本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域，特別涉及測定全血樣本中特定成分的組合物、電化學(xué)測試條、制備測試條的方法和檢測全血樣本中特定成分的方法。
背景技術(shù)：
電化學(xué)試劑條檢測法能用少量的樣品在很短的時(shí)間內(nèi)獲得被檢測樣品的多種化學(xué)和生物學(xué)信息。作為篩選試驗(yàn)被廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、食品安全檢測等的判斷。例如，利用電化學(xué)測試條檢測血樣中的葡萄糖、總膽固醇、血紅蛋白、尿酸含量等。
電化學(xué)試劑條檢測法包括“吸”與“讀”兩個(gè)檢測步驟。根據(jù)不同的檢測項(xiàng)目，反應(yīng)試劑被預(yù)先干燥固定在電化學(xué)試劑條的電極表面。檢測時(shí)，將試劑條插入測試儀器后，再將需檢測的液體樣本直接加到試劑條的吸樣孔中，通過虹吸原理將其吸入，被測物質(zhì)與試劑條中預(yù)先處理的試劑發(fā)生生物化學(xué)反應(yīng)，儀器向試劑條提供工作電壓，并起到收集試劑條表面反應(yīng)信號、進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和處理并讀出結(jié)果，從而對被測物進(jìn)行定量分析。在其檢測過程中電子媒介體(mediator)的應(yīng)用是至關(guān)重要的，電流變化的產(chǎn)生需要電子媒介體的參與。媒介體在近十年來得到了迅速的發(fā)展，其種類也越來越多。按作用的機(jī)理主要可分為兩大類：(1)含有過渡金屬元素的化合物或配合物，通過過渡金屬元素的價(jià)態(tài)變化來傳遞電子；(2)通過分子中特殊官能團(tuán)的結(jié)構(gòu)變化來傳遞電子。這些化合物的共同特點(diǎn)是都含有大π鍵的環(huán)及與環(huán)相聯(lián)的雙鍵，這些雙鍵容易打開與再形成，電子的傳遞就是靠這些雙鍵的打開與再形成來實(shí)現(xiàn)。
甘油三酯(triglyceride，縮寫tg)是3分子長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。甘油三酯是人體內(nèi)含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，同時(shí)肝臟、脂肪等組織還可以進(jìn)行甘油三酯的合成，在脂肪組織中貯存。高甘油三酯是作為高血脂癥的一種，對人體的危害主要是引起動(dòng)脈粥樣硬化、造成血管堵塞和形成血栓，引發(fā)心腦血管疾病。理想的甘油三酯水平應(yīng)低于1.70mmol/l，超過1.70mmol/l則需要改變生活方式，控制飲食，增加運(yùn)動(dòng)，高于2.26mmol/l則表示甘油三酯偏高，需要吃藥，以防病變。
在檢測血液中的甘油三酯含量時(shí)，通常利用脂蛋白脂肪酶(lpl)與樣品中的甘油三酯(tg)作用生成甘油和脂肪酸：
反應(yīng)過程中產(chǎn)生的甘油被甘油激酶(gyk)催化與atp和鎂離子作用生成3-磷酸甘油和adp：
新生成的3-磷酸甘油與氧化態(tài)的電子媒介體(mediator(ox))在甘油磷酸氧化酶(g3o)或甘油磷酸脫氫酶(g3d)的作用下生成磷酸二羥丙酮和還原態(tài)的電子媒介體(mediator(red))。
在給定電壓的條件下，產(chǎn)生還原態(tài)電子媒介體的多少和電流大小呈正相關(guān)，而電流大小和甘油三酯濃度呈正相關(guān)。通過上述幾步反應(yīng)就能準(zhǔn)確測定甘油三酯含量。
