本發(fā)明屬于模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種慢性萎縮性胃炎大鼠模型的評(píng)價(jià)方法。

背景技術(shù)：
慢性萎縮性胃炎(Chronicatrophicgastritis,CAG)是消化系統(tǒng)的常見疾病之一，是指胃黏膜上皮遭受反復(fù)損害導(dǎo)致固有腺體的減少，伴或不伴纖維替代，腸腺化生和/或假幽門腺化生的一種慢性胃部疾病。在我國，CAG患者占受檢人群總數(shù)的13.8％。1978年世界衛(wèi)生組織將CAG列為胃癌前狀態(tài)。目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于慢性萎縮性胃炎尚缺乏行之有效的治療方法。患者一旦發(fā)病，難于治愈，大多終生帶病，嚴(yán)重威脅著人類的身體生存質(zhì)量。CAG作為胃癌癌前疾病，是非常值得臨床及科研工作者深入研究的。病理模型的評(píng)價(jià)則是疾病發(fā)病機(jī)制和新藥研究的關(guān)鍵所在?，F(xiàn)代研究多應(yīng)用綜合方法復(fù)制慢性萎縮性胃炎模型，摸擬與人類近似的病因、發(fā)病機(jī)制等特征，用于臨床和藥物研究中。但是，在模型復(fù)制中，缺乏有效的評(píng)價(jià)方式，主要體現(xiàn)在以下幾點(diǎn)：目前慢性萎縮性胃炎模型復(fù)制成功與否的判斷主要根據(jù)病理組織學(xué)檢查，胃組織形態(tài)的觀察結(jié)果作為輔助。胃蛋白酶、胃泌素、胃酸、表皮生長因子、一氧化氮等機(jī)制相關(guān)檢測指標(biāo)也被大量研究者監(jiān)測。另外，新的可視化技術(shù)還可對(duì)胃黏膜損傷面積進(jìn)行評(píng)價(jià)，進(jìn)而清晰地顯示出胃黏膜受損情況。但長期以來的實(shí)驗(yàn)研究中，慢性萎縮性胃炎模型評(píng)價(jià)仍存在不足之處。①主觀性：胃組織形態(tài)直接觀察觀察指標(biāo)包括胃部大小、胃壁厚度、皺襞數(shù)量、黏膜色澤及出血等，這種評(píng)價(jià)方法采取主觀人為評(píng)價(jià)，存在很大的主觀性和不確定性。②片面性：通過慢性萎縮性胃炎相關(guān)調(diào)控因子評(píng)價(jià)模型存在一定的片面性，只能反映個(gè)別的生化功能，器官/組織的狀態(tài)，缺乏整體的系統(tǒng)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。③耗費(fèi)性：目前慢性萎縮性胃炎實(shí)驗(yàn)研究還處于探索階段，普遍造模時(shí)間較長，病理檢測是其目前唯一的金標(biāo)準(zhǔn)，但該方法操作繁瑣且費(fèi)用昂貴，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有慢性萎縮性胃炎模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)方法存在精確性低、成本高和費(fèi)時(shí)費(fèi)力的技術(shù)問題，提供一種慢性萎縮性胃炎大鼠模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種慢性萎縮性胃炎大鼠模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：用濃度為20mmo1/L的脫氧膽酸鈉溶液和濃度為0.1％的氨水溶液單日雙日交替自由喂養(yǎng)大鼠，并保證足量；同時(shí)結(jié)合饑飽失常法：兩天足食，1天禁食，循環(huán)實(shí)施8周。一種對(duì)上述方法構(gòu)建的慢性萎縮性胃炎大鼠模型的評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟：1)在大鼠模型構(gòu)建的第0周、第4周、第6周和第8周分別收集大鼠模型的尿液，首先對(duì)第0周、第4周、第6周和第8周收集大鼠模型的尿液分別進(jìn)行核磁共振分析，得出大鼠模型的1HNMR譜圖；然后對(duì)大鼠模型的1HNMR譜圖積分?jǐn)?shù)據(jù)矩陣進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，得出大鼠模型的輪廓圖；進(jìn)而對(duì)大鼠模型的輪廓圖進(jìn)行輪廓?jiǎng)討B(tài)分析，得出大鼠模型的輪廓?jiǎng)討B(tài)變化趨勢圖；2)對(duì)第8周收集大鼠模型的尿液進(jìn)行核磁共振分析得出大鼠模型的1HNMR圖譜進(jìn)行積分，得出18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化；3)首先分析步驟1)得出的輪廓?jiǎng)討B(tài)變化趨勢圖，與第0周相比，在模型構(gòu)建第8周時(shí)偏離程度最大；然后，分析步驟2)得出18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化，與第0周相比，在模型構(gòu)建第8周時(shí)的18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化如下：模型大鼠尿液中Isoleucine、Malonate、Sarcosine、Betaine、Glycine、Guanidinoacetate和Allantoin含量顯著下降，具體含量變化如下：Isoleucine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.149±0.1303下降到0.8691±0.0519，p<0.01；Malonate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.015±0.119下降0.7358±0.140，p<0.01；Sarcosine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.127±0.309下降到0.8306±0.099，p<0.01；Betaine的積分面積均數(shù)從正常鼠的2.053±0.890下降到1.034±0.253，p<0.05；Glycine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.127±0.309下降到0.831±0.01，p<0.01；Guanidinoacetate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.979±0.194下降到1.626±0.093，p<0.05；Allantoin的積分面積均數(shù)從正常鼠的2.003±0.481下降到0.7908±0.295，p<0.01；模型大鼠尿液中Valine、2-hydroxybutyrate、Acetate、Succinate、a-ketoglutarate、Dimethylamine、TMA、DMG、Hippurate、Fumarate和Trigonelline含量顯著上調(diào)，具體含量變化如下：Valine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.119±0.0849上升到0.215±0.03，p<0.01；2-hydroxybutyrate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.597±0.0836上升到0.93±0.026，p<0.05；Acetate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.386±0.194上升到0.612±0.029，p<0.01；Succinate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.991±0.266上升到2.22±0.775，p<0.05；a-ketoglutarate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.338±0.346上升到1.854±0.39，p<0.05；Dimethylamine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.331±0.108上升到0.496±0.108，p<0.05；TMA的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.356±0.108上升到0.406±0.095，p<0.01；DMG的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.919±0.249上升到1.233±0.595，p<0.05；Hippurate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.361±0.097上升到0.543±0.134，p<0.01；Fumarate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.001±0.006上升到0.023265163±0.013，p<0.01；Trigonelline的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.0051±0.005上升到0.0214±0.009，p<0.01，則表明慢性萎縮性胃炎大鼠模型在第8周時(shí)構(gòu)建成功。本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，采用代謝組學(xué)的技術(shù)，通過分析造模前后機(jī)體終端產(chǎn)物尿液中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化，獲得代謝輪廓?jiǎng)討B(tài)軌跡圖譜。同時(shí)，使用MestReNova軟件對(duì)所有的NMR譜進(jìn)行處理得到積分?jǐn)?shù)據(jù)，并結(jié)合18個(gè)生物標(biāo)志物的含量統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)造模前后尿液中的18個(gè)生物標(biāo)記物積分均值的變化一定程度上反應(yīng)了慢性萎縮性胃炎大鼠尿液代謝軌跡的變化趨勢，從而針對(duì)性地評(píng)價(jià)慢性萎縮性胃炎的模型。