本發(fā)明屬于納米材料領(lǐng)域，更具體地，涉及一種表面修飾的納米通道膜及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

金屬納米顆粒自身具有獨(dú)特的光電子性能，較高的比表面積和生物相容性；通過(guò)改變納米顆粒的大小、形狀、以及環(huán)境，可以調(diào)控自身的氧化還原性、熒光/猝滅性、導(dǎo)電性、表面功能化和表面等離子體共振等性質(zhì)；由于以上優(yōu)良的物理化學(xué)性質(zhì)，近年來(lái)引起了人們極大的重視。2014年chanbeumpark制備出了修飾有金納米顆粒的ito膜，該薄膜通過(guò)金納米顆粒修飾光敏染料，用于進(jìn)行光能收集。該實(shí)驗(yàn)中生成的金納米顆粒附著于平面固體基質(zhì)表面，應(yīng)用方面具有限制性。

在過(guò)去的幾十年里，簡(jiǎn)單的響應(yīng)性納米材料蓬勃發(fā)展。人們通過(guò)研究形態(tài)，材料屬性和表面功能多樣化的納米孔道，相繼制備出了溫度、ph、電壓、光和離子響應(yīng)性的功能納米材料，而多功能納米孔道的研究目前尚處于初級(jí)起步階段。2014年garyw.rubloff團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)出了一種孔道兩端修飾有功能基團(tuán)，中間是裸露孔道內(nèi)壁的材料，然而該材料中同一修飾物在孔道內(nèi)的分布是連續(xù)均勻的，它限制了材料的多功能化及其在生物檢測(cè)等方面的應(yīng)用。目前，并沒(méi)有其它工作能夠在孔道內(nèi)表面修飾類(lèi)似生物孔道中蛋白質(zhì)分布的非連續(xù)的、獨(dú)立的、零維的納米顆粒。這對(duì)于設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)出更加復(fù)雜、更接近于真實(shí)生物孔道的多孔納米材料提出了一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的以上缺陷或改進(jìn)需求，本發(fā)明提供了一種表面修飾的納米通道膜，其目的在于在納米通道內(nèi)修飾單分散性的金屬納米顆粒，從而制備出更接近生物孔道結(jié)構(gòu)的納米通道。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，按照本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種表面修飾的納米通道膜，所述納米通道膜的厚度為12μm～60μm，具有直徑為10nm～600nm，平均密度為10⁷/cm²～10⁹/cm²的納米通道，所述納米通道表面修飾有粒徑為5nm～100nm，密度為10⁵/m²～10⁹/m²單分散性的納米顆粒，所述納米顆粒為金，銀，鈀，鉑或釕中的一種或多種。

優(yōu)選地，所述納米通道膜的材料為陽(yáng)極氧化鋁、聚對(duì)苯二甲酸乙二酯、聚碳酸酯或聚酰亞胺。

作為進(jìn)一步優(yōu)選地，所述納米通道膜的材料為陽(yáng)極氧化鋁。

優(yōu)選的，所述納米顆粒的粒徑為30nm～80nm，密度為10⁷/m²～10⁸/m²。

按照本發(fā)明的另一方面，提供了一種上述納米通道膜的制備方法，包括以下步驟：

(1)活化處理納米通道膜，所述納米通道膜的厚度為12μm～60μm，具有直徑為10nm～600nm，密度為10⁷/cm²～10⁹/cm²的納米通道；

(2)將所述步驟(1)獲得的納米通道膜置于濾膜的頂部，在所述納米通道膜的上表面添加濃度大于0.02mg/ml的鹽酸多巴胺溶液，用大于-0.01mpa的壓力在濾膜的底部抽濾，使得所述納米通道的內(nèi)表面附著厚度為1nm～60nm的鹽酸多巴胺溶液；

(3)將所述步驟(2)獲得的納米通道膜浸潤(rùn)濃度為0.01mm～100mm的前驅(qū)體溶液，使得所述前驅(qū)體與納米通道的內(nèi)表面的鹽酸多巴胺在避光條件下充分反應(yīng)，生成單分散性的納米顆粒，獲得所述表面修飾的納米通道膜，其中，所述前驅(qū)體為ag⁺、aucl4^-、pdcl4^-、ptcl6^2-、cd²⁺或ru²⁺。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中抽濾所用的壓力為-0.01mpa～-0.1mpa。