對于應(yīng)用電化學(xué)的方法檢測甘油三酯含量的電子媒介體報(bào)道的較少，鐵氰化鉀(potassiumferricyanide)可以和葡萄糖氧化酶反應(yīng)，可以作為檢測葡萄糖的電子媒介體，但不能應(yīng)用于檢測甘油三酯。因?yàn)橹鞍字久负捅砻婊钚詣┚苁辜t細(xì)胞破裂放出血紅蛋白，導(dǎo)致鐵氰化鉀和亞鐵血紅蛋白反應(yīng)生成亞鐵氰化鉀和高鐵血紅蛋白，亞鐵氰化鉀的生成使測試的背景電流太高，導(dǎo)致在檢測甘油三酯時(shí)測試的電流梯度較小。作為電子媒介體的三氯化六銨合釕(hexaamminerutheniumchloride)在檢測葡萄糖的應(yīng)用中是較好的，但是在氧分壓較高的情況下，3-磷酸甘油和甘油磷酸氧化酶并不能很好的利用三氯化六銨合釕，而是較多的和氧氣反應(yīng)，這導(dǎo)致氧分壓較高時(shí)測試的電流梯度較低。二茂鐵、醌類、有機(jī)介體、有機(jī)導(dǎo)電鹽和亞甲基藍(lán)均不能很好的與3-磷酸甘油和甘油磷酸 氧化酶反應(yīng)。因此迫切需要找到一種測試甘油三酯濃度較好的電子媒介體。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明提供了一種測定全血樣本中特定成分或所述特定成分發(fā)生反應(yīng)后的中間產(chǎn)物的組合物，包括氧化脫氫酶、表面活性劑和電子媒介體，所述電子媒介體選自吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物。
其中所述吩噻嗪衍生物選自通式v，所述吩噁嗪衍生物選自通式vi
其中r1至r9選自氫、烷基、烯基、炔基、芳基、芳氧基、雜芳香基、雜環(huán)胺基、醛基、酮基、羧基、烴羧基、烷氧羰基、酯基、鹵素、鹵代烷基、亞硝基、硝基、環(huán)基、氨基、亞磷酸基團(tuán)及其鹽或磺酸基團(tuán)及其鹽，所述r1至r9基團(tuán)可以相同或不同。
更具體的，吩噻嗪衍生物選自通式i、通式ii或通式iii：
所述氧化脫氫酶選自甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶。
當(dāng)特定成分為甘油三酯時(shí)，組合物還包括脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、atp和鎂離子。優(yōu)選的，組合物各組分的含量分別為：脂蛋白脂肪酶的含量為100ku/l-1000ku/l，甘油激酶的含量為100ku/l-1000ku/l，甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶的含量為100ku/l-1000ku/l，atp的含量為2g/l-16g/l，吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物的含量為1g/l-25g/l，鎂離子的含量為0.5g-40g，表面活性劑的含量為1g/l-100g/l。
本發(fā)明提供一種測定全血樣本中特定成分或所述特定成分發(fā)生反應(yīng)后的中間產(chǎn)物的電化學(xué)測試條，所述測試條包括絕緣性底板，覆蓋層，樣品入口和位于絕緣性底板上的電極系統(tǒng)，其中所述電極系統(tǒng)至少包括一個(gè)工作電極和一個(gè)對電極，至少在工作電極上包括一種測定組合物，所述組合物包括氧化脫氫酶、表面活性劑和電子媒介體，所述電子媒介體選自吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物。
其中所述吩噻嗪衍生物選自通式v，所述吩噁嗪衍生物選自通式vi：
其中r1至r9選自氫、烷基、烯基、炔基、芳基、芳氧基、雜芳香基、雜環(huán)胺基、醛基、酮基、羧基、烴羧基、烷氧羰基、酯基、鹵素、鹵代烷基、亞硝基、硝基、環(huán)基、氨基、亞磷酸基團(tuán)及其鹽或磺酸基團(tuán)及其鹽，所述r1至r9基團(tuán)可以相同或不同。
更具體的，所述吩噻嗪衍生物選自通式i、通式ii或通式iii：
其中所述氧化脫氫酶選自甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶。