代謝產(chǎn)物處于生物機(jī)體中的終端，上游基因和蛋白質(zhì)的微小變化都會(huì)在代謝物上得到放大，從而可更加靈敏地表征生命現(xiàn)象，能忠實(shí)反映外界干預(yù)對(duì)機(jī)體代謝網(wǎng)絡(luò)調(diào)控過程的微觀變化。且迄今為止，未見代謝組學(xué)方法用于慢性萎縮性胃炎模型的評(píng)價(jià)。與以往的評(píng)價(jià)方法相比，該方法更全面靈敏、系統(tǒng)綜合的體現(xiàn)造模前后機(jī)體的動(dòng)態(tài)輪廓，綜合地體現(xiàn)模型復(fù)制的合理性和科學(xué)性，可以為新藥研發(fā)和藥理研究提供一種可靠的慢性萎縮性胃炎模型的評(píng)價(jià)方法，具有高效、快速、無創(chuàng)傷、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。為表明本發(fā)明具有以上優(yōu)點(diǎn)，分別采用造模前后大鼠體重、生化指標(biāo)及病理變化評(píng)價(jià)慢性萎縮性胃炎模型的方法(結(jié)果見圖4、圖5、圖6和表1)和本發(fā)明所述方法評(píng)價(jià)慢性萎縮性胃炎模型的方法(結(jié)果見圖1、圖2和圖3)，表1.造模前后各組大鼠的SOD、MDA及胃蛋白酶活力值變化情況(Mean±SD)與正常對(duì)照組相比，*p＜0.05，**p＜0.01。利用造模前后兩組大鼠生化指標(biāo)的變化評(píng)價(jià)模型的可靠性。結(jié)果表明，與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠血漿SOD值顯著下降，而MDA值顯著升高，胃蛋白酶顯著降低。生化分析結(jié)果表明慢性萎縮性胃炎模型造模成功。通過對(duì)比可知，采用本發(fā)明所述評(píng)價(jià)方法能更加全面靈敏的監(jiān)測慢性萎縮性胃炎模型的復(fù)制過程，具有高效、快速、無創(chuàng)傷、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。附圖說明圖1是模型構(gòu)建期間大鼠模型尿液的PCA動(dòng)態(tài)趨勢圖；圖2是大鼠模型尿液OPLS-DA分析得分圖；圖3是大鼠模型尿液OPLS-DA分析載荷圖；圖4是大鼠模型復(fù)制期間大鼠體重變化趨勢圖；圖5是正常大鼠胃組織病理圖；圖6是大鼠模型胃組織病理圖。具體實(shí)施方式一種慢性萎縮性胃炎大鼠模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：用濃度為20mmo1/L的脫氧膽酸鈉溶液和濃度為0.1％的氨水溶液單日雙日交替自由喂養(yǎng)大鼠，并保證足量；同時(shí)結(jié)合饑飽失常法：兩天足食，1天禁食，循環(huán)實(shí)施8周。一種對(duì)本實(shí)施例所述方法構(gòu)建的慢性萎縮性胃炎大鼠模型的評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟：1)應(yīng)用多元統(tǒng)計(jì)分析方法對(duì)代謝輪廓進(jìn)行表征，采用主成分分析(PCA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行模式識(shí)別，考察各組數(shù)據(jù)輪廓的分離情況。具體方法是在大鼠模型構(gòu)建的第0周、第4周、第6周和第8周分別收集大鼠模型的尿液，首先對(duì)第0周、第4周、第6周和第8周收集大鼠模型的尿液分別進(jìn)行核磁共振分析，得出大鼠模型的1HNMR圖譜；然后對(duì)大鼠模型的1HNMR譜圖積分?jǐn)?shù)據(jù)矩陣進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，得出大鼠模型的輪廓圖；進(jìn)而對(duì)大鼠模型的輪廓圖進(jìn)行輪廓?jiǎng)討B(tài)分析，得出大鼠模型的輪廓?jiǎng)討B(tài)變化趨勢圖，如圖1(橫坐標(biāo)及縱坐標(biāo)分別表征第一主成分和第二主成分。C：空白組；M1：第4周；M2：第6周；M3：第8周；M4：第10周)所示：在不同的時(shí)間點(diǎn)，模型組偏離正常對(duì)照組的程度不同，而在模型復(fù)制第8周時(shí)偏離程度最大，說明在第8周代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)發(fā)生顯著變化，證明慢性萎縮性胃炎模型復(fù)制成功；2)在PCA動(dòng)態(tài)分析的基礎(chǔ)上，利用正交偏最小二乘-判別分析法(OPLS-DA)對(duì)正常組和第8周模型尿液進(jìn)一步分析，得到與正常組對(duì)第8周模型組尿液輪廓圖，結(jié)果見圖2(橫坐標(biāo)及縱坐標(biāo)分別表征第一主成分和第二主成分)。從圖2可以看出兩組在主成分一軸上的分離效果明顯。接著通過載荷圖(見圖3：(橫坐標(biāo)及縱坐標(biāo)分別表征第一主成分和相關(guān)性系數(shù)，系數(shù)越大，對(duì)分組貢獻(xiàn)越大。)對(duì)變量加載的結(jié)果進(jìn)行描述，利用變量重要性(VIP)分析，并結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)(p<0.05)獲得潛在的生物標(biāo)志物，從對(duì)照組與模型組中找到含量變化差異顯著的變量，這些變量所涉及到的代謝通路有可能導(dǎo)致慢性萎縮性胃炎模型的形成。