本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種右旋糖酐鐵注射液中苯酚含量測(cè)定的方法。

背景技術(shù)：

右旋糖酐鐵注射液(Iron Dextran Injection)主要成分為右旋糖酐氫氧化鐵復(fù)合物，適用于重癥缺鐵貧血或不宜內(nèi)服鐵劑的缺鐵性貧血。美國(guó)藥典(USP36-NF31)規(guī)定右旋糖酐鐵注射液中苯酚含量不能超過0.5％，中國(guó)獸藥典2010年版一部收載了右旋糖酐鐵注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但對(duì)苯酚的含量未作規(guī)定。目前，國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)尚未見右旋糖酐鐵注射液中苯酚含量測(cè)定的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地測(cè)定右旋糖酐鐵注射液中含量的方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：一種右旋糖酐鐵注射液中苯酚的含量測(cè)定方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、制備供試樣品

精密量取右旋糖酐鐵注射液置于容量瓶中，純化水稀釋，搖勻制備為供試樣品；

B、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制定

精密稱量苯酚置于容量瓶中，加水溶解并定容，搖勻；然后定量 稱取溶液置于容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾制備為標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

C、高效液相色譜測(cè)定

同體積定量稱取步驟A、B中的供試樣品與標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，色譜條件為：

色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；

柱溫：30℃；

流動(dòng)相：甲醇:乙腈:水＝45:25:30V/V；

流速：1.0ml/min

檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm

進(jìn)樣量為10μL。

進(jìn)一步的技術(shù)方案在于，所述色譜柱的規(guī)格為4.6×250mm×5μm。

進(jìn)一步的技術(shù)方案在于，所述步驟B流動(dòng)相為甲醇:乙腈:水＝45:25:30V/V。

進(jìn)一步的技術(shù)方案還在于，所述流動(dòng)相使用前先超聲脫氣處理。

采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于：本發(fā)明采用外標(biāo)法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地將右旋糖酐鐵注射液中苯酚含量測(cè)定出來，對(duì)于流動(dòng)相的選擇，發(fā)明人進(jìn)行了數(shù)次摸索試驗(yàn)，最后確定以甲醇和乙腈作為有機(jī)相，以比例為甲醇：乙腈：水＝45：25：30(V/V)為流動(dòng)相，其峰形良好，出峰時(shí)間10min左右，試驗(yàn)結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)。

附圖說明

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。

圖1是本發(fā)明實(shí)施例一色譜線性關(guān)系圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明，但是本發(fā)明還可以采用其他不同于在此描述的其它方式來實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似推廣，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實(shí)施例的限制。

實(shí)施例一

1.儀器與試藥

高效液相色譜儀(waters-2695，2489紫外檢測(cè)器，美國(guó))；分析天平(Sartorius CPA225D，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；超聲波清洗儀(KQ2200型，昆山市超聲儀器有限公司)；右旋糖酐鐵注射液(批號(hào)BJ2140902，河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司)；苯酚對(duì)照品(批號(hào)：100509-201203，含量100.0％)；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析級(jí)試劑。

2.色譜條件

色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(4.6×250mm×5μm)；流動(dòng) 相體積比為甲醇:乙腈:水＝45:25:30(V/V)，使用前先用超聲脫氣機(jī)超聲脫氣處理30分鐘，以去除流動(dòng)相中的氣泡；柱溫為30℃，紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣量為10μL。

對(duì)于流動(dòng)相的選擇，進(jìn)行了數(shù)次摸索試驗(yàn)，流動(dòng)相有機(jī)相嘗試單獨(dú)使用甲醇和乙腈，結(jié)果都不太理想，峰前沿；最后同時(shí)使用甲醇和乙腈作為有機(jī)相進(jìn)行試驗(yàn)，比例為甲醇：乙腈：水＝45：25：30(V/V)，峰形良好，出峰時(shí)間10min左右，試驗(yàn)結(jié)果滿意。

3.樣品中苯酚含量檢測(cè)