本發(fā)明還提供了一種測定全血中甘油三酯含量的電化學(xué)測試條，包括絕緣性底板，覆蓋層，樣品入口和位于絕緣性底板上的電極系統(tǒng)，其中所述電極系統(tǒng)至少包括一個(gè)工作電極和一個(gè)對電極，至少在工作電極上包括一種測定組合物，所述組合物包括脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶、atp、表面活性劑、鎂離子和電子媒介體，所述電子媒介體選自吩噻嗪衍生物或 吩噁嗪衍生物。
其中所述吩噻嗪衍生物選自通式v，所述吩噁嗪衍生物選自通式vi：
其中r1至r9選自氫、烷基、烯基、炔基、芳基、芳氧基、雜芳香基、雜環(huán)胺基、醛基、酮基、羧基、烴羧基、烷氧羰基、酯基、鹵素、鹵代烷基、亞硝基、硝基、環(huán)基、氨基、亞磷酸基團(tuán)及其鹽或磺酸基團(tuán)及其鹽，所述r1至r9基團(tuán)可以相同或不同。
更具體的，所述吩噻嗪衍生物選自通式i、通式ii或通式iii：
更具體的，組合物中各組分的含量為：脂蛋白脂肪酶的含量為100ku/l-1000ku/l，甘油激酶的含量為100ku/l-1000ku/l，甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶的含量為100ku/l-1000ku/l，atp的含量為2g/l-16g/l，吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物的含量為1g/l-25g/l，鎂離子的含量為0.5g-40g，表面活性劑的含量為1g/l-100g/l。
本發(fā)明還提供了一種用于甘油三酯含量測定的電化學(xué)測試條的制備方法，所述制備方法包括：提供絕緣性底板，覆蓋層，樣品入口，在絕緣性底板上制備電極系統(tǒng)，所述電極系統(tǒng)至少包括工作電極和對電極，至少在工作電極上添加測定用組合物，所述組合物包括脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶、atp、表面活性劑、鎂離子和電子媒介體，所述電子媒介體選自吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物。
其中，所述吩噻嗪衍生物選自通式v，所述吩噁嗪衍生物選自通式vi
其中r1至r9分別選自氫、烷基、烯基、炔基、芳基、芳氧基、雜芳香基、雜環(huán)胺基、醛基、酮基、羧基、烴羧基、烷氧羰基、酯基、鹵素、鹵代烷基、亞硝基、硝基、環(huán)基、氨基、亞磷酸基團(tuán)及其鹽或磺酸基團(tuán)及其鹽，所述r1至r9 基團(tuán)可以相同或不同。
更具體的，所述吩噻嗪衍生物選自通式i、通式ii或通式iii：
更具體的，組合物中各組分的含量為：脂蛋白脂肪酶的含量為100ku/l-1000ku/l，甘油激酶的含量為100ku/l-1000ku/l，甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶的含量為100ku/l-1000ku/l，atp的含量為2g/l-16g/l，吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物的含量為1g/l-25g/l，鎂離子的含量為0.5g-40g，表面活性劑的含量為1g/l-100g/l。
本發(fā)明還提供了一種測定全血樣本中甘油三酯含量的方法，包括以下步驟：(1)提供一種電化學(xué)測試條，所述測試條包括工作電極和對電極；至少在工作電極上包括一種測定組合物包括脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶、atp、表面活性劑、鎂離子和電子媒介體，所述電子媒介體選自吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物。(2)將步驟(1)中的電化學(xué)測試條與電子測量儀連接。(3)將全血樣本加入電化學(xué)測試條中；(4)測定全血中的甘油三酯含量。
