本發(fā)明涉及一種評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒及其使用方法，屬于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織評(píng)估，目前每7對(duì)夫婦中約有1對(duì)夫婦存在生殖障礙問(wèn)題，主要表現(xiàn)為流產(chǎn)或不孕。關(guān)注生殖健康是國(guó)家發(fā)展的重要部分。研究表明，子宮內(nèi)膜容受性的改變可能是導(dǎo)致生殖障礙的主要因素之一。子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜接受胚胎的能力，指子宮內(nèi)膜處于一種允許胚胎定位、黏附和侵入的狀態(tài)。該時(shí)期又被稱(chēng)為子宮內(nèi)膜的種植窗期。如果種植窗期子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的容受性發(fā)生異常，其對(duì)胚胎發(fā)生排斥反應(yīng)，進(jìn)而不允許胚胎正常著床發(fā)育，這一狀態(tài)將會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)或不孕等不良妊娠結(jié)局。因此，子宮內(nèi)膜容受性的評(píng)估對(duì)于生殖障礙患者的診治具有重要意義。目前，臨床中子宮內(nèi)膜容受性的評(píng)估手段主要是形態(tài)學(xué)評(píng)估。其評(píng)估指標(biāo)包括三大類(lèi)：(1)子宮內(nèi)膜厚度、回聲和血流等超聲形態(tài)；(2)腺體大小、間質(zhì)疏密和血管豐度等組織活檢形態(tài)；(3)子宮內(nèi)膜胞飲突。然而，形態(tài)學(xué)評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性存在一定爭(zhēng)議。因?yàn)椋訉m內(nèi)膜容受性由一系列細(xì)胞和細(xì)胞因子相互作用調(diào)控，細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子在與胚胎接觸過(guò)程中發(fā)揮重要作用。但是，子宮內(nèi)膜的形態(tài)學(xué)表征并不能準(zhǔn)確反映其細(xì)胞和細(xì)胞因子的表達(dá)情況。在此背景下，子宮內(nèi)膜活檢結(jié)合分子檢測(cè)等新的評(píng)估手段開(kāi)始發(fā)展。因此，子宮內(nèi)膜容受性生物標(biāo)記物的研究越來(lái)越受到重視。研究表明，子宮內(nèi)膜免疫細(xì)胞在其容受性調(diào)控中發(fā)揮重要作用。子宮內(nèi)膜免疫細(xì)胞主要包括自然殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞等四大類(lèi)。并且，各類(lèi)免疫細(xì)胞又分為不同的亞群，在子宮內(nèi)膜容受性調(diào)節(jié)中發(fā)揮不同的作用。自然殺傷細(xì)胞作為子宮內(nèi)膜中主要的免疫細(xì)胞，通過(guò)促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入、支持螺旋動(dòng)脈重構(gòu)以及調(diào)控自身殺傷能力等途徑調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性，參與胚胎種植。巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜局部及系統(tǒng)激素的調(diào)節(jié)下可以進(jìn)行亞群的轉(zhuǎn)換，在種植過(guò)程中既可以清除病原體，又可以誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的免疫耐受，進(jìn)而維持成功妊娠。T細(xì)胞主要包括輔助性T細(xì)胞、殺傷性T細(xì)胞以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。其中，輔助性T細(xì)胞主要通過(guò)分泌細(xì)胞因子，調(diào)控子宮內(nèi)膜的分化，為胚胎種植做好準(zhǔn)備；殺傷性T細(xì)胞主要通過(guò)調(diào)控滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入與分泌毒性顆粒的平衡參與種植過(guò)程；而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制作用，其通過(guò)抑制子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的過(guò)度炎癥反應(yīng)，進(jìn)而維持繼續(xù)妊娠。樹(shù)突狀細(xì)胞作為重要的抗原提呈細(xì)胞，根據(jù)其成熟程度可以分為兩類(lèi)：未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞和成熟樹(shù)突狀細(xì)胞。