本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種小葉蓮藥材的薄層色譜鑒定方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：
中草藥在我國藥用歷史悠久，是由復(fù)雜多樣的化學(xué)成分組成的，這些結(jié)構(gòu)多樣的化學(xué)成分是其療效的物質(zhì)基礎(chǔ)。通過系統(tǒng)而深入的中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，建立符合中醫(yī)藥特點的現(xiàn)代質(zhì)量評價體系可以有效控制中藥材的質(zhì)量，保證其臨床安全有效。攻克中藥質(zhì)量分析與控制的難題，改進(jìn)中藥現(xiàn)有質(zhì)量控制方法已成為藥學(xué)科研工作者積極研究的課題。小葉蓮為小檗科植物鬼臼的干燥成熟果實，具有調(diào)經(jīng)活血，用于血瘀經(jīng)閉，難產(chǎn)，死胎、胎盤不下，有很好的藥用價值，但如何通過薄層色譜法對小葉蓮藥材進(jìn)行鑒定，在2015版《中國藥典》中，小葉蓮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的薄層色譜鑒別法以鬼臼毒素為對照品進(jìn)行定性分析，鬼臼毒素為鬼臼類植物（包括鬼臼屬、桃兒七屬、山荷葉屬、八角蓮屬）所共有的活性成分，缺乏專屬性。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和對小葉蓮的進(jìn)一步研究，特別是對小葉蓮藥材深入的化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)，8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素不僅含量很高，而且分離制備方法簡單，可以滿足產(chǎn)品開發(fā)與藥品質(zhì)量控制的需求。截至目前8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素僅存在于小葉蓮藥材中，為最大限度地表征小葉蓮所具有的豐富的化學(xué)信息（異戊烯基化黃酮類化合物和芳基萘內(nèi)酯型木脂素），因此，采用薄層色譜鑒定方法僅對鬼臼毒素進(jìn)行鑒定，已不能充分體現(xiàn)小葉蓮藥材中的化學(xué)信息，而且現(xiàn)有的薄層色譜鑒定不能對8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素同時進(jìn)行鑒定，那么，如何解決利用薄層色譜同時對8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素進(jìn)行檢測，以保證小葉蓮藥材的質(zhì)量是必須解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對上述情況，為解決現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種小葉蓮藥材的薄層色譜鑒定方法及其應(yīng)用，可有效解決小葉蓮藥材的鑒定問題。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，由以下步驟實現(xiàn)：1）制備供試品溶液：取小葉蓮藥材粉末4.5-5.5g，加乙酸乙酯8-12ml，超聲處理18-22min，濾過，濾液減壓濃縮至0.9-1.1ml，作為供試品溶液；2）制備對照品溶液：取8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素對照品，分別用乙酸乙酯溶解成每1ml含1.5mg的8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素溶液和每1ml含0.5mg的鬼臼毒素溶液，作為對照品溶液；3）薄層色譜測定：分別取上述兩種溶液各5μl，點于同一硅膠GF254薄層色譜板上，以石油醚與乙酸乙酯體積比為3:2作為展開劑，展開，晾干，置254nm紫外燈下檢視，當(dāng)供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，再噴以體積濃度為10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，從而實現(xiàn)利用薄層色譜對小葉蓮藥材的鑒定。本發(fā)明方法操作簡便、快速、穩(wěn)定可靠、準(zhǔn)確、專屬性強、薄層色譜中各斑點分離效果好、有效用于小葉蓮藥材及提取物的鑒定，為小葉蓮藥材鑒定和進(jìn)一步開發(fā)提供技術(shù)保障，經(jīng)濟和社會效益巨大。具體實施方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的具體實施方式作進(jìn)一步詳細(xì)說明。實施例11）制備供試品溶液：取小葉蓮藥材粉末5g，加乙酸乙酯10ml，超聲處理20min，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液；2）制備對照品溶液：取8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素對照品，分別用乙酸乙酯溶解成每1ml含1.5mg的8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素溶液和每1ml含0.5mg的鬼臼毒素溶液，作為對照品溶液；3）薄層色譜測定：分別取上述兩種溶液各5μl，點于同一硅膠GF254薄層色譜板上，以石油醚與乙酸乙酯體積比為3:2作為展開劑，展開，晾干，置254nm紫外燈下檢視，當(dāng)供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，再噴以體積濃度為10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，從而實現(xiàn)利用薄層色譜對小葉蓮藥材的鑒定。實施例21）取采集自甘肅省碌曲縣的小葉蓮藥材粉末5.08g，加乙酸乙酯10ml，超聲處理20min，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液；2）另取8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素對照品，分別加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每0.5ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；3）吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層色譜板上，以石油醚與乙酸乙酯體積比為3:2作為展開劑，展開，晾干，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以體積濃度為10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，從而實現(xiàn)利用薄層色譜對小葉蓮藥材的鑒定。