本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領域，更具體地涉及一種用hplc測定蘇沃雷生手性異構體的方法。

背景技術：

蘇沃雷生(suvorexant)，化學名為5-氯-2-{(5r)-5-甲基-4-[5-甲基-2-(2h-1,2,3-三唑-2-基)苯甲?；鵠-1,4-二氮雜環(huán)庚烷-1-基}-1,3-苯并惡唑，其結構式如下：

默克公司研發(fā)的藥物蘇沃雷生(suvorexant)是一種食欲素受體拮抗劑，可影響食欲素通路的信號傳導。食欲素是一種小分子神經多肽，與睡眠-覺醒周期的調控有關，蘇沃雷生可用于治療慢性失眠。

在現(xiàn)有技術公開了suvorexant多種合成方法，其中wo2012148553公開了一種制備suvorexant的合成路線，該合成路線如下：

由以上所述的合成路線可知蘇沃雷生是手性化合物。蘇沃雷生的手性異構體的結構式如下：

其化學名為5-氯-2-{(5s)-5-甲基-4-[5-甲基-2-(2h-1,2,3-三唑-2-基)苯甲?；鵠-1,4-二氮雜環(huán)庚烷-1-基}-1,3-苯并惡唑。

為了控制藥品的質量，保證用藥的安全需要開發(fā)出一種有效檢測蘇沃雷生手性異構體的方法。

技術實現(xiàn)要素：

發(fā)明概述

在現(xiàn)有技術中并沒有相關文獻公開檢測蘇沃雷生手性異構體的hplc檢測方法。因此，為了有效的控制合成蘇沃雷生中手性異構體的純度，本發(fā)明提供一種能夠檢測蘇沃雷生其手性異構體的hplc檢測方法。該方法具有高效、便捷、專屬性好和靈敏度高，能夠有效分離蘇沃雷生以及其手性異構體。

本發(fā)明人通過多次實驗嘗試，采用chiralpakia手性色譜柱(以5μm硅膠表面共價鍵合有直鏈淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)為填料)，以正己烷與低級醇的混合溶液作為流動相在hplc系統(tǒng)中進行等度洗脫并檢測手性異構體，為了防止峰型拖尾，提高柱效，還可以在流動相中加入適當的胺類溶劑，本發(fā)明可實現(xiàn)蘇沃雷生與手性異構體的有效分離檢測。

術語定義

術語“峰純度”是指hplc檢測中，用于判斷某一色譜峰是否只是由一個物質引起的一個考察參數，一般認為峰純度在0.990～1.000之間即認為所考察的某一色譜峰純凈，該色譜峰是某單一物質的色譜峰。

術語“不對稱因子”是指在hplc檢測中，用于考察峰形對稱性的參數，體現(xiàn)色譜柱效能；在液相色譜法中，當不對稱因子在0.8～1.2之間認為峰形較好。

術語“約”在本發(fā)明中是指在所述數值的±10％以內。

發(fā)明詳述

本發(fā)明提供一種用hplc測定蘇沃雷生手性異構體的方法，所述方法的特征是采用chiralpakia手性色譜柱，以正己烷與低級醇的混合溶液作為流動相在hplc系統(tǒng)中進行等度洗脫。

更具體的是，本發(fā)明所提供一種用hplc測定蘇沃雷生手性異構體的方法，所述方法的特征是：

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)，以5μm硅膠表面共價鍵合有直鏈淀粉－三(3,5 －二甲苯基氨基甲酸酯為填料；