未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞在妊娠中發(fā)揮免疫耐受作用，而成熟樹(shù)突狀細(xì)胞在妊娠中發(fā)揮免疫排斥作用，因此，兩者的平衡在子宮內(nèi)膜接受胚胎過(guò)程中同樣發(fā)揮著必不可少的作用。以上研究結(jié)果表明，子宮內(nèi)膜容受性的調(diào)控因素并不是單一的，而是各種免疫細(xì)胞相互作用，相互平衡的結(jié)果。但是，目前國(guó)內(nèi)外以子宮內(nèi)膜免疫細(xì)胞作為其容受性評(píng)估指標(biāo)時(shí)，多是檢測(cè)其中一種免疫細(xì)胞，并且檢測(cè)方法各異，分析結(jié)果不統(tǒng)一、波動(dòng)性大。根據(jù)這些結(jié)果，臨床醫(yī)生不能對(duì)患者子宮內(nèi)膜容受性進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估，故而無(wú)法制定完善的治療方案。因此，開(kāi)發(fā)穩(wěn)定可靠的子宮內(nèi)膜多種免疫細(xì)胞檢測(cè)試劑盒可以對(duì)子宮內(nèi)膜容受性進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估，為患者的診療提供可靠依據(jù)。目前針對(duì)子宮內(nèi)膜免疫細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)方法主要有流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)檢測(cè)兩種方法。但是，流式細(xì)胞術(shù)不能對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的定位情況進(jìn)行分析，并且在制備細(xì)胞懸液的過(guò)程中存在細(xì)胞和抗原丟失等問(wèn)題。因此，免疫組織化學(xué)染色方法成為了更好的選擇。在臨床上，免疫組織化學(xué)染色已經(jīng)在腫瘤病理診斷中得到了廣泛應(yīng)用，涉及領(lǐng)域包括腫瘤組織起源的鑒別、未分化惡性腫瘤性質(zhì)的判定、各種形態(tài)系統(tǒng)腫瘤鑒別、確定腫瘤原發(fā)部位等。其原理是用標(biāo)記的抗體對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位、定性或定量檢測(cè)，經(jīng)過(guò)組織化學(xué)的呈色反應(yīng)而呈現(xiàn)醒目的陽(yáng)性色彩，在光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下進(jìn)行人工計(jì)數(shù)，或者采用顯微鏡采集圖像并結(jié)合病理圖片分析軟件對(duì)其進(jìn)行定量分析。但迄今為止，市面上尚未用于評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的，是提供一種評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒及其使用方法。該試劑盒用于評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性，具有操作簡(jiǎn)單、靈敏性高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、客觀、快捷。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下：一種評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒，包括盒體和設(shè)置在所述盒體側(cè)面開(kāi)口處的盒蓋，所述盒體的底部和四周側(cè)壁設(shè)有隔熱板，所述盒蓋內(nèi)壁設(shè)有隔熱板，在盒體、盒蓋的外端面上相對(duì)應(yīng)的分別設(shè)有磁性下鎖扣與磁性上鎖扣，所述盒體內(nèi)部設(shè)有泡沫墊和1份使用說(shuō)明書(shū)，所述泡沫墊上設(shè)有2個(gè)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品、21瓶試劑、抗原修復(fù)粉劑、pH試紙、載玻片和蓋玻片，2個(gè)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品分別為陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品，21瓶試劑分別為8瓶一抗儲(chǔ)存液、1瓶二抗儲(chǔ)存液、1瓶抗體稀釋液、1瓶PBS片劑、1瓶吐溫-20、1瓶過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液、1瓶非特異性蛋白阻斷粉劑、1瓶顯色液儲(chǔ)存液、1瓶顯色液稀釋液、4瓶復(fù)染液和1瓶封片劑。在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。