(gè)七通閥的④號(hào)口與⑥號(hào)口用三通連接并接于第三根柱子的下端，第二個(gè)七通閥的② 號(hào)口為廢液口，第二個(gè)七通閥的⑦號(hào)口為產(chǎn)品出口、接于系統(tǒng)儀器的檢測(cè)器上，系統(tǒng)栗溶液 由第一個(gè)七通閥的⑦號(hào)口進(jìn)入，樣品栗溶液由第一個(gè)七通閥的②號(hào)口進(jìn)入，通過切換七通 閥的閥位狀態(tài)實(shí)現(xiàn)兩條流路并行，三根柱子兩兩運(yùn)行，一條流路和柱子用于樣品上樣，另一 條流路和柱子同時(shí)進(jìn)行平衡洗脫，具有自動(dòng)切換的功能，且方便連續(xù)生產(chǎn)時(shí)更換柱子。
[0009] 所述的兩個(gè)閥用一個(gè)七通閥和三個(gè)八通閥代替時(shí)，將七通閥的③號(hào)口與⑤號(hào)口用 三通連接并接于第一根柱子的上端，第一根柱子的下端連接第一個(gè)八通閥，將七通閥的① 號(hào)口接于第二根柱子的上端，第二根柱子的下端接第二個(gè)八通閥，將七通閥的④號(hào)口與⑥ 號(hào)口用三通連接并接于第三根柱子的上端，第三根柱子的下端接第三個(gè)八通閥，所述的三 個(gè)八通閥的②號(hào)出口為廢液口，三個(gè)八通閥的①號(hào)出口通過三通或四通匯成一條流路為產(chǎn) 品出口、接于系統(tǒng)儀器的檢測(cè)器上，第一個(gè)八通閥的③號(hào)口和④號(hào)口分別通過三通接于第 三根柱子和第二根柱子上端，第二個(gè)八通閥的③號(hào)口和④號(hào)口分別通過三通接于第三根柱 子和第一根柱子上端，第三個(gè)八通閥的③號(hào)口和④號(hào)口分別通過三通接于第二根柱子和第 一根柱子上端，系統(tǒng)栗溶液由七通閥的⑦號(hào)口進(jìn)入，樣品栗溶液由七通閥的②號(hào)口進(jìn)入，通 過切換七通閥和八通閥的閥位狀態(tài)實(shí)現(xiàn)具有兩條流路并同時(shí)運(yùn)行三根柱子的儀器，一條流 路和柱子用于樣品上樣，另一條流路和柱子同時(shí)進(jìn)行平衡洗脫，第三根柱子可以接受來自 另外兩根柱子的流出液，且三根柱子能自動(dòng)切換循環(huán)進(jìn)行，從而達(dá)到在不犧牲收率的條件 下大幅節(jié)約成本的目的。
[0010] 所述的兩個(gè)閥用五個(gè)八通閥代替時(shí)，柱上端兩個(gè)八通閥，第四個(gè)八通閥的①、②、 ③號(hào)口分別與第五個(gè)八通閥的③、①、②號(hào)口連接、并通過三通分別連接于第一根柱子、第 二根柱子和第三根柱子上端，且第一根柱子、第二根柱子和第三根柱子的下端分別接第一 個(gè)八通閥、第二個(gè)八通閥和第三個(gè)八通閥，第一個(gè)八通閥的③號(hào)口和④號(hào)口分別通過三通 接于第三根柱子和第二根柱子上端，第二個(gè)八通閥的③號(hào)口和④號(hào)口分別通過三通接于第 三根柱子和第一根柱子上端，第三個(gè)八通閥的③號(hào)口和④號(hào)口分別通過三通接于第二根柱 子和第一根柱子上端，第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)八通閥的②號(hào)出口為廢液口，①號(hào)口通過三 通或四通匯成一條流路為產(chǎn)品出口、接于儀器的檢測(cè)器上，系統(tǒng)栗溶液由第四個(gè)八通閥中 心進(jìn)入，樣品栗溶液由第五個(gè)八通閥中心進(jìn)入，通過切換五個(gè)八通閥的閥位狀態(tài)實(shí)現(xiàn)兩條 流路并行，三根柱子兩兩運(yùn)行，一條流路和柱子用于樣品上樣，另一條流路和柱子同時(shí)進(jìn)行 平衡洗脫，具有自動(dòng)切換的功能，且方便連續(xù)生產(chǎn)時(shí)更換柱子，或具有兩條流路并行同時(shí)運(yùn) 行三根柱子的儀器，一條流路和柱子用于樣品上樣，另一條流路和柱子同時(shí)進(jìn)行平衡洗脫， 第三根柱子可以接受來自另外兩根柱子的流出液，且三根柱子能自動(dòng)切換循環(huán)進(jìn)行，從而 達(dá)到在不犧牲收率的條件下大幅節(jié)約成本的目的的功能。
