本發(fā)明屬于生物醫(yī)學領域，涉及一種基于凝集素磁珠的結合珠蛋白異質體診斷肝癌試劑盒。

背景技術：
原發(fā)性肝癌(HCC)是中國常見的惡性腫瘤之一，早期診斷率不高，預后差，5年生存率低。多數的原發(fā)性肝癌病人是由慢性乙肝表面抗原攜帶者演變而來，發(fā)病隱匿，出現臨床癥狀后就醫(yī)時已屬晚期，喪失了治療的良機。肝穿活檢和病理學檢查是肝硬化和肝癌診斷的金標準，但是作為一項創(chuàng)傷性檢查，受各方面因素的影響，不適用于高危人群的篩查。血清學指標檢測仍是臨床上最方便、經濟的檢查手段。糖蛋白聚糖存在著宏觀和微觀的不均一性，其與功能表達相關聯，并與肝病發(fā)生發(fā)展有著密切的聯系。在癌癥的發(fā)生過程中，如能關注糖基化的變化，可以提升診斷的特異性和敏感性。結合珠蛋白(Haptoglobin，Hp)這一高豐度蛋白是我們之前運用傳統(tǒng)的雙向電泳(2-DE)技術在肝病發(fā)展過程中發(fā)現的一個差異蛋白，最初采用糖染色和蛋白染色相結合的MP(MultiplexedProteomicstechnology)技術，發(fā)現在肝病中其糖的變化與蛋白的變化趨勢不一致，說明Hp聚糖在肝癌的發(fā)生過程中有著一定作用。進而發(fā)現在肝癌患者血清中，單位Hp上的巖藻糖含量升高。巖藻糖修飾能賦予聚糖很多獨特的功能特性，其在輸血反應、凝集素介導的白細胞和內皮的粘附、宿主和微生物相互作用和個體發(fā)育等方面發(fā)揮重要作用。此外，巖藻糖還參與構成某些重要粘附分子的聚糖結構，與腫瘤轉移關系密切。因此，本領域技術人員致力于開發(fā)一種能快速有效檢測單位Hp巖藻糖含量的方法及其試劑盒，用于肝癌高發(fā)現場或者肝病人群大規(guī)模篩查，實現早期干預治療，降低肝癌病死率。

技術實現要素：
AAL(橘果粉孢凝集素)是一種親和α連接巖藻糖(TerminalαFuc和±Sia-Lex)的植物凝集素。在前期研究工作中，我們發(fā)現肝癌患者血清單位Hp親和AAL能力顯著增強，說明了肝癌患者的單位Hp巖藻糖含量增多。進而，本發(fā)明應用AAL對巖藻糖化聚糖的高親和性，通過基于磁珠的AAL-Hp-ELISA檢測，提供了一種快速檢測Hp異質體的試劑盒及其方法，并將其命名為Fuc-Hp檢測系統(tǒng)。為實現上述目的，本發(fā)明提供了一種基于凝集素磁珠的結合珠蛋白異質體診斷肝癌試劑盒，所述試劑盒包括：ELISA酶標板、磁珠-AAL、Hp-ELISA酶標板；其中所述ELISA酶標板為空白ELISA酶標板，所述磁珠-AAL為結合有AAL的磁珠，所述Hp-ELISA酶標板為包被有Hp抗體的ELISA酶標板。所述ELISA酶標板可選自市售的常規(guī)ELISA酶標板，優(yōu)選為96孔ELISA酶標板。優(yōu)選地，所述磁珠-AAL中磁珠與AAL的質量比為180-220:1，最佳為200:1。優(yōu)選地，所述Hp抗體為人Hp抗體。優(yōu)選地，所述磁珠-AAL的制備方法包括步驟：1)將磁珠置于EDC溶液中反應；2)反應完成后，移除上清并用緩沖液清洗磁珠；3)取一定量的AAL置于偶聯液中，加入磁珠反應；4)反應完成后，封閉未反應的活化基團。優(yōu)選地，步驟1)中所述EDC溶液的濃度為8-12mg/ml，最佳為10mg/ml；步驟1)的的反應時間為30-50分鐘，最佳為40分鐘。優(yōu)選地，步驟3)中所述偶聯液為0.1M磷酸鈉、0.15MNaCl，pH＝7.5的溶液。優(yōu)選地，步驟1)和步驟3)中加入的磁珠與AAL的質量比為180-220:1，最佳為200:1。優(yōu)選地，步驟4)中所述封閉使用的封閉液為用偶聯液配制的20mg/mlBSA和20mg/ml甘氨酸的溶