進(jìn)一步，所述泡沫墊包括位于盒體內(nèi)部靠上的第一泡沫墊、位于盒體內(nèi)部居中的第二泡沫墊和位于盒體內(nèi)部靠下的第三泡沫墊，且所述第一泡沫墊、第二泡沫墊和第三泡沫墊上下平行設(shè)置，所述第一泡沫墊上開(kāi)設(shè)有6個(gè)分別放置pH試紙、載玻片、蓋玻片、陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品和抗原修復(fù)粉劑且與上述物品的長(zhǎng)度相適配的腔體，在腔體的長(zhǎng)度方向的壁體上并且在彼此對(duì)應(yīng)的位置各凹設(shè)有兩個(gè)指腔，所述第二泡沫墊上開(kāi)有14個(gè)分別放置8瓶一抗儲(chǔ)存液、二抗儲(chǔ)存液、PBS片劑、過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液、非特異性蛋白阻斷粉劑、顯色液儲(chǔ)存液和封片劑的圓形的凹槽，所述第三泡沫墊上開(kāi)有7個(gè)分別放置抗體稀釋液、吐溫-20、顯色液稀釋液和4瓶復(fù)染液的圓形的凹槽。進(jìn)一步，每個(gè)所述指腔形狀均為半球形。進(jìn)一步，所述陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品為正常育齡婦女子宮內(nèi)膜組織石蠟塊，所述陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品為不含一抗的5％BSA孵育的子宮內(nèi)膜組織石蠟塊。進(jìn)一步，所述一抗儲(chǔ)存液為100×抗人自然殺傷細(xì)胞表面分子CD56的抗體、100×抗人巨噬細(xì)胞表面分子CD68的抗體、100×抗人T細(xì)胞表面分子CD3的抗體、100×抗人輔助性T細(xì)胞表面分子CD4的抗體、100×抗人殺傷性T細(xì)胞表面分子CD8的抗體、100×抗人調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的抗體、100×抗人未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD1a的抗體、100×抗人成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD83的抗體，所述二抗儲(chǔ)存液為100×辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG抗體，所述過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液為30％v/v過(guò)氧化氫溶液，所述非特異性蛋白阻斷粉劑為白蛋白粉，所述顯色液儲(chǔ)存液為50×DAB溶液，所述復(fù)染液為蘇木素，所述封片劑為中性樹(shù)膠，所述抗原修復(fù)粉劑為T(mén)ris/EDTA。進(jìn)一步，所述陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述一抗儲(chǔ)存液為黑色帽的白色PE塑料管，所述二抗儲(chǔ)存液為黑色帽的白色PE塑料管，所述抗體稀釋液為紅色帽的黑色PE塑料瓶，所述PBS片劑為灰色帽的紅色PE塑料瓶，所述吐溫-20為黃色帽的灰色PE塑料瓶，所述過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液為綠色帽的黃色PE塑料管，所述非特異性蛋白阻斷粉劑為藍(lán)色帽的綠色PE塑料瓶，所述顯色液儲(chǔ)存液為紫色帽的藍(lán)色PE塑料管，所述顯色液稀釋液為白色帽的紫色PE塑料瓶，所述復(fù)染液為綠色帽的黑色PE塑料瓶，所述封片劑為紅色帽的黃色PE塑料管。進(jìn)一步，所述pH試紙為100張，所述載玻片為400張，所述蓋玻片為400張，所述陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品為1塊，7g，所述陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品為1塊，7g，所述一抗儲(chǔ)存液為8管，每管各50μL，所述二抗儲(chǔ)存液為1管，300μL，所述抗體稀釋液為1瓶，50mL，所述PBS片劑為1瓶，15片，所述吐溫-20為1瓶，10mL，所述過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液為1管，5mL，所述非特異性蛋白阻斷粉劑為1瓶，10g，所述顯色液儲(chǔ)存液為1管，600μL，所述顯色液稀釋液為1瓶，30mL，所述復(fù)染液為4瓶，20mL/瓶，所述封片劑為1管，10mL，所述抗原修復(fù)粉劑分為20個(gè)試劑袋袋裝，每袋1.58g。