更具體的，脂蛋白脂肪酶的含量為100ku/l-1000ku/l，甘油激酶的含量為100ku/l-1000ku/l，甘油磷酸氧化酶的含量為100ku/l-1000ku/l，atp的含量 為2g/l-16g/l，吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物的含量為1g/l-25g/l，鎂離子的含量為0.5g-40g，表面活性劑的含量為1g/l-100g/l。
所述吩噻嗪衍生物選自通式v，所述吩噁嗪衍生物選自通式vi
其中r1至r9分別選自氫、烷基、烯基、炔基、芳基、芳氧基、雜芳香基、雜環(huán)胺基、醛基、酮基、羧基、烴羧基、烷氧羰基、酯基、鹵素、鹵代烷基、亞硝基、硝基、環(huán)基、氨基、亞磷酸基團(tuán)及其鹽或磺酸基團(tuán)及其鹽，所述r1至r9基團(tuán)可以相同或不同。
更具體的，所述吩噻嗪衍生物選自通式i、通式ii或通式iii：
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明包含吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物的組合物，能很好地和3-磷酸甘油與甘油磷酸氧化酶反應(yīng)產(chǎn)生較好電流梯度。在甘油三酯的含量測定中能產(chǎn)生明顯的電流梯度且測試的背景電流較低，讓甘油三酯的檢測結(jié)果更為準(zhǔn)確。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。這些具體的實(shí)施例僅僅是在不違背本發(fā)明精神下的有限列舉，并不排除本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員把現(xiàn)有技術(shù)和本發(fā)明結(jié)合而產(chǎn)生的其他具體的實(shí)施方案。
一種測定全血樣本中特定成分或所述特定成分發(fā)生反應(yīng)后的中間產(chǎn)物的含量的組合物，包括氧化脫氫酶、表面活性劑和電子媒介體。其中所述氧化脫氫酶選自膽固醇氧化酶、葡萄糖氧化酶或葡萄糖脫氫酶、尿酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶等。所述電子媒介體選自吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物等。
所述全血中特定成分選自血液樣本中的膽固醇、葡萄糖、尿酸、丙酮酸、肌酐、甘油三酯等。所述特定成分發(fā)生反應(yīng)后的中間產(chǎn)物選自肌酐的中間產(chǎn)物肌氨酸、甘油三酯的中間產(chǎn)物3-磷酸甘油等。
測定全血樣本中甘油三酯含量的組合物，所述組合物包括氧化脫氫酶、表面活性劑、電子媒介體、脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、atp和鎂離子。其中所述氧化脫氫酶選自甘油磷酸氧化酶或甘油磷酸脫氫酶，所述電子媒介體選自吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述測定甘油三酯含量的組合物包括：100ku/l-1000ku/l的脂蛋白脂肪酶，100ku/l-1000ku/l的甘油激酶，100ku/l-1000ku/l的甘油磷酸氧化酶，2g/l-16g/l的atp，1g/l-25g/l的吩噻嗪衍生物或吩噁嗪衍生物，0.5g-40g，的mg2+，1g/l-100g/l的表面活性劑。
本發(fā)明所述的表面活性劑選自聚氧乙烯基聯(lián)苯乙烯化苯基醚、失水山梨醇三 油酸酯、失水山梨醇三硬脂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯十六烷基醚、聚氧乙烯月桂醚、聚氧乙烯失水山梨醇三硬脂酸酯或聚氧乙烯單油酸酯等。