優(yōu)選地，所述步驟(1)中活化處理的具體方法為，用濃度為1mm～ 10mm的酸溶液處理納米通道膜1min～5min，使所述納米通道的內(nèi)表面變得粗糙。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中濾膜的孔徑為0.22μm～0.8μm，厚度為0.1mm～0.9mm。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中抽濾的具體方法為，先在濾膜的底部抽濾，使得納米通道膜的上表面的鹽酸多巴胺溶液充分填充于納米通道內(nèi)部，再繼續(xù)真空抽濾1min～30min除去多余的鹽酸多巴胺溶液，使得納米通道的內(nèi)表面的鹽酸多巴胺溶液的厚度為1nm～60nm。

優(yōu)選地，在所述(2)和步驟(3)之間，還包括將所述納米通道膜翻轉(zhuǎn)，并在所述納米通道膜的表面添加濃度大于0.02mg/ml的鹽酸多巴胺溶液；用大于-0.01mpa的壓力抽濾，使得所述納米通道表面附著厚度為1nm～60nm的鹽酸多巴胺溶液。

優(yōu)選地，所述前驅(qū)體溶液為第i前驅(qū)體溶液，所述納米顆粒為第i納米顆粒，i為1到n的整數(shù)，n為大于1的整數(shù)，在所述步驟(3)中，在所述納米通道膜的表面添加濃度為0.01mm～100mm的第一前驅(qū)體溶液，使得所述第一前驅(qū)體與納米通道表面的鹽酸多巴胺在避光條件下充分反應(yīng)，生成單分散性的第一納米顆粒，然后重新執(zhí)行步驟(2)-步驟(3)，使得所述第二前驅(qū)體與納米通道表面的鹽酸多巴胺在避光條件下充分反應(yīng)，生成單分散性的第二納米顆粒，…直至生成單分散性的第n納米顆粒，獲得所述表面修飾的納米通道膜。

優(yōu)選地，在所述步驟(3)之后還包括，清洗并干燥所述表面修飾的納米通道膜。

優(yōu)選地，所述鹽酸多巴胺溶液的濃度為0.2mg/ml～20mg/ml。

優(yōu)選地，所述前驅(qū)體溶液的濃度為0.1mm～10mm。

優(yōu)選地，所述步驟(3)中的反應(yīng)溫度為5℃～60℃，反應(yīng)時(shí)間為10min～60min。

按照本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述納米通道膜在分子檢測(cè)中的應(yīng)用。

總體而言，通過(guò)本發(fā)明所構(gòu)思的以上技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比，由于利用了抽濾的方法，使得鹽酸多巴胺與前驅(qū)體的氧化還原反應(yīng)在納米通道內(nèi)進(jìn)行，從而生成單分散性的金屬納米顆粒，能夠取得下列有益效果：

1、利用了抽濾的方法，使得鹽酸多巴胺與前驅(qū)體的氧化還原反應(yīng)在納米通道上進(jìn)行，實(shí)現(xiàn)了納米孔道內(nèi)部同一修飾物的非連續(xù)分布；

2、通過(guò)調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度、鹽酸多巴胺溶液的濃度、真空抽濾方式、真空抽濾時(shí)間等條件，可以使金屬納米顆粒的尺寸、密度、異質(zhì)分布等特點(diǎn)實(shí)現(xiàn)人為可控化；

3、裸露的金屬納米顆?？梢院蛶€基相結(jié)合，而孔道內(nèi)壁的羥基能夠與氨基反應(yīng)，這種現(xiàn)象為實(shí)現(xiàn)選擇性表面功能化，以及同一納米孔道的多功能化提供了新的思路；

4、優(yōu)選通過(guò)將納米通道與多種前驅(qū)體溶液反應(yīng)，能在納米通道內(nèi)制備不同種類(lèi)的金屬納米顆粒，可以仿生生物孔道內(nèi)多種蛋白質(zhì)突起，不同功能化的復(fù)雜環(huán)境；在催化領(lǐng)域，能形成多反應(yīng)物共同催化的功能；同時(shí)有效地提高生物分子檢測(cè)的靈敏度以及光電信號(hào)轉(zhuǎn)化的效率；

5、由于生物孔道內(nèi)壁具有分散的蛋白質(zhì)納米突起，能夠協(xié)助生物孔道選擇性的完成物質(zhì)和能量的傳遞；修飾有納米顆粒的微納米孔道，能夠仿生生物孔道內(nèi)真實(shí)的環(huán)境，對(duì)于研究生命體物質(zhì)和能量的轉(zhuǎn)移過(guò)程十分必要。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為實(shí)施例1中樣品膜片檢測(cè)的結(jié)果；