[0011] 所述的兩個(gè)閥用六個(gè)七通閥代替時(shí)，其中三個(gè)七通閥的②號(hào)口分別接于三根柱子 的上端，另外三個(gè)七通閥的⑦號(hào)口分別接于三根柱子的下端，第一個(gè)七通閥、第二個(gè)七通閥 和第三個(gè)七通閥的④號(hào)口與第四個(gè)七通閥、第五個(gè)七通閥和六個(gè)七通閥的⑥號(hào)口用三通或 四通連在一起，系統(tǒng)栗溶液由第一個(gè)七通閥、第二個(gè)七通閥和第三個(gè)七通閥的①號(hào)口進(jìn)入， 樣品栗溶液由第一個(gè)七通閥、第二個(gè)七通閥和第三個(gè)七通閥的③號(hào)口進(jìn)入，所述的第一個(gè) 七通閥、第二個(gè)七通閥和第三個(gè)七通閥的⑤、⑥、⑦號(hào)口封死，所述的第四個(gè)七通閥、第五個(gè) 七通閥和六個(gè)七通閥的⑤號(hào)口為廢液口、①號(hào)口為產(chǎn)品出口接于系統(tǒng)的檢測(cè)器上，②號(hào)口 封死，每個(gè)柱子后的三個(gè)七通閥的③號(hào)口和④號(hào)口短接，通過切換六個(gè)七通閥的閥位狀態(tài)， 實(shí)現(xiàn)具有兩條流路并行同時(shí)運(yùn)行三根柱子的儀器，一條流路和柱子用于樣品上樣，另一條 流路和柱子同時(shí)進(jìn)行平衡洗脫，第三根柱子可以接受來自另外兩根柱子的流出液，且三根 柱子能自動(dòng)切換循環(huán)進(jìn)行，從而達(dá)到在不犧牲收率的條件下大幅節(jié)約成本的目的。
[0012] -種層析儀改裝用于灌流培養(yǎng)純化的方法，其中所述的方法為：在新型層析儀上 使用兩個(gè)閥，所述的兩個(gè)閥為七通閥時(shí)，第一根柱子和第二根柱子分別接于兩個(gè)七通閥的 LoopE 口和LoopF 口之間，第一個(gè)七通閥的Syp 口與第二個(gè)七通閥的Col 口連接，第一個(gè)七 通閥的W2 口與第二個(gè)七通閥的Sap 口連接，系統(tǒng)栗溶液由第一個(gè)七通閥的Col 口進(jìn)入，樣 品栗溶液由第一個(gè)七通閥的Sap 口進(jìn)入，兩個(gè)七通閥的Wl均為廢液口，第二個(gè)七通閥的Syp 口為產(chǎn)品出口、接于系統(tǒng)儀器的檢測(cè)器上，通過切換兩個(gè)七通閥的閥位狀態(tài)，實(shí)現(xiàn)兩條流路 并行同時(shí)運(yùn)行兩根柱子，一條流路和柱子用于樣品上樣，另一條流路和柱子同時(shí)進(jìn)行平衡 洗脫，且具有自動(dòng)切換的功能。
[0013] 所述的兩個(gè)閥其中一個(gè)為七通閥，另一個(gè)為柱位閥時(shí)，所述的七通閥的LoopE 口 和LoopF 口短接、Col 口連接第一根柱子上端，且Wl 口和W2 口通過三通連接于第二根柱子 上端，所述的柱位閥的2A 口和IB 口通過三通連接于第一根柱子下端，將柱位閥的2B和IA 通過三通連接于第二根柱子的下端，系統(tǒng)栗溶液由七通閥的Syp 口進(jìn)入，樣品栗溶液由七 通閥的Sap 口進(jìn)入，柱位閥進(jìn)口為廢液口，柱位閥出口為產(chǎn)品出口、接于系統(tǒng)儀器的檢測(cè)器 上，通過切換七通閥的閥位狀態(tài)和柱位閥的不同柱位，實(shí)現(xiàn)兩條流路并行同時(shí)運(yùn)行兩根柱 子，一條流路和柱子用于樣品上樣，另一條流路和柱子同時(shí)進(jìn)行平衡洗脫，且具有自動(dòng)切換 的功能。
[0014] 所述的兩個(gè)閥其中一個(gè)為柱位閥，另一個(gè)為七通閥時(shí)，所述的柱位閥的3A 口與IB 口通過三通連接于第一根柱子上端、IA 口與2B 口通過三通連接于第二根柱子的上端和2A 口與3B 口通過三通接于第三