本發(fā)明涉及用仲胺衍生硫酸二甲酯，用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定衍生物的含量，從而計(jì)算出富馬酸二甲酯中硫酸二甲酯的含量。此方法能較好的控制原料藥中痕量硫酸二甲酯含量，為患者的健康安全用藥提供保障，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景富馬酸二甲酯，化學(xué)名Dimethylfumarate。為一種治療多發(fā)性硬化癥的藥物。結(jié)構(gòu)如下：富馬酸二甲酯中含有反應(yīng)殘留的硫酸二甲酯，結(jié)構(gòu)如下：準(zhǔn)確定量地測定富馬酸二甲酯中的硫酸二甲酯含量極具挑戰(zhàn)性。硫酸二甲酯極性很大,不具備敏感的紫外吸收基團(tuán),并且易水解。因此,很難采用氣相、液相色譜和其他分析手段對其進(jìn)行痕量直接測定。目前，只有測定富馬酸二甲酯中常量硫酸二甲酯含量的方法采用經(jīng)典的色譜法,其專一性、靈敏度、方法精密度和重復(fù)性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析結(jié)果。為了克服原方法的缺陷，本發(fā)明采用仲胺作為衍生試劑與硫酸二甲酯形成穩(wěn)定的衍生物。形成的衍生物具備優(yōu)異的液相色譜分離和質(zhì)譜檢測等 特征。該分析方法具有專一性好、靈敏高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：如上所述，直接定量測定痕量硫酸二甲酯存在各種缺陷。然而,利用硫酸二甲酯帶有甲氧基基團(tuán)這一特征，可改造其特性使之轉(zhuǎn)化為適合定量分析的分子結(jié)構(gòu)。利用仲胺能快速定量地同甲氧基基團(tuán)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的性質(zhì)，而衍生試劑與硫酸二甲酯形成的衍生物具有穩(wěn)定性強(qiáng)和非常適合反相液相色譜分離的特征。除此之外,該衍生物在質(zhì)譜檢測器有靈敏的吸收這一特征使本方法的靈敏度和專一性大大提高。衍生化學(xué)反應(yīng)式如下：衍生物結(jié)構(gòu)通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)富馬酸二甲酯在乙腈中有非常好的溶解性。本發(fā)明將用乙腈作為稀釋劑。該分析方法的關(guān)鍵點(diǎn)是對稀釋劑中水份進(jìn)行嚴(yán)格控制。由于稀釋劑中含有不確定量的水，這些水將使硫酸二甲酯水解產(chǎn)生不確定量的硫酸，從而使測定結(jié)果偏低、重現(xiàn)性較差。為了確保系統(tǒng)中水份含量恒定，并低于可接受的實(shí)驗(yàn)誤差，本發(fā)明使用色譜級的乙腈。在色譜級的乙腈溶劑中進(jìn)行衍生反應(yīng)能準(zhǔn)確的定量富馬酸二甲酯中的硫酸二甲酯。本發(fā)明涉及一種富馬酸二甲酯中硫酸二甲酯含量的測定分析方法，該方法為用仲胺作為衍生試劑與富馬酸二甲酯中硫酸二甲酯形成衍生物，然后用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定衍生物的含量，從而得出富馬酸二甲酯中硫酸二甲酯的含量。上述硫酸二甲酯衍生的反應(yīng)中用仲胺與乙腈作為衍生試劑。上述采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，負(fù)離子選擇離子模式。該方法包括以下幾個步驟：(1)取富馬酸二甲酯原料或制劑粉末，以含有仲胺的乙腈溶液作為衍生劑制備得 到樣品衍生溶液；(2)采用離子色譜柱的色譜柱，流動相為5mM-80mM甲酸銨或乙酸銨的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液和乙腈，進(jìn)行等度洗脫。(3)設(shè)置流動相流速為0.3-0.6mL/mL，柱溫控制在25℃-40℃之間。(4)取步驟(1)的樣品衍生溶液5uL，進(jìn)樣，記錄質(zhì)譜總離子流圖。(5)采用質(zhì)譜檢測器，離子模式選擇負(fù)離子，取(1)的樣品衍生溶液進(jìn)樣，記錄質(zhì)譜圖。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：樣品前處理：稀釋液：采用色譜級的乙腈。衍生液：用稀釋液配制成約0.2％的仲胺溶液。標(biāo)準(zhǔn)硫酸二甲酯溶液：用稀釋液精密配制約60ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)硫酸二甲酯溶液。標(biāo)準(zhǔn)品衍生溶液：精密加入500ul的標(biāo)準(zhǔn)硫酸二甲酯溶液于2ml的HPLC進(jìn)樣瓶中，然后精密加入500ul衍生液，放入恒溫烘箱中，50℃放置60min，進(jìn)樣。樣品衍生溶液：精密稱取20mg樣品于2ml的HPLC進(jìn)樣瓶中，然后精密加入500ul稀釋液，再精密加入500ul衍生液，放入恒溫烘箱中，50℃放置60min，進(jìn)樣。本發(fā)明使用色譜柱為：離子色譜柱。流速0.3-0.6mL/min。柱溫25℃-40℃。