圖3為實(shí)施例2-5中所得樣品膜片檢測(cè)的結(jié)果；

圖4為對(duì)比例，實(shí)施例1，實(shí)施例20以及實(shí)施例21所得樣品膜片檢測(cè) 的結(jié)果；

圖5為實(shí)施例22所得樣品膜片檢測(cè)的結(jié)果；

在所有附圖中，相同的附圖標(biāo)記用來(lái)表示相同的元件或結(jié)構(gòu)，其中：1-氯金酸，2-金納米顆粒，3-多巴胺，4-aao孔道。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。此外，下面所描述的本發(fā)明各個(gè)實(shí)施方式中所涉及到的技術(shù)特征只要彼此之間未構(gòu)成沖突就可以相互組合。

本發(fā)明提供了一種表面修飾的納米通道膜，所述納米通道膜的材料為表面具有羥基，巰基或羧基等易于表面修飾的基團(tuán)的材料，例如陽(yáng)極氧化鋁、聚對(duì)苯二甲酸乙二酯、聚碳酸酯或聚酰亞胺，納米通道膜的厚度為12μm～60μm，具有直徑為10nm～600nm，平均密度為10⁷/cm²～10⁹/cm²的納米通道，所述納米通道的內(nèi)表面修飾有粒徑為5nm～100nm，密度為10⁵/m²～10⁹/m²(納米顆粒數(shù)/納米通道的內(nèi)表面積)的單分散性的納米顆粒，納米顆粒的粒徑優(yōu)選為30nm～80nm，密度優(yōu)選為10⁷/m²～10⁸/m²，所述納米顆粒為金，銀，鈀，鉑或釕中的一種或多種。該納米通道膜能夠仿生生物孔道內(nèi)真實(shí)的環(huán)境，并用于進(jìn)行分子檢測(cè)。

該納米通道膜的制備方法包括以下步驟：

(1)選取納米通道膜并對(duì)其進(jìn)行活化處理，所述納米通道膜的厚度為12μm～60μm，具有直徑為10nm～600nm，密度為10⁷/cm²～10⁹/cm²的納米通道；活化處理的目地是讓納米通道表面變得粗糙更容易附著納米顆粒，具體方法可用酸或堿進(jìn)行處理，例如用濃度為1mm～10mm的酸溶液處理納米通道膜1min～5min即可使之活化；

(2)將所述步驟(1)獲得的納米通道膜置于孔徑為0.22μm～0.8μm， 厚度為0.1mm～0.9mm的濾膜上，并在所述納米通道膜的表面添加濃度大于0.02mg/ml(優(yōu)選0.2mg/ml～20mg/ml)的鹽酸多巴胺溶液；用大于-0.01mpa(優(yōu)選-0.01mpa～-0.1mpa)的壓力抽濾使得納米通道膜表面的鹽酸多巴胺溶液充分填充于納米通道內(nèi)部，再真空抽濾1min～30min除去多余的鹽酸多巴胺溶液，使得納米通道表面的鹽酸多巴胺溶液的厚度為1nm～60nm；

(3)5℃～60℃下，在所述納米通道膜的表面添加濃度為0.01mm～100mm(0.1mm～10mm)的前驅(qū)體溶液，使得納米通道膜充分浸潤(rùn)前驅(qū)體溶液，并令所述前驅(qū)體與納米通道表面的鹽酸多巴胺在避光條件下反應(yīng)10min～60min，生成單分散性的納米顆粒，獲得所述表面修飾的納米通道膜；其中，所述前驅(qū)體為ag⁺、aucl4^-、pdcl4^-、ptcl6^2-、cd²⁺或ru²⁺；

(4)清洗并干燥所述表面修飾的納米通道膜。

其中，納米通道表面生成的納米顆粒的粒徑與步驟(2)中抽濾的時(shí)間相關(guān)，抽濾的時(shí)間越長(zhǎng)，納米通道表面的鹽酸多巴胺溶液的厚度則越薄，納米顆粒生長(zhǎng)的空間則越大，生成的納米顆粒的粒徑則越大。

同理，當(dāng)多巴胺溶液濃度變小時(shí)，由于納米通道表面的鹽酸多巴胺溶液的厚度變薄，因此生成的納米顆粒的直徑則增大，但同時(shí)由于鹽酸多巴胺溶液濃度變小，納米顆粒的生長(zhǎng)點(diǎn)變少，納米顆粒的密度也變小。

此外，步驟(3)中的反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間可以影響生成的納米顆粒的密度，反應(yīng)溫度越高，時(shí)間越長(zhǎng)，納米顆粒的密度則越大。