A、制備供試樣品

精密量取1mL右旋糖酐鐵注射液置于100mL容量瓶中，純化水稀釋至刻度，搖勻制備為供試樣品；

B、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制定

精密稱取適量苯酚對(duì)照品(約含苯酚25mg)置于25mL容量瓶中，加水溶解并定容，搖勻；取上述溶液5mL置于100mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾制備為標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

將供試樣品與標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別量取10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，再經(jīng)分析計(jì)算得出樣品中苯酚的含量，計(jì)算得出苯酚的含量為0.46％。

本方法用于測(cè)定右旋糖酐鐵注射液中苯酚含量，操作簡(jiǎn)單，分析結(jié)果真實(shí)、準(zhǔn)確。

本發(fā)明的方法學(xué)考察

4.線性范圍考察

精密稱取苯酚對(duì)照品49.30mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，加流動(dòng)相分別稀釋成24.65μg/ml、29.58μg/ml、39.44μg/ml、49.3μg/ml、59.16μg/ml、69.02μg/ml的對(duì)照溶液，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾后注入液相色譜儀，根據(jù)本發(fā)明所述方法測(cè)定，記錄色譜圖，以對(duì)照品濃度C(mg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得線性回歸方程A＝9208.2C+357.49，得r＝0.9999，苯酚在24.65μg/ml～69.02μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，如圖1所示。

5.精密度考察

按照供試品溶液的制備方法，平行配制6份供試品溶液，考察此方法的中間精密度。為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，另一名分析員獨(dú)立建立系統(tǒng)，重新配置6份供試品溶液進(jìn)行檢測(cè)，需使用不同的儀器，在不同的日期進(jìn)行。中間精密度試驗(yàn)的RSD＝0.76％，重復(fù)性試驗(yàn)RSD＝0.88％，表明本發(fā)明所述方法測(cè)定苯酚含量精密度高，重現(xiàn)性好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小。

精密度試驗(yàn)結(jié)果

6.回收率考察

配制低、中、高三種不同濃度的供試液，根據(jù)本發(fā)明所述方法測(cè)定，得各組分的平均回收率分別如下表所示。

回收率試驗(yàn)結(jié)果

7.溶液的穩(wěn)定性考察

按照所述的方法制備供試品溶液，放置，分別于0h、2h、4h、6h、8h、10h進(jìn)樣測(cè)定。根據(jù)本發(fā)明所述方法測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明：本發(fā)明供試品溶液在室溫下放置10小時(shí)苯酚的峰面積未見 明顯變化，對(duì)日常檢測(cè)不會(huì)造成影響。

樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

8.檢測(cè)限與定量限的確定

精密稱取苯酚對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并逐級(jí)稀釋成系列濃度的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，以信噪比(S/N)等于3時(shí)的濃度作為最低檢測(cè)限，經(jīng)檢測(cè)，其檢測(cè)限為0.01μg/ml，以信噪比(S/N)等于10時(shí)的濃度作為定量限，經(jīng)檢測(cè)，其定量限為0.05μg/ml。

上述4-8項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明方法具有良好的專屬性，結(jié)果表明維生素B進(jìn)樣量在24.65μg/ml～69.02μg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良線性關(guān)系，回歸方程為A＝9208.2C+357.49，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999，精密度、穩(wěn)定性、回收性良好，平均回收率在100.28％～101.21％之間，方法簡(jiǎn)單，含量測(cè)定準(zhǔn)確可靠，試驗(yàn)時(shí)間短，無干擾峰，分離度、拖尾因子、對(duì)稱因子均符合中國(guó)藥典求，檢測(cè)結(jié)果良好，能夠用于該含量項(xiàng)目的 檢驗(yàn)控制。

本發(fā)明經(jīng)與對(duì)照品溶液進(jìn)樣結(jié)果對(duì)比，保留時(shí)間、分離度、拖尾因子、對(duì)稱因子、理論塔板數(shù)各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)符合藥典規(guī)定要求，測(cè)定結(jié)果能反映出的右旋糖酐鐵注射液中苯酚的含量。本發(fā)明方法填補(bǔ)了國(guó)際醫(yī)藥領(lǐng)域技術(shù)上的空白，理論上采用對(duì)照分析思路，操作細(xì)節(jié)使用自主探索出流動(dòng)相的優(yōu)點(diǎn)。