一種如上任一項(xiàng)所述的試劑盒的使用方法，包括如下步驟：(1)工作液配制：片劑、粉劑溶解，儲(chǔ)存液稀釋如下：a、PBS片劑溶解：將1片PBS片劑溶于1000mL超純水中，得到1×PBS溶液，將1片PBS片劑溶于1000mL超純水中，加500uL吐溫-20，得到1×PBST溶液；b、非特異性蛋白阻斷粉劑溶解：取0.5g白蛋白粉溶于10mL步驟(1)a所得1×PBST溶液中，得到5％v/v的非特異性蛋白阻斷劑工作液；c、抗原修復(fù)粉劑溶解：取1袋1.58gTris/EDTA溶于1000mL超純水中，加入0.5mL吐溫-20，用pH試紙監(jiān)測(cè)溶液pH值，調(diào)整pH至9.0，得到抗原修復(fù)劑工作液；d、一抗儲(chǔ)存液稀釋?zhuān)悍謩e取100×抗人自然殺傷細(xì)胞表面分子CD56的抗體、100×抗人巨噬細(xì)胞表面分子CD68的抗體、100×抗人T細(xì)胞表面分子CD3的抗體、100×抗人輔助性T細(xì)胞表面分子CD4的抗體、100×抗人殺傷性T細(xì)胞表面分子CD8的抗體、100×抗人調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的抗體、100×抗人未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD1a的抗體、100×抗人成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD83的抗體，加抗體稀釋液稀釋100倍，得到一抗工作液；e、二抗儲(chǔ)存液稀釋?zhuān)喝?00×辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG抗體，加抗體稀釋液稀釋100倍，得到二抗工作液；f、過(guò)氧化物酶滅活劑儲(chǔ)存液稀釋?zhuān)喝?0％v/v的過(guò)氧化氫溶液，加超純水稀釋10倍，得到3％v/v的過(guò)氧化物酶滅活劑工作液；(2)石蠟切片脫蠟：將取自活體的人體的子宮內(nèi)膜的待測(cè)樣本、陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的各8張切片先放入250mL二甲苯中浸泡10min，再放入另一份250mL二甲苯中浸泡5min，無(wú)水酒精與二甲苯等體積混合溶液中浸泡3min，得到脫蠟后切片；(3)水化：將步驟(2)所得脫蠟后切片，依次放入100％酒精浸泡2min，95％酒精浸泡2min，另一份95％酒精浸泡2min，80％酒精浸泡2min，然后用步驟(1)a所述的1×PBS溶液沖洗3min，得到水化后的切片；(4)內(nèi)源性過(guò)氧化物酶失活：將步驟(3)所得水化后的切片，甩去多余的液體，浸泡在步驟(1)f所得過(guò)氧化物酶滅活劑工作液中15min，再用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滅活后的切片；(5)抗原修復(fù)：將步驟(1)c所得抗原修復(fù)劑工作液放入耐高溫容器中，再將步驟(4)所得內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滅活后的切片置于其中，煮沸15min，放置室溫冷卻，然后用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到抗原修復(fù)后的切片；(6)封閉：將步驟(5)所得抗原修復(fù)后切片，甩去多余的液體，滴加步驟(1)b所得非特異性蛋白阻斷劑工作液，室溫孵育20min，得到非特異性蛋白封閉后的切片；(7)一抗孵育：將步驟(6)所得非特異性蛋白封閉切片，除陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品外，待測(cè)樣本和陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的各8張切片均甩去步驟(1)b所得非特異性蛋白阻斷劑工作液，并分別滴加步驟(1)d所得一抗工作液，37℃水浴孵育60min，然后用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，然后用步驟(1)a所得1×PBST溶液沖洗3min，得到一抗后的切片；(8)二抗孵育：將步驟(7)所得一抗后的切片，甩去多余的液體，滴加步驟(1)e所得二抗工作液，37℃水浴孵育30min，甩去二抗工作液，然后使用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到二抗后的切片；(9)顯色：a、顯色液儲(chǔ)存液稀釋?zhuān)喝?0×DAB溶液，加顯色液稀釋液稀釋50倍，得到顯色液工作液；b、將步驟(8)所得二抗后的切片，甩去多余的液體，滴加步驟(9)a所得顯色液工作液進(jìn)行顯色，得到顯色后的切片；(10)復(fù)染、分化、返藍(lán)：將步驟(9)所得顯色后的切片，甩去顯色液工作液，滴加復(fù)染液復(fù)染4min、1％v/v鹽酸酒精分化20s、1％v/v氨水中返藍(lán)30s，得到返藍(lán)后的切片；(11)脫水、透明化：將步驟(10)所得返藍(lán)后的切片，依次放入70％酒精浸泡2min、80％酒精浸泡2min、95％酒精浸泡2min、100％酒精浸泡2min，脫水后轉(zhuǎn)入二甲苯溶液浸泡3min，再轉(zhuǎn)入另一份二甲苯溶液10min，最后轉(zhuǎn)入另一份二甲苯溶液5min進(jìn)行透明化處理，得到透明化后的切片；(12)封片：將步驟(11)所得透明化后的切片，甩去多余的液體，用封片劑封片，得到免疫組織化學(xué)染色切片，然后采用成像顯微鏡和病理圖片分析軟件分析結(jié)果，評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性是否異常。在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。