對(duì)第8周收集大鼠模型的尿液進(jìn)行核磁共振分析得出大鼠模型的1HNMR圖譜進(jìn)行積分，得出18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化；3)首先分析步驟1)得出的輪廓?jiǎng)討B(tài)變化趨勢圖，與第0周相比，在模型構(gòu)建第8周時(shí)偏離程度最大；然后，分析步驟2)得出18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化，與第0周相比，在模型構(gòu)建第8周時(shí)的18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化如下：模型大鼠尿液中Isoleucine、Malonate、Sarcosine、Betaine、Glycine、Guanidinoacetate和Allantoin含量顯著下降，具體含量變化如下：Isoleucine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.149±0.1303下降到0.8691±0.0519，p<0.01；Malonate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.015±0.119下降0.7358±0.140，p<0.01；Sarcosine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.127±0.309下降到0.8306±0.099，p<0.01；Betaine的積分面積均數(shù)從正常鼠的2.053±0.890下降到1.034±0.253，p<0.05；Glycine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.127±0.309下降到0.831±0.01，p<0.01；Guanidinoacetate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.979±0.194下降到1.626±0.093，p<0.05；Allantoin的積分面積均數(shù)從正常鼠的2.003±0.481下降到0.7908±0.295，p<0.01；模型大鼠尿液中Valine、2-hydroxybutyrate、Acetate、Succinate、a-ketoglutarate、Dimethylamine、TMA、DMG、Hippurate、Fumarate和Trigonelline含量顯著上調(diào)，具體含量變化如下：Valine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.119±0.0849上升到0.215±0.03，p<0.01；2-hydroxybutyrate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.597±0.0836上升到0.93±0.026，p<0.05；Acetate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.386±0.194上升到0.612±0.029，p<0.01；Succinate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.991±0.266上升到2.22±0.775，p<0.05；a-ketoglutarate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.338±0.346上升到1.854±0.39，p<0.05；Dimethylamine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.331±0.108上升到0.496±0.108，p<0.05；TMA的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.356±0.108上升到0.406±0.095，p<0.01；DMG的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.919±0.249上升到1.233±0.595，p<0.05；Hippurate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.361±0.097上升到0.543±0.134，p<0.01；Fumarate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.001±0.006上升到0.023265163±0.013，p<0.01；Trigonelline的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.0051±0.005上升到0.0214±0.009，p<0.01，綜合，若符合在第8周的代謝輪廓的偏離程度最大，且18個(gè)代謝物積分?jǐn)?shù)據(jù)滿足上述范圍，則表明慢性萎縮性胃炎大鼠模型在第8周時(shí)構(gòu)建成功。