如果采用雙面抽濾的方法，例如在所述(2)和步驟(3)之間，將所述納米通道膜翻轉(zhuǎn)，并在所述納米通道膜的表面添加濃度大于0.02mg/ml的鹽酸多巴胺溶液；用大于-0.01mpa的壓力抽濾，使得所述納米通道表面附著厚度為1nm～60nm的鹽酸多巴胺溶液，可以使得納米通道表面附著的鹽酸多巴胺溶液的厚度不均，從而生成具有不同粒徑分布的納米顆粒。多種不同粒徑的納米顆粒存在，將在孔道內(nèi)產(chǎn)生兩種不同的有效截面積， 并形成對(duì)于兩種不同大小生物分子的匹配和相應(yīng)的特異性檢測(cè)。

如果需要在納米通道表面生成多種納米顆粒，可將前驅(qū)體溶液設(shè)置為第i前驅(qū)體溶液，所述納米顆粒設(shè)置為第i納米顆粒，n為納米顆粒的種類(lèi)數(shù)，為大于1的整數(shù)，i為1到n的整數(shù)，在所述步驟(3)中，在所述納米通道膜的表面添加濃度為0.01mm～100mm的第一前驅(qū)體溶液，使得所述第一前驅(qū)體與納米通道表面的鹽酸多巴胺在避光條件下充分反應(yīng)，生成單分散性的第一納米顆粒，然后重新執(zhí)行步驟(2)-步驟(3)，使得所述第二前驅(qū)體與納米通道表面的鹽酸多巴胺在避光條件下充分反應(yīng)，生成單分散性的第二納米顆粒，…直至生成單分散性的第n納米顆粒，獲得所述表面修飾的納米通道膜。異質(zhì)納米顆粒的存在能夠?yàn)槲⒓{米孔道提供可修飾的不同材質(zhì)界面。首先，在催化應(yīng)用上，不同貴金屬納米顆粒共存能夠用于非均相催化。其次，通過(guò)改變共價(jià)鍵的結(jié)合方式，能夠在微納米孔道接枝不同生物分子靶標(biāo)。在微納米孔道內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)多生物分子同時(shí)檢測(cè)。此外，異質(zhì)納米顆粒的存在能夠在孔道內(nèi)形成不同的功能區(qū)域，能夠應(yīng)用多種物質(zhì)和能量形式在孔道內(nèi)傳遞過(guò)程。

對(duì)比例

取圓形的陽(yáng)極氧化鋁膜片(aao)膜片，其直徑為25mm，厚度為60μm，膜片上的孔道直徑為40nm～70nm，平均密度為10⁷/cm²～10⁹/cm²。

配置12％的鹽酸溶液，先取1ml鹽酸溶液鋪于容器底部，在溶液表面小心放入陽(yáng)極氧化鋁膜片后，再將2ml鹽酸溶液滴加到膜片表面，超聲2min使膜片上的孔道活化，取出膜片用去離子水沖洗數(shù)遍，再放入真空抽濾裝置中，用去離子水抽洗至膜片內(nèi)/外表面均無(wú)鹽酸溶液的殘留物，膜片干燥，備用。

實(shí)施例1

(1)首先配置12％的鹽酸溶液，先取1ml鹽酸溶液鋪于容器底部，在溶液表面小心放入陽(yáng)極氧化鋁膜片后，再將2ml鹽酸溶液滴加到膜片表面， 超聲2min，取出膜片用去離子水沖洗數(shù)遍，再放入真空抽濾裝置中，用去離子水抽洗至膜片內(nèi)/外表面均無(wú)鹽酸溶液的殘留物，膜片干燥，備用。

(2)模板孔道內(nèi)表面修飾鹽酸多巴胺溶液

用分析天平稱取少量的鹽酸多巴胺試劑，放入已滅菌的5ml離心管中，加去離子水密封超聲片刻使之完全溶解(鹽酸多巴胺溶液的濃度為2mg/ml)。

將經(jīng)過(guò)鹽酸處理的陽(yáng)極氧化鋁膜片(aao)置于混合纖維樹(shù)脂濾膜(濾膜的孔徑為0.45μm，厚度為0.34mm)上，打開(kāi)真空泵，至真空度為-0.1mpa，用移液槍將制備好的鹽酸多巴胺溶液加于aao膜表面，使鹽酸多巴胺依賴其自身的黏附性附著于aao孔道的內(nèi)表面，抽濾持續(xù)20min，當(dāng)溶液抽濾結(jié)束后再真空加抽1min，關(guān)閉真空泵。

(3)孔道內(nèi)金納米顆粒的生成

先取少量的1mm氯金酸溶液置于容器底部，將aao膜片放在氯金酸液面上，在膜片表面再覆蓋數(shù)滴的氯金酸溶液，超聲處理片刻，錫箔紙包裹避光反應(yīng)30min。