本發(fā)明所述的鎂離子來自于鎂鹽中的鎂離子，所述的鎂鹽可以選自氯化鎂、硫酸鎂、醋酸鎂、鉻酸鎂、硝酸鎂等合適的鎂鹽或它們的任一組合。所述的鎂離子還可以來自于非鎂鹽中的鎂離子。
本發(fā)明所述吩噻嗪衍生物選自通式v，所述吩噁嗪衍生物選自通式vi，其中r1至r9分別選自氫、烷基、烯基、炔基、芳基、芳氧基、雜芳香基、雜環(huán)胺基、醛基、酮基、羧基、烴羧基、烷氧羰基、酯基、鹵素、鹵代烷基、亞硝基、硝基、環(huán)基、氨基、亞磷酸基團(tuán)及其鹽、磺酸基團(tuán)及其鹽，所述r1至r9基團(tuán)可以相同或不同：
更具體的，所述吩噻嗪衍生物選自通式i、通式ii或通式iii：
實(shí)施例1含鐵氰化鉀電子媒介體的組合物用于檢測血樣中甘油三酯的含量
將以下組合物在不加入酶之前用naoh調(diào)整其ph為6.5后加入酶備用，將溶液i點(diǎn)液在絲網(wǎng)印刷電極上，將其置于65℃烘箱中烘20分鐘后取出。
溶液i：
將以上點(diǎn)液烘干后的絲網(wǎng)印刷電極用雙面膠和上蓋黏貼，鋼滾壓實(shí)后用滾刀切割成每個(gè)電化學(xué)測試條的尺寸為35mm*6mm，將測試條插到測試的儀器上自動(dòng)開機(jī)，分別在虹吸通道處加入甘油三酯含量為45-60mg/dl、300-330mg/dl或625-685mg/dl，紅細(xì)胞比容調(diào)整到42％的全血標(biāo)本，全血標(biāo)本的真實(shí)值參考生化分析儀測試(hitachi7100automaticanalyzer)。電化學(xué)測試條可以在100-1000mv范圍的測試電壓，室溫環(huán)境下測量樣本中特定成分的含量。本申請所述實(shí)施例中的電化學(xué)測試條均選用250mv的電壓，且是工作電極相對于對電極的電壓為正的250mv，并在室溫條件下測量樣本中特定成分的含量。每個(gè)濃度的全血標(biāo)本分別進(jìn)行50次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測得的電流值的cv(變異系數(shù))均在1％到3％范圍內(nèi)，每個(gè)濃度的測定平均值如下表1所示。
表1
實(shí)施例1的測定結(jié)果表明，含有鐵氰化鉀作為電子媒介體的組合物測試的背景電流較高。這是由于組合物中的表面活性劑或酶類等物質(zhì)導(dǎo)致測試的血樣溶血，溶血后紅細(xì)胞中的血紅蛋白被釋放出來，鐵氰化鉀會和亞鐵血紅蛋白反應(yīng)生成高鐵血紅蛋白和亞鐵氰化鉀，亞鐵氰化鉀的生成促使測試的背景電流較高。且鐵氰化鉀作為電子媒介體的組合物與3-磷酸甘油和甘油磷酸氧化酶反應(yīng)能力較差導(dǎo)致測試無明顯的電流梯度，因此無法準(zhǔn)確測定甘油三酯從45mg/dl到650mg/dl范圍內(nèi)的含量。
實(shí)施例2含三氯化六銨合釕電子媒介體的組合物用于檢測血樣中甘油三酯的含量
將以下組合物在不加入酶之前用naoh調(diào)整其ph為6.5后加入酶備用，將溶液ii點(diǎn)液在絲網(wǎng)印刷電極上，在65℃烘箱中烘20分鐘后取出。
溶液ii:
將以上點(diǎn)液烘干后的絲網(wǎng)印刷電極用雙面膠和上蓋黏貼，鋼滾壓實(shí)后用滾刀切割成每個(gè)電化學(xué)測試條的尺寸為35mm*6mm，將測試條插到測試的儀器上自動(dòng)開機(jī)，分別在虹吸通道處加入甘油三酯含量為45-60mg/dl、300-330mg/dl或625-685mg/dl，紅細(xì)胞比容調(diào)整到42％的全血標(biāo)本，全血標(biāo)本的真實(shí)值參考生 化分析儀測試(hitachi7100automaticanalyzer)，其一份三個(gè)濃度的全血標(biāo)本氧分壓控制在40mmhg以下，另一份三個(gè)濃度的全血標(biāo)本氧分壓控制在100mmhg以上。氧分壓在100mmhg以上的全血標(biāo)本可以采用如下方式或其他方式配制：將血樣標(biāo)本放在2ml的離心管中搖晃20分鐘備用。