流動相：正己烷和低級醇的混合溶液，正己烷和低級醇的體積比為約80:20～90:10，并且含有胺類溶劑，胺類溶劑在流動相溶液中的體積百分比為約0.1％～0.5％；

色譜柱柱溫：約30℃-40℃；

流速：約0.8ml/min-1.2ml/min；

檢測波長：254nm；

采用dad檢測器進行檢測。

本發(fā)明所述的低級醇溶液可以是選自甲醇、乙醇或異丙醇中的一種或幾種。在一些實施例中，所述低級醇溶液是異丙醇。

本發(fā)明所述的胺類溶劑可以是選自二乙胺、異丙胺、叔丁胺、二乙醇胺或三乙胺中的一種或幾種。在一些實施例中，所述胺類溶劑是二乙胺。

在一些實施例中，本發(fā)明所述的一種用hplc測定蘇沃雷生手性異構體的方法，其特征是：

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)；

流動相是體積比為約85:15的正己烷和低級醇的混合溶液，并且含有胺類溶劑，胺類溶劑在流動相溶液中的體積百分比為約0.2％；

色譜柱柱溫：約35℃；

流速：約1.0ml/min；

檢測波長：254nm；

采用dad檢測器進行檢測。

本發(fā)明所述的一種用hplc測定蘇沃雷生手性異構體的方法中，供試品溶液的配制方法是：稱取待檢測樣品約20mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加適量稀釋劑(乙醇)超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻得到樣品溶液。

附圖說明

圖1示實施例1中供試品溶液的色譜圖。

圖2示實施例2中供試品溶液的色譜圖。

圖3示實施例3中供試品溶液的色譜圖。

具體實施方式

為了使本領域的技術人員更好地理解本發(fā)明的技術方案，下面進一步披露一些非限制實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。

本發(fā)明所使用的試劑均可以從市場上購得或者可以通過本發(fā)明所描述的方法制備而得。

本發(fā)明所使用的分析試劑及溶液符合中國藥典2010版附錄的要求，另有說明的除外。

實施例1

色譜條件：

儀器：agilent高效液相色譜儀；agilentdad檢測器；

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)；

流動相：正己烷:異丙醇:二乙胺＝85:15:0.1％(體積比)；

流速：1.0ml/min；

檢測波長：254nm；

柱溫：35℃；

進樣體積：10μl；

溶液配制：

供試品溶液：稱取待檢測的樣品約20mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加適量稀釋劑(乙醇)超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻得到供試品溶液。

按照中國藥典2010版第二部附錄ⅴd高效液相色譜法，取供試品溶液，在所述色譜條件下進樣檢測，并記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖如圖1，圖中suvorexant與其異構體(enantiomer)之間的分離度為2.13。記錄各色譜圖下色譜峰的峰面積、對稱性、保留時間和峰純度，結果如表1。

表1

實施例2

色譜條件：

儀器：agilent高效液相色譜儀；agilentdad檢測器；

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)；

流動相：正己烷:異丙醇:二乙胺＝85:15:0.2％(體積比)；

流速：1.0ml/min；

檢測波長：254nm；

柱溫：35℃；

進樣體積：10μl；

溶液配制：

供試品溶液：稱取待檢測樣品約20mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加適量稀釋劑(乙醇)超聲 溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

按照中國藥典2010版第二部附錄ⅴd高效液相色譜法，取供試品溶液，在所述色譜條件下進樣檢測，并記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖如圖2，圖中suvorexant與其異構體(enantiomer)之間的分離度為2.24。記錄各色譜圖下色譜峰的峰面積、對稱性、保留時間和峰純度，結果如表2。

表2

實施例3

色譜條件：

儀器：agilent高效液相色譜儀；agilentdad檢測器；

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)；

流動相：正己烷:異丙醇:二乙胺＝85:15:0.3％(體積比)；

流速：1.0ml/min；

檢測波長：254nm；

柱溫：35℃；

進樣體積：10μl；

溶液配制：

供試品溶液：稱取待檢測樣品約20mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加適量稀釋劑(乙醇)超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

按照中國藥典2010版第二部附錄ⅴd高效液相色譜法，取供試品溶液，在所述色譜條件下進樣檢測，并記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖如圖3，圖中suvorexant與其異構體(enantiomer)之間的分離度為2.05。記錄各色譜圖下色譜峰的峰面積、對稱性、保留時間和峰純度，結果如表3。

表3

綜上實施例，

實施例1、2和3表明，本發(fā)明所述的方法，在本發(fā)明所述的范圍內進行調整，不影響其對蘇沃雷生手性異構體的分離測定，具有高效、便捷、專屬性好、靈敏度高和分離度好的優(yōu)點。

本發(fā)明的方法已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在本發(fā)明內容、精神和范圍內對本文 所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術。本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內。