(4)所得樣品的抽洗及保存

用鑷子謹(jǐn)慎取出步驟四中氧化還原反應(yīng)后的aao膜片，用去離子水沖洗數(shù)遍，放入抽濾裝置中，用去離子水抽洗至無(wú)氯金酸溶液殘留，樣品干燥，保存，表征待用。獲得的aao膜片的縱截面結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示；其中，1為氯金酸，2為金納米顆粒，3為多巴胺，4為aao孔道?？梢钥闯?，氯金酸與通道內(nèi)表面的多巴胺溶液反應(yīng)，被多巴胺還原為金納米顆粒。金納米顆粒的生長(zhǎng)受到微納米孔道限制，從而在微納米孔道生成分散的，三維在納米尺度的金納米顆粒。

將實(shí)驗(yàn)得到的aao膜片用sem測(cè)試其表面和側(cè)截面，如圖2所示，其表面圖中可觀察到：修飾金納米顆粒后的aao膜片其孔道的上(圖2a)、下(圖2b)端口均保持通暢，并未被金納米顆粒所屏蔽堵死；其側(cè)截面圖 中(圖2c)發(fā)現(xiàn)：直徑為30nm～50nm，密度為10⁶/m²～10⁷/m²(納米顆粒個(gè)數(shù)/孔道的比表面積)的金納米顆粒在孔道內(nèi)壁上呈單分散、獨(dú)立、零維分布。

實(shí)施例2

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，步驟(3)中的環(huán)境溫度由實(shí)施例1中20℃升為50℃，其sem表征結(jié)果(圖3a)與實(shí)施例1中的結(jié)果相似，只是孔道內(nèi)修飾的金納米顆粒的密度增大為10⁷/m²～10⁸/m²(納米顆粒個(gè)數(shù)/孔道內(nèi)的表面積)。

該實(shí)施例證明梯度增加環(huán)境溫度，微納米孔道內(nèi)金納米顆粒的密度將逐漸增大。通過(guò)調(diào)整環(huán)境溫度能夠調(diào)節(jié)孔道內(nèi)金納米顆粒密度。

實(shí)施例3

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，步驟三中修飾鹽酸多巴胺溶液后的真空抽濾時(shí)間由實(shí)施例1中的1min變?yōu)?0min，其sem表征結(jié)果(圖3c)與實(shí)施例1中的結(jié)果相似，但是孔道內(nèi)修飾的金納米顆粒的密度沒(méi)有發(fā)生變化，金納米顆粒尺寸變大，變化范圍為5nm～65nm。

這是由于，當(dāng)多巴胺附著在微納米孔道內(nèi)，由于孔道內(nèi)表面的粗糙，形成突起并成為最終的金納米顆粒的生長(zhǎng)點(diǎn)。在微納米孔道，孔道內(nèi)壁限制了顆粒生長(zhǎng)。同時(shí)，多巴胺在納米通道表面的厚度將改變孔道內(nèi)徑。當(dāng)抽濾時(shí)間增加，多巴胺變薄，內(nèi)徑變大，所獲得顆粒的尺寸較大。

該實(shí)施例證明梯度增加抽濾時(shí)間，微納米孔道內(nèi)金納米顆粒的尺寸將逐漸增大。通過(guò)調(diào)整多巴胺的抽濾時(shí)間能夠調(diào)節(jié)孔道內(nèi)金納米顆粒大小。

實(shí)施例4

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，步驟二中鹽酸多巴胺溶液的濃度由實(shí)施例1中的2mg/ml變?yōu)?0mg/ml，其sem表征結(jié)果(圖3b)與實(shí)施例1中的結(jié)果相似，但是孔道內(nèi)修飾的金納米顆粒的尺寸變小，約為10nm～30nm，密度增大為10⁸/m²～10⁹/m²。

該實(shí)施例證明梯度增加多巴胺溶液的濃度，微納米孔道內(nèi)金納米顆粒的密度將逐漸增大，顆粒尺寸逐漸減小。通過(guò)調(diào)整多巴胺溶液的濃度能夠調(diào)節(jié)孔道內(nèi)金納米顆粒密度和顆粒大小。

實(shí)施例5

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，其真空抽濾方式不同，即步驟三中單面抽濾修飾鹽酸多巴胺溶液后(即抽濾持續(xù)20min，當(dāng)溶液抽濾結(jié)束后再真空加抽1min)，小心取下膜片，將其上下面翻轉(zhuǎn)，然后重復(fù)步驟三過(guò)程。翻轉(zhuǎn)后，在抽濾條件下繼續(xù)滴加鹽酸多巴胺溶液，鹽酸多巴胺溶液抽濾時(shí)間持續(xù)20min，并在抽濾結(jié)束后再真空抽濾1min。其sem表征結(jié)果(圖3d，其中粗線條標(biāo)記為大顆粒，細(xì)線條標(biāo)記為小顆粒)與實(shí)施例1中的結(jié)果相似，但是孔道內(nèi)修飾的金納米顆粒的尺寸出現(xiàn)兩種不同顆粒尺寸分布區(qū)間，其中較大顆粒尺寸分布區(qū)間為60nm～80nm，較小顆粒尺寸分布區(qū)間為20nm～40nm。