實施例31）取采集自西藏林芝縣的小葉蓮藥材粉末4.97g，加乙酸乙酯10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液；2）另取8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素對照品，分別加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；3）吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層色譜板上，以石油醚與乙酸乙酯體積比為3:2作為展開劑，展開，晾干，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以體積濃度為10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，從而實現(xiàn)利用薄層色譜對小葉蓮藥材的鑒定。實施例41）取采集自云南德欽縣的小葉蓮藥材粉末5.05g，加乙酸乙酯10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液；2）另取8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素對照品，分別加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；3）吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層色譜板上，以石油醚與乙酸乙酯體積比為3:2作為展開劑，展開，晾干，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以體積濃度為10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，從而實現(xiàn)利用薄層色譜對小葉蓮藥材的鑒定。實施例51）取采集自四川省康定縣的小葉蓮藥材粉末5.03g，加乙酸乙酯10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液；2）另取8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素對照品，分別加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；3）吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層色譜板上，以石油醚與乙酸乙酯體積比為3:2作為展開劑，展開，晾干，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，再噴以體積濃度為10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，從而實現(xiàn)利用薄層色譜對小葉蓮藥材的鑒定。本發(fā)明方法經(jīng)實地應(yīng)用和測試，與實際測試結(jié)果相一致，表明方法穩(wěn)定可靠，不但可以用于小葉蓮藥材的鑒定，而且還可有效用于對小葉蓮提取物的檢測，所述的小葉蓮提取物為小葉蓮體積濃度60%以上甲醇提取物、或體積濃度60%以上乙醇提取物、或丙酮提取物、或二氯甲烷提取物。具體是：小葉蓮甲醇提取物為小葉蓮藥材經(jīng)10倍量的60%以上甲醇回流提?。ɑ虺曁崛。?，得到甲醇提取物。小葉蓮乙醇提取物為小葉蓮藥材經(jīng)10倍量的60%以上乙醇（或超聲提?。?，得到乙醇提取物。小葉蓮丙酮提取物為小葉蓮藥材經(jīng)10倍量的60%以上丙酮回流提取（或超聲提?。?，得到丙酮提取物。小葉蓮二氯甲烷提取物為小葉蓮藥材經(jīng)10倍量的60%以上二氯甲烷回流提?。ɑ虺曁崛。?，得到二氯甲烷提取物。上述提取物利用薄層色譜鑒定的方法是：取小葉蓮提取物1g，加乙酸乙酯10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液減壓濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和鬼臼毒素對照品，分別加乙酸乙酯制成每1ml含1.5mg和每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層色譜板上，以石油醚-乙酸乙酯（3:2，v/v）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。再噴以10%(v/v)的硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。由上述可知，本發(fā)明提供了一種利用薄層色譜法同時鑒定小葉蓮藥材中異戊烯基化黃酮類化合物8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和芳基萘內(nèi)酯型木脂類化合物素鬼臼毒素的方法，該方法操作簡便、快速、專屬性強、薄層色譜中各斑點分離效果良好、可有效用于小葉蓮藥材及其提取物的質(zhì)量鑒定，是申請人經(jīng)科學(xué)研究、試驗及對實踐總結(jié)的創(chuàng)造性勞動結(jié)晶，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法專屬性強，建立了小葉蓮藥材中異戊烯基化黃酮類化合物8,2′-二異戊烯基-3-甲氧基槲皮素和芳基萘內(nèi)酯型木脂類化合物鬼臼毒素同時鑒定的薄層色譜法；現(xiàn)有方法中薄層色譜展開劑為環(huán)己烷-水飽和正丁醇-甲酸（6.5:2.5:0.8）的上層溶液，展開劑涉及到三種溶劑且需要2次分層操作（時間為約為10min），展開時間為29min（10cm×10cm,展距為8cm），而本發(fā)明方法中薄層色譜展開劑為石油醚-乙酸乙酯（3:2），兩種溶劑直接按體積比混合，避免了繁瑣的萃取分層操作,展開時間為25min（10cm×10cm,展距為8cm）。在現(xiàn)有薄層色譜條件下，整個薄層鑒定色譜操作約為43分鐘。在本發(fā)明薄層色譜條件下，整個薄層鑒定色譜操作約為29分鐘。比原鑒定方法大大提高了工作效率，為有效控制小葉蓮藥材的質(zhì)量，保證臨床安全有效和更好的開發(fā)應(yīng)用提供了技術(shù)保障，具有很強的實用性，開辟了小葉蓮藥材鑒定的新途徑，經(jīng)濟和社會效益巨大。