進(jìn)一步，步驟(2)所述待測(cè)樣品為取自活體的人體的子宮內(nèi)膜。本發(fā)明的有益效果是：1.安全性高：本發(fā)明的試劑盒，在第一泡沫墊上上設(shè)置腔體，可供物品容納并對(duì)物品限定，以避免在運(yùn)輸之類(lèi)的環(huán)節(jié)中震損諸如載玻片、蓋玻片這些易損物品；通過(guò)在腔體的對(duì)應(yīng)壁體上凹設(shè)的指腔，可有利于操作人員方便而可靠地拿取這些物品。2.密封性好：本發(fā)明的試劑盒，在盒蓋和盒體相應(yīng)設(shè)置了磁性鎖合裝置，試劑盒的密封性好，便于移動(dòng)和運(yùn)輸。3.使用方便：本發(fā)明的試劑盒，盒體的開(kāi)口設(shè)在側(cè)面，有利于試劑的取出，用到哪一層的試劑，就取出哪一層的泡沫墊，而不必像頂部開(kāi)口的試劑盒，要一層層地取出泡沫墊。4.市場(chǎng)前景廣闊：本發(fā)明的試劑盒，具有操作簡(jiǎn)單、靈敏性高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、客觀、快捷，能大大提高子宮內(nèi)膜容受性的評(píng)估效率，且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理、容易制造，市場(chǎng)需求量大，適于規(guī)?；a(chǎn)。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明打開(kāi)盒蓋后的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中，各標(biāo)號(hào)所代表的部件列表如下：1、盒體，2、盒蓋，3、隔熱板，4、磁性下鎖扣，5、磁性上鎖扣，6、泡沫墊，61、第一泡沫墊，62、第二泡沫墊，63、第三泡沫墊，7、pH試紙，8、載玻片，9、蓋玻片，10、陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品，11、陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品，12、一抗儲(chǔ)存液，13、二抗儲(chǔ)存液，14、抗體稀釋液，15、PBS片劑，16、吐溫-20，17、過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液，18、非特異性蛋白阻斷粉劑，19、顯色液儲(chǔ)存液，20、顯色液稀釋液，21、復(fù)染液，22、封片劑，23、抗原修復(fù)粉劑。圖2為本發(fā)明在子宮內(nèi)膜容受性評(píng)估中的檢測(cè)應(yīng)用。圖中，(A)為子宮內(nèi)膜自然殺傷細(xì)胞染色圖片，(B)為子宮內(nèi)膜巨噬細(xì)胞染色圖片，(C)為子宮內(nèi)膜T細(xì)胞染色圖片，(D)為子宮內(nèi)膜輔助性T細(xì)胞染色圖片，(E)為子宮內(nèi)膜殺傷性T細(xì)胞染色圖片，(F)為子宮內(nèi)膜調(diào)節(jié)性T細(xì)胞染色圖片，(G)為子宮內(nèi)膜未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞染色圖片，(H)為子宮內(nèi)膜成熟樹(shù)突狀細(xì)胞染色圖片。具體實(shí)施方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。如圖1所示，一種評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性的試劑盒，包括盒體1和設(shè)置在所述盒體1側(cè)面開(kāi)口處的盒蓋2，所述盒體1的底部和四周側(cè)壁設(shè)有隔熱板3，所述盒蓋2內(nèi)壁設(shè)有隔熱板3，在盒體1、盒蓋2的外端面上相對(duì)應(yīng)的分別設(shè)有磁性下鎖扣4與磁性上鎖扣5，所述盒體1內(nèi)部設(shè)有泡沫墊6和1份使用說(shuō)明書(shū)，所述泡沫墊6上設(shè)有2個(gè)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品、21瓶試劑、抗原修復(fù)粉劑23、pH試紙7、載玻片8和蓋玻片9，2個(gè)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品分別為陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品10和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品11，21瓶試劑分別為8瓶一抗儲(chǔ)存液12、1瓶二抗儲(chǔ)存液13、1瓶抗體稀釋液14、1瓶PBS片劑15、1瓶吐溫-2016、1瓶過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液17、1瓶非特異性蛋白阻斷粉劑18、1瓶顯色液儲(chǔ)存液19、1瓶顯色液稀釋液20、4瓶復(fù)染液21和1瓶封片劑22。