這是由于當(dāng)多巴胺附著在微納米孔道內(nèi)，由于孔道內(nèi)表面的粗糙，形成突起并成為最終的金納米顆粒的生長(zhǎng)點(diǎn)。當(dāng)翻轉(zhuǎn)后再次抽濾，原有的生長(zhǎng)點(diǎn)的多巴胺厚度將增大，所產(chǎn)生的顆粒尺寸較小。同時(shí)，原先生長(zhǎng)點(diǎn)未覆蓋的孔道表面將產(chǎn)生新的生長(zhǎng)點(diǎn)，其附著的多巴胺厚度較小，所產(chǎn)生的顆粒尺寸較大。因此，最終在微納米孔道內(nèi)形成兩種不同納米顆粒尺寸分布區(qū)間。

該實(shí)施例證明通過(guò)雙面交替抽濾的方式，能夠在孔道內(nèi)修飾具有不同顆粒尺寸分布的金納米顆粒。當(dāng)微納米孔道應(yīng)用在生物分子檢測(cè)中，當(dāng)孔道的有效截面積與將檢測(cè)生物分子匹配時(shí)，能夠產(chǎn)生特異性檢測(cè)。在微納米孔道內(nèi)金納米顆粒修飾的存在，將改變孔道內(nèi)有效截面積。兩種不同粒徑分布的金納米顆粒存在，將在孔道內(nèi)產(chǎn)生兩種不同的有效截面積，并形成對(duì)于兩種不同大小生物分子的匹配和相應(yīng)的特異性檢測(cè)。

實(shí)施例6

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，氧化鋁模板的孔道直徑為20～30nm。

實(shí)施例7

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，氧化鋁模板的孔道直徑為80～100nm。

實(shí)施例8

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，氧化鋁模板的孔道直徑為120～150nm。

觀察實(shí)施例6-8，與實(shí)施例1中的結(jié)果相似，在不同孔徑分布模板內(nèi)成功修飾了金納米顆粒。但是當(dāng)氧化鋁模板的孔徑逐漸增大時(shí)，顆粒的尺寸并未增大。因此通過(guò)改變微納米孔道的孔徑大小，能夠調(diào)控納米顆粒與孔道內(nèi)壁之間的空間大小。

實(shí)施例9

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，采用同等濃度硝酸銀溶液代替實(shí)施例1的步驟(3)中所采用的氯金酸水溶液，其sem表征結(jié)果與實(shí)施例1中的結(jié)果相似，孔道內(nèi)分布大量納米銀顆粒。

實(shí)施例10

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，以同樣濃度的cdi2水溶液取代氯金酸水溶液，獲得修飾有cd納米顆粒的aao膜片。

實(shí)施例11

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，以同樣濃度的palladium(ii)[1,3-bis(diphenylphosphino)propane]-bis(benzonitrile)-bis-tetrafluoroborate]水溶液取代氯金酸水溶液，獲得修飾有pd納米顆粒的aao膜片。

實(shí)施例12

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，以同樣濃度的dichloro(1,5-cyclooctadiene)platinum(ii)水溶液取代氯金酸水溶液，獲得修飾 有pt納米顆粒的aao膜片。

實(shí)施例13

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例1，區(qū)別在于，以同樣濃度的bis(2-methylallyl)(1,5-cyclooctadiene)ruthenium(ii)水溶液取代氯金酸水溶液，獲得修飾有ru納米顆粒的aao膜片。

實(shí)施例9-13與實(shí)施例1相比較，納米顆粒尺寸未發(fā)生明顯的變化，證實(shí)前驅(qū)體的種類(lèi)，只會(huì)影響納米顆粒的種類(lèi)，不會(huì)影響納米顆粒的大小。

實(shí)施例14

(1)首先配置12％的鹽酸溶液，先取1ml鹽酸溶液鋪于容器底部，在溶液表面小心放入陽(yáng)極氧化鋁膜片后，再將2ml鹽酸溶液滴加到膜片表面，超聲2min，取出膜片用去離子水沖洗數(shù)遍，再放入真空抽濾裝置中，用去離子水抽洗至膜片內(nèi)/外表面均無(wú)鹽酸溶液的殘留物，膜片干燥，備用。