流動相A：5mM-80mM甲酸銨或乙酸銨的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液，流動相B：乙腈，梯度如下：AB0min10％90％10min10％90％質(zhì)譜檢測器：負(fù)離子模式，[M-H]-:111附圖說明：附圖1：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1得到的仲胺衍生物質(zhì)譜棒圖；附圖2：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1得到的硫酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)品衍生物質(zhì)譜總離子流圖；附圖3：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例2得到的富馬酸二甲酯樣品衍生物質(zhì)譜總離子流圖；附圖4：根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例3得到的富馬酸二甲酯樣品加樣回收率質(zhì)譜總離子流圖。具體實(shí)施方式為了更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合本發(fā)明的具體實(shí)施例作進(jìn)一步說明，但其不限制于本發(fā)明。實(shí)施例一儀器與條件：高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：Agilent1260infinity，MS檢測器。色譜柱：離子色譜柱流動相：A：5mM-80mM甲酸銨或乙酸銨的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液B:乙腈。等度如下：0～15min，有機(jī)相比例保持90％。柱溫：35℃。流速：0.5mL/min選擇負(fù)離子：111進(jìn)樣體積：5ul。實(shí)驗(yàn)步驟：1)流動相A配制：準(zhǔn)確稱取50mM乙酸胺溶于1000mL含有0.1％乙酸水中，混勻。2)稀釋液A：乙腈3)衍生液B配制：2mL二乙胺于1000ml容量瓶中，加入A定容。4)標(biāo)準(zhǔn)溶液C：精密稱取約60mg硫酸二甲酯于10ml容量瓶中，加A定容，搖勻，精密吸取100ul于另一10ml容量瓶中，加A定容，即得C(標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度約60ug/ml)。5)標(biāo)準(zhǔn)品溶液：分別精密取500ulC和500ulB于2mlHPLC進(jìn)樣瓶中，蓋好蓋子，50℃烘箱中放置60min，進(jìn)樣。記錄衍生物質(zhì)譜棒圖，見典型圖1。記錄衍生物質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖2。實(shí)施例二儀器與條件：高效液相色譜儀：Agilent1260infinity，MS檢測器。色譜柱：離子色譜柱流動相：A：5mM-80mM甲酸銨或乙酸銨的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液B:乙腈。等度如下：0～15min，有機(jī)相比例保持90％。柱溫：35℃。流速：0.5mL/min選擇負(fù)離子：111進(jìn)樣體積：5ul。實(shí)驗(yàn)步驟：1)流動相A配制：準(zhǔn)確稱取50mM乙酸胺溶于1000mL含有0.1％乙酸水中，混勻。2)稀釋液A：乙腈3)衍生液B配制：2mL二乙胺于1000ml容量瓶中，加入A定容。4)樣品溶液D:精密稱取約20.0mg富馬酸二甲酯樣品，分別精密取500ulA和500ulB于2mlHPLC進(jìn)樣瓶中，蓋好蓋子，50℃烘箱中放置60min，進(jìn)樣。記錄衍生物質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖3。實(shí)施例三儀器與條件：高效液相色譜儀：Agilent1260infinity，MS檢測器。色譜柱：離子色譜柱流動相：A：5mM-80mM甲酸銨或乙酸銨的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液 B:乙腈。等度如下：0～15min，有機(jī)相比例保持90％。柱溫：35℃。流速：0.5mL/min選擇負(fù)離子：111進(jìn)樣體積：5ul。實(shí)驗(yàn)步驟：1)流動相A配制：準(zhǔn)確稱取50mM乙酸胺溶于1000mL含有0.1％乙酸水中，混勻。2)稀釋液A：乙腈3)衍生液B配制：2mL二乙胺于1000ml容量瓶中，加入A定容。4)標(biāo)準(zhǔn)溶液C：精密稱取約60mg硫酸二甲酯于10ml容量瓶中，加A定容，搖勻，精密吸取100ul于另一10ml容量瓶中，加A定容，即得C(標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度約60ug/ml)。5)樣品溶液E:精密稱取約20.0mg富馬酸二甲酯樣品，分別精密取500ulC和500ulB于2mlHPLC進(jìn)樣瓶中，蓋好蓋子，50℃烘箱中放置60min，進(jìn)樣。記錄衍生物質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖4。當(dāng)前第1頁1 2 3