所述泡沫墊6包括位于盒體1內(nèi)部靠上的第一泡沫墊61、位于盒體1內(nèi)部居中的第二泡沫墊62和位于盒體1內(nèi)部靠下的第三泡沫墊63，且所述第一泡沫墊61、第二泡沫墊62和第三泡沫墊63上下平行設(shè)置，所述第一泡沫墊61上開(kāi)設(shè)有6個(gè)分別放置pH試紙7、載玻片8、蓋玻片9、陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品10、陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品11和抗原修復(fù)粉劑23且與上述物品的長(zhǎng)度相適配的腔體611，在腔體611的長(zhǎng)度方向的壁體上并且在彼此對(duì)應(yīng)的位置各凹設(shè)有兩個(gè)指腔6111，所述第二泡沫墊62上開(kāi)有14個(gè)分別放置8瓶一抗儲(chǔ)存液12、二抗儲(chǔ)存液13、PBS片劑15、過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液17、非特異性蛋白阻斷粉劑18、顯色液儲(chǔ)存液19和封片劑22的圓形的凹槽，所述第三泡沫墊63上開(kāi)有7個(gè)分別放置抗體稀釋液14、吐溫-2016、顯色液稀釋液20和4瓶復(fù)染液21的圓形的凹槽。每個(gè)所述指腔6111形狀均為半球形所述陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品10為正常育齡婦女子宮內(nèi)膜組織石蠟塊，所述陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品11為不含一抗的5％BSA孵育的子宮內(nèi)膜組織石蠟塊。所述一抗儲(chǔ)存液12為100×抗人自然殺傷細(xì)胞表面分子CD56的抗體、100×抗人巨噬細(xì)胞表面分子CD68的抗體、100×抗人T細(xì)胞表面分子CD3的抗體、100×抗人輔助性T細(xì)胞表面分子CD4的抗體、100×抗人殺傷性T細(xì)胞表面分子CD8的抗體、100×抗人調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的抗體、100×抗人未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD1a的抗體、100×抗人成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD83的抗體，所述二抗儲(chǔ)存液13為100×辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG抗體，所述過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液17為30％v/v過(guò)氧化氫溶液，所述非特異性蛋白阻斷粉劑18為白蛋白粉，所述顯色液儲(chǔ)存液19為50×DAB溶液，所述復(fù)染液21為蘇木素，所述封片劑22為中性樹(shù)膠，所述抗原修復(fù)粉劑23為T(mén)ris/EDTA。所述陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品10為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品11為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述一抗儲(chǔ)存液12為黑色帽的白色PE塑料管，所述二抗儲(chǔ)存液13為黑色帽的白色PE塑料管，所述抗體稀釋液14為紅色帽的黑色PE塑料瓶，所述PBS片劑15為灰色帽的紅色PE塑料瓶，所述吐溫-2016為黃色帽的灰色PE塑料瓶，所述過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液17為綠色帽的黃色PE塑料管，所述非特異性蛋白阻斷粉劑18為藍(lán)色帽的綠色PE塑料瓶，所述顯色液儲(chǔ)存液19為紫色帽的藍(lán)色PE塑料管，所述顯色液稀釋液20為白色帽的紫色PE塑料瓶，所述復(fù)染液21為綠色帽的黑色PE塑料瓶，所述封片劑22為紅色帽的黃色PE塑料管。所述pH試紙7為100張，所述載玻片8為400張，所述蓋玻片9為400張，所述陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品10為1塊，7g，所述陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品11為1塊，7g，所述一抗儲(chǔ)存液12為8管，每管各50μL，所述二抗儲(chǔ)存液13為1管，300μL，所述抗體稀釋液14為1瓶，50mL，所述PBS片劑15為1瓶，15片，所述吐溫-2016為1瓶，10mL，所述過(guò)氧化物酶失活劑儲(chǔ)存液17為1管，5mL，所述非特異性蛋白阻斷粉劑18為1瓶，10g，所述顯色液儲(chǔ)存液19為1管，600μL，所述顯色液稀釋液20為1瓶，30mL，所述復(fù)染液21為4瓶，20mL/瓶，所述封片劑22為1管，10mL，所述抗原修復(fù)粉劑23分為20個(gè)試劑袋袋裝，每袋1.58g。