在250mv的測試電壓室溫下進(jìn)行測試。每個(gè)濃度的全血標(biāo)本分別進(jìn)行50次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測得的電流值的cv(變異系數(shù))均在1％到3％范圍內(nèi)，每個(gè)濃度的測定平均值如下表2所示。
表2
實(shí)施例2的測定結(jié)果表明，含有三氯化六銨合釕作為電子媒介體的組合物測試的背景電流較低，當(dāng)全血標(biāo)本中的氧分壓較低時(shí)有明顯的電流梯度，而氧分壓較高時(shí)測試的電流梯度較小。這是由于3-磷酸甘油和甘油磷酸氧化酶既能和氧氣反應(yīng)也能和三氯化六銨合釕反應(yīng)。氧分壓的大小影響3-磷酸甘油和甘油磷酸氧化酶與氧氣或三氯化六銨合釕的反應(yīng)程度。當(dāng)全血標(biāo)本中的氧分壓較高時(shí)，3-磷酸甘油和甘油磷酸氧化酶與氧氣反應(yīng)優(yōu)于其與三氯化六銨合釕的反應(yīng)，導(dǎo)致測試的電流梯度較低。因此只有當(dāng)全血標(biāo)本中的氧分壓較低時(shí)，三氯化六銨合釕才能很好地與3-磷酸甘油和甘油磷酸氧化酶反應(yīng)產(chǎn)生較高的電流梯度。而實(shí)際檢測過程中，往往會采用指尖血和經(jīng)過搖晃的靜脈血標(biāo)本進(jìn)行甘油三酯含量的測定，由于指尖血和搖晃過程與氧氣接觸的靜脈血的氧分壓均比較高，這樣就會導(dǎo)致使用三氯化六銨合釕作為電子媒介體的組合物測試時(shí)，不能準(zhǔn)確區(qū)分甘油三酯45mg/dl到650mg/dl范圍內(nèi)的含量。因此實(shí)施例2中的作為電子媒介體的三氯化六銨合釕在氧分壓較高的情況下，無法準(zhǔn)確測定甘油三酯45mg/dl到650mg/dl范圍內(nèi)的含量。
實(shí)施例3含吩噻嗪衍生物通式i作為電子媒介體的組合物用于檢測血樣中甘油三酯的含量
將以下組合物在不加入酶之前，用naoh調(diào)整其ph為6.5后加入酶備用，將溶液iii點(diǎn)液在絲網(wǎng)印刷電極上，在65℃烘箱中烘20分鐘后取出。
溶液iii:
將以上點(diǎn)液烘干后的絲網(wǎng)印刷電極用雙面膠和上蓋黏貼，鋼滾壓實(shí)后用滾刀切割成每個(gè)電化學(xué)測試條的尺寸為35mm*6mm，將測試條插到測試的儀器上自動(dòng)開機(jī)，分別在虹吸通道處加入實(shí)施例2的全血標(biāo)本，在250mv的測試電壓室溫下進(jìn)行測試。每個(gè)濃度的全血標(biāo)本分別進(jìn)行50次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測得的電流值的cv(變異系數(shù))均在1％到3％范圍內(nèi)，每個(gè)濃度的測定平均值如下表3所示。
表3
實(shí)施例3的測定結(jié)果表明，含有吩噻嗪衍生物通式i做為電子媒介體的組合物測試的背景電流較低，有明顯的電流梯度且不受全血標(biāo)本中溶血后血紅蛋白的影響也不受氧分壓的影響，能準(zhǔn)確地測量出樣品中甘油三酯的含量。
實(shí)施例4含有不同含量吩噻嗪衍生物通式i的組合物用于檢測血樣中甘油三酯的含量
將以下組合物在不加入酶之前，用naoh調(diào)整其ph為6.5后加入酶備用，
將溶液ⅳ點(diǎn)液在絲網(wǎng)印刷電極上，在65℃烘箱中烘20分鐘后取出。
溶液iv