(2)模板孔道內(nèi)表面修飾鹽酸多巴胺溶液

將前處理過(guò)的陽(yáng)極氧化鋁膜片(aao)置于濾膜(濾膜孔徑0.45μm,厚度0.34mm)上，打開(kāi)真空泵，至真空度為-0.1mpa，用移液槍將2mg/ml的鹽酸多巴胺溶液加于aao膜表面，使鹽酸多巴胺依賴其自身的黏附性附著于aao孔道的內(nèi)表面，抽濾持續(xù)20min，當(dāng)溶液抽濾結(jié)束后再真空加抽1min，關(guān)閉真空泵。

(3)孔道內(nèi)ag顆粒的生成

先取少量的1mmagno3溶液置于容器底部，將aao膜片放在agno3溶液液面上，在膜片表面再覆蓋數(shù)滴的agno3溶液，超聲處理片刻，錫箔紙包裹避光反應(yīng)30min。

(4)孔道內(nèi)au顆粒的生成

再次重復(fù)以上步驟(1)和步驟(2)，然后取少量的1mmhaucl4溶液置于容器底部，將再次洗滌并修飾有多巴胺溶液的aao膜片放在氯金酸液面上，在膜片表面再覆蓋數(shù)滴的氯金酸溶液，超聲處理片刻，錫箔紙包 裹避光反應(yīng)30min。

(5)用鑷子謹(jǐn)慎取出步驟四中氧化還原反應(yīng)后的aao膜片，用去離子水沖洗數(shù)遍，放入抽濾裝置中，用去離子水抽洗至無(wú)氯金酸溶液殘留，樣品干燥，保存，表征待用，獲得納米銀顆粒與納米金顆粒共存的微納米通道。

實(shí)施例15

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例14，區(qū)別在于，在所述步驟(3)中，以haucl4溶液取代agno3溶液，在所述步驟(4)中，以palladium(ii)[1,3-bis(diphenylphosphino)propane]-bis(benzonitrile)-bis-tetrafluoroborate]溶液取代haucl4溶液，獲得納米鈀顆粒與納米金顆粒共存的微納米通道。

實(shí)施例16

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例14，區(qū)別在于，在所述步驟(3)中，以haucl4溶液取代agno3溶液，在所述步驟(4)中，以cdi2溶液取代haucl4溶液，獲得納米鎘顆粒與納米金顆粒共存的微納米通道。

實(shí)施例17

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例14，區(qū)別在于，在所述步驟(4)中，以dichloro(1,5-cyclooctadiene)platinum(ii)溶液取代haucl4溶液，獲得納米鉑顆粒與納米銀顆粒共存的微納米通道。

實(shí)施例18

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例14，區(qū)別在于，在所述步驟(4)中，以palladium(ii)[1,3-bis(diphenylphosphino)propane]-bis(benzonitrile)-bis-tetrafluoroborate]溶液取代haucl4溶液，獲得納米鈀顆粒與納米銀顆粒共存的微納米通道。

實(shí)施例19

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)施例14，區(qū)別在于，在所述步驟(4)中，以 cdi2溶液取代haucl4溶液，獲得納米鎘顆粒與納米銀顆粒共存的微納米通道。

在實(shí)施例14-19中，異質(zhì)納米顆粒的存在能夠?yàn)槲⒓{米孔道提供可修飾的不同材質(zhì)界面。首先，在催化應(yīng)用上，不同貴金屬納米顆粒共存能夠用于非均相催化。其次，通過(guò)改變共價(jià)鍵的結(jié)合方式，能夠在微納米孔道接枝不同生物分子靶標(biāo)。在微納米孔道內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)多生物分子同時(shí)檢測(cè)。此外，異質(zhì)納米顆粒的存在能夠在孔道內(nèi)形成不同的功能區(qū)域，能夠應(yīng)用多種物質(zhì)和能量形式在孔道內(nèi)傳遞過(guò)程。

實(shí)驗(yàn)例20

步驟一：樣品膜的真空處理

將實(shí)施例1制備的樣品膜置于真空裝置中，用單相雙值電容電動(dòng)機(jī)對(duì)裝置抽3h真空，使aao孔道內(nèi)呈完全真空態(tài)。

步驟二：dna序列的活化

取用0.5mg的tcep(三(2-羧乙基)膦)作為活化劑，用0.086ml的trisbuffer(10mmtris(hydroxymethyl)-aminonethane+1mm六水合氯化鎂+500mm氯化鈉)溶解，獲得活化液。然后用移液槍分別移取1μl100μm的dna序列s1((nh2)-ttttataagtttggtggttagagagtg)和1μl的活化液混合，常溫下活化1h。s1序列的互補(bǔ)鏈s2使用前不需要活化(a17accac12caatctctcac1)。