一種如上任一項(xiàng)所述的試劑盒的使用方法，包括如下步驟：(1)工作液配制：片劑、粉劑溶解，儲(chǔ)存液稀釋如下：a、PBS片劑15溶解：將1片PBS片劑15溶于1000mL超純水中，得到1×PBS溶液，將1片PBS片劑15溶于1000mL超純水中，加500uL吐溫-2016，得到1×PBST溶液；b、非特異性蛋白阻斷粉劑18溶解：取0.5g白蛋白粉溶于10mL步驟(1)a所得1×PBST溶液中，得到5％v/v的非特異性蛋白阻斷劑工作液；c、抗原修復(fù)粉劑23溶解：取1袋1.58gTris/EDTA溶于1000mL超純水中，加入0.5mL吐溫-2016，用pH試紙7監(jiān)測(cè)溶液pH值，調(diào)整pH至9.0，得到抗原修復(fù)劑工作液；d、一抗儲(chǔ)存液12稀釋?zhuān)悍謩e取100×抗人自然殺傷細(xì)胞表面分子CD56的抗體、100×抗人巨噬細(xì)胞表面分子CD68的抗體、100×抗人T細(xì)胞表面分子CD3的抗體、100×抗人輔助性T細(xì)胞表面分子CD4的抗體、100×抗人殺傷性T細(xì)胞表面分子CD8的抗體、100×抗人調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的抗體、100×抗人未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD1a的抗體、100×抗人成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD83的抗體，加抗體稀釋液14稀釋100倍，得到一抗工作液；e、二抗儲(chǔ)存液13稀釋?zhuān)喝?00×辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG抗體，加抗體稀釋液14稀釋100倍，得到二抗工作液；f、過(guò)氧化物酶滅活劑儲(chǔ)存液17稀釋?zhuān)喝?0％v/v的過(guò)氧化氫溶液，加超純水稀釋10倍，得到3％v/v的過(guò)氧化物酶滅活劑工作液；(2)石蠟切片脫蠟：將取自活體的人體的子宮內(nèi)膜的待測(cè)樣本、陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品10和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品11的各8張切片先放入250mL二甲苯中浸泡10min，再放入另一份250mL二甲苯中浸泡5min，無(wú)水酒精與二甲苯等體積混合溶液中浸泡3min，得到脫蠟后切片；(3)水化：將步驟(2)所得脫蠟后切片，依次放入100％酒精浸泡2min，95％酒精浸泡2min，另一份95％酒精浸泡2min，80％酒精浸泡2min，然后用步驟(1)a所述的1×PBS溶液沖洗3min，得到水化后的切片；(4)內(nèi)源性過(guò)氧化物酶失活：將步驟(3)所得水化后的切片，甩去多余的液體，浸泡在步驟(1)f所得過(guò)氧化物酶滅活劑工作液中15min，再用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滅活后的切片；(5)抗原修復(fù)：將步驟(1)c所得抗原修復(fù)劑工作液放入耐高溫容器中，再將步驟(4)所得內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滅活后的切片置于其中，煮沸15min，放置室溫冷卻，然后用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到抗原修復(fù)后的切片；(6)封閉：將步驟(5)所得抗原修復(fù)后切片，甩去多余的液體，滴加步驟(1)b所得非特異性蛋白阻斷劑工作液，室溫孵育20min，得到非特異性蛋白封閉后的切片；(7)一抗孵育：將步驟(6)所得非特異性蛋白封閉切片，除陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品11外，待測(cè)樣本和陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品10的各8張切片均甩去步驟(1)b所得非特異性蛋白阻斷劑工作液，并分別滴加步驟(1)d所得一抗工作液，37℃水浴孵育60min，然后用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，然后用步驟(1)a所得1×PBST溶液沖洗3min，得到一抗后的切片；(8)二抗孵育：將步驟(7)所得一抗后的切片，甩去多余的液體，滴加步驟(1)e所得二抗工作液，37℃水浴孵育30min，甩去二抗工作液，然后使用步驟(1)a所得1×PBS溶液沖洗，每次3min，洗3次，得到二抗后的切片；(9)顯色：a、顯色液儲(chǔ)存液19稀釋?zhuān)喝?0×DAB溶液，加顯色液稀釋液20稀釋50倍，得到顯色液工作液；b、將步驟(8)所得二抗后的切片，甩去多余的液體，滴加步驟(9)a所得顯色液工作液進(jìn)行顯色，得到顯色后的切片；(10)復(fù)染、分化、返藍(lán)：將步驟(9)所得顯色后的切片，甩去顯色液工作液，滴加復(fù)染液21復(fù)染4min、1％v/v鹽酸酒精分化20s、1％v/v氨水中返藍(lán)30s，得到返藍(lán)后的切片；(11)脫水、透明化：將步驟(10)所得返藍(lán)后的切片，依次放入70％酒精浸泡2min、80％酒精浸泡2min、95％酒精浸泡2min、100％酒精浸泡2min，脫水后轉(zhuǎn)入二甲苯溶液浸泡3min，再轉(zhuǎn)入另一份二甲苯溶液10min，最后轉(zhuǎn)入另一份二甲苯溶液5min進(jìn)行透明化處理，得到透明化后的切片；(12)封片：將步驟(11)所得透明化后的切片，甩去多余的液體，用封片劑22封片，得到免疫組織化學(xué)染色切片，然后采用成像顯微鏡和病理圖片分析軟件分析結(jié)果，評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性是否異常。