將以上點(diǎn)液烘干后的絲網(wǎng)印刷電極用雙面膠和上蓋黏貼，鋼滾壓實(shí)后用滾刀切割成每個(gè)電化學(xué)測試條的尺寸為35mm*6mm，將測試條插到測試的儀器上自動(dòng)開機(jī)，分別在虹吸通道處加入甘油三酯含量為45-60mg/dl、300-330mg/dl或625-685mg/dl，紅細(xì)胞比容調(diào)整到42％的全血標(biāo)本(即實(shí)施例1中的全血標(biāo)本)，全血標(biāo)本的真實(shí)值參考生化分析儀測試(hitachi7100automaticanalyzer)，在250mv的測試電壓室溫下進(jìn)行測試，每個(gè)濃度的全血標(biāo)本分別進(jìn)行50次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測得的電流值的cv(變異系數(shù))均在1％到3％范圍內(nèi)，每個(gè)濃度的測定平均值如下表4所示。
表4
實(shí)施例4的測定結(jié)果表明含有不同含量吩噻嗪衍生物通式i作為電子媒介體的組合物測定甘油三酯時(shí)，測量電流具有較好的電流梯度，能準(zhǔn)確地測量出樣品中甘油三酯的含量。
實(shí)施例5不同吩噻嗪衍生物作為電子媒介體的組合物用于檢測血樣中甘油三酯的含量
將以下組合物在不加入酶之前，用naoh調(diào)整其ph為6.5后加入酶備用，將溶液v-1點(diǎn)液在絲網(wǎng)印刷電極上，在65℃烘箱中烘20分鐘后取出。
溶液v-1
將以下組合物在不加入酶之前，用naoh調(diào)整其ph為6.5后加入酶備用，將溶液v-2點(diǎn)液在絲網(wǎng)印刷電極上，在65℃烘箱中烘20分鐘后取出。
溶液v-2
將以下組合物在不加入酶之前，用naoh調(diào)整其ph為6.5后加入酶備用， 將溶液v-3點(diǎn)液在絲網(wǎng)印刷電極上，在65℃烘箱中烘20分鐘后取出。
溶液v-3
將以上v-1，v-2和v-3分別點(diǎn)液到絲網(wǎng)印刷電極上烘干后用雙面膠和上蓋黏貼，鋼滾壓實(shí)后用滾刀切割成每個(gè)電化學(xué)測試條的尺寸為35mm*6mm，將測試條插到測試的儀器上自動(dòng)開機(jī)，分別在虹吸通道處加入甘油三酯含量為45-60mg/dl、300-330mg/dl或625-685mg/dl，紅細(xì)胞比容調(diào)整到42％的全血標(biāo)本，全血標(biāo)本的真實(shí)值參考生化分析儀測試(hitachi7100automaticanalyzer)，在250mv的測試電壓室溫下進(jìn)行測試，每個(gè)濃度的全血標(biāo)本分別進(jìn)行50次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測得的電流值的cv(變異系數(shù))均在1％到3％范圍內(nèi)，每個(gè)濃度的測定平均值如下表5所示。
表5
實(shí)施例5的測定結(jié)果表明不同種類的吩噻嗪衍生物作為電子媒介體的組合物可以準(zhǔn)確測定甘油三酯濃度從45mg/dl-650mg/dl范圍內(nèi)的含量，測試結(jié)果有明顯的電流梯度，能準(zhǔn)確地測量出樣品中甘油三酯的含量。
實(shí)施例6穩(wěn)定性試驗(yàn)
利用實(shí)施例5中制備得到的測試條進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，所述測試條中的吩噻嗪衍生物選自通式1。分別在試紙條制備完成時(shí)和試紙條存放兩年后，在250mv的測試電壓下測試，甘油三酯含量為45-60mg/dl、300-330mg/dl或625-685mg/dl，紅細(xì)胞比容調(diào)整到42％的全血標(biāo)本，全血標(biāo)本的真實(shí)值參考生化分析儀測試(hitachi7100automaticanalyzer)，每個(gè)濃度的全血標(biāo)本分別進(jìn)行50次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測得的電流值的cv(變異系數(shù))均在1％到3％范圍內(nèi)，每個(gè)濃度的測定平均值如下表6所示。
表6
實(shí)施例6的測定結(jié)果測試條在放置兩年后其測試電流基本沒有變化，因此本發(fā)明所述電化學(xué)測試條的穩(wěn)定性好。