步驟三：真空抽濾法在aao孔道內(nèi)壁修飾dna序列

在真空狀態(tài)下將溶有的100μms1dna序列的buffer溶液小心注入真空裝置中放有膜片的燒瓶?jī)?nèi)，以能完全淹沒(méi)膜片為準(zhǔn)，將真空裝置密封，存放過(guò)夜。

步驟四：修飾dna后膜片的抽洗和存放

將修飾dna后的aao膜片取出，用trisbuffer對(duì)其進(jìn)行沖洗和抽洗，除去膜片表面和孔道內(nèi)游離的dna序列，然后將其冷凍干燥2h后存放備 用。得到孔道內(nèi)修飾有單鏈dna的aao模板。

實(shí)施例21

以所相同步驟重復(fù)實(shí)施例20，區(qū)別在于，將所述步驟三中加入的活化后的s1dna序列換為不必活化的dna序列s2(a17accac12caatctctcac1)，得到孔道內(nèi)修飾有dna雙鏈的aao模板。

直接取未經(jīng)任何修飾的陽(yáng)極氧化鋁膜，其直徑為25mm，厚度為60μm，孔道直徑為40～70nm，平均密度為10⁷/cm²～10⁹/cm²。

利用電化學(xué)交流阻抗分別測(cè)試對(duì)比例、實(shí)施例1、實(shí)施例20和實(shí)施例21，得到三條不同的阻抗變化趨勢(shì)圖(圖4a，圖4b是圖4a對(duì)應(yīng)的柱狀圖)。其中，1為交流阻抗的低頻部分，半圓形半徑大小表明了電荷轉(zhuǎn)移電阻大小，即圖4b中的rct。2為交流阻抗的高頻部分，直線斜率大小表明了warburg阻抗的大小，即圖4b中的w。說(shuō)明帶有氨基的dna序列可修飾在孔道內(nèi)，且加入它的互補(bǔ)鏈后，兩條互補(bǔ)的dna序列可以在孔道內(nèi)自發(fā)完成互補(bǔ)鏈自組裝的生命過(guò)程。

實(shí)驗(yàn)例22

以所述的相同步驟重復(fù)實(shí)驗(yàn)例20，區(qū)別在于，步驟三中所用buffer中所含的dna序列由實(shí)施例18中100μms1序列改為50μms1((nh2)-ttttataagtttggtggttagagagtg)序列和50μms3((sh)-(tttttttttt)3-(cy5))序列混合，且s3在使用前不必活化。

dna混合buffer加入真空裝置后需用錫箔紙包裹整個(gè)裝置靜置過(guò)夜。經(jīng)步驟五后(全程在避光條件下進(jìn)行)即可得到孔道內(nèi)修飾有s1和s3兩種dna序列的aao模板(aao孔道內(nèi)自帶有羥基可與活化后的氨基結(jié)合，裸露的金納米顆粒可與巰基結(jié)合)。

利用激光共聚焦顯微鏡對(duì)序列s3在孔道內(nèi)的分布范圍進(jìn)行檢測(cè)。由于s3序列上修飾有熒光基團(tuán)cy5，通過(guò)檢測(cè)cy5在孔道內(nèi)的熒光范圍和熒光強(qiáng)度就可直接反映s3在孔道內(nèi)的修飾情況，從而間接反映出金納米顆粒在 孔道內(nèi)的分布情況。熒光檢測(cè)所用儀器為倒置激光共聚焦顯微鏡(confocal)。測(cè)試結(jié)果如圖5所示，標(biāo)記部分即為修飾有金納米顆粒的區(qū)域，且熒光強(qiáng)度與金納米顆粒的密度成正比。

該實(shí)施例證明，通過(guò)本發(fā)明的方法可以同時(shí)在孔道內(nèi)非連續(xù)、交叉修飾不同的功能基團(tuán)，還可以調(diào)節(jié)功能區(qū)域分布的密度、大小等條件，為納米孔道內(nèi)的選擇性修飾及同一納米孔道的多功能化提供新的材料和研究平臺(tái)。

通過(guò)以上實(shí)施例和對(duì)比例可以看出，用本發(fā)明的方法可以在固體納米孔道內(nèi)表面修飾單分散分布、裸露的金納米顆粒，促使納米孔道內(nèi)多種不同表面共存結(jié)構(gòu)的形成；并可以通過(guò)改變實(shí)驗(yàn)溫度、鹽酸多巴胺溶液的濃度、真空抽濾方式、真空抽濾時(shí)間等條件，可控調(diào)節(jié)金納米顆粒的尺寸、密度、異質(zhì)結(jié)構(gòu)等分布情況。

本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。