采用成像顯微鏡和病理圖片分析軟件評(píng)估子宮內(nèi)膜容受性是否異常，具體操作如下：采用成像顯微鏡采集不重疊的20個(gè)視野的200倍圖片；將所得8種免疫細(xì)胞的圖片導(dǎo)入病理圖片定量分析系統(tǒng)中進(jìn)行分析。在病理圖片定量分析系統(tǒng)中，設(shè)定細(xì)胞的大小為55～400像素，細(xì)胞核的蘇木素染色強(qiáng)度需大于0.15，系統(tǒng)綜合兩個(gè)指標(biāo)對(duì)所采集圖片中總細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別并計(jì)數(shù)；組織中陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)醒目的棕黃色，系統(tǒng)將顯示陽(yáng)性細(xì)胞棕黃色的光密度值，系統(tǒng)將大于此值的所有細(xì)胞識(shí)別為陽(yáng)性細(xì)胞并計(jì)數(shù)；根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率。將待測(cè)樣本的8種免疫細(xì)胞率與參考范圍進(jìn)行比較，進(jìn)而判斷待測(cè)樣本的子宮內(nèi)膜容受性。其中，自然殺傷細(xì)胞率參考范圍為0.97～21.15％；巨噬細(xì)胞率參考范圍為0.5～2.65％，T細(xì)胞率參考范圍為1.12～9.10％，輔助性T細(xì)胞率參考范圍為0.10～0.50％，殺傷性T細(xì)胞率參考范圍為0.81～5.45％，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞率參考范圍為0.05～0.26％，未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞率參考范圍為0.006～0.140％，成熟樹(shù)突狀細(xì)胞率參考范圍為0.07～4.01％。當(dāng)待測(cè)樣本的任一免疫細(xì)胞率超過(guò)其參考范圍時(shí)，提示該待測(cè)樣本的子宮內(nèi)膜容受性異常。如圖2所示，子宮內(nèi)膜免疫細(xì)胞定量檢測(cè)試劑盒在子宮內(nèi)膜容受性評(píng)估中的應(yīng)用，其中，(A)為自然殺傷細(xì)胞，其細(xì)胞核周?chē)尸F(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，細(xì)胞率為5.82％；(B)為巨噬細(xì)胞，其細(xì)胞核周?chē)尸F(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，細(xì)胞率為0.7％；(C)為T(mén)細(xì)胞，其細(xì)胞核周?chē)尸F(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，細(xì)胞率為2.19％；(D)為輔助性T細(xì)胞，其細(xì)胞核周?chē)尸F(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，細(xì)胞率為0.3％；(E)為殺傷性T細(xì)胞，其細(xì)胞核周?chē)尸F(xiàn)棕黃色，均勻分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，細(xì)胞率為1.64％；(F)為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，其細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色，零星分布于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，細(xì)胞率為0.02％；(G)為未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞的，其細(xì)胞核周?chē)尸F(xiàn)棕黃色，分布于靠近腺體的位置，細(xì)胞率為0.044％；(H)為成熟樹(shù)突狀細(xì)胞，其細(xì)胞核周?chē)尸F(xiàn)棕黃色，并且細(xì)胞呈現(xiàn)兩種分布方式，即單個(gè)細(xì)胞分布以及成簇分布，細(xì)胞率為3.04％。其中，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞率為0.02％，低于參考范圍0.05～0.26％，提示該樣本的子宮內(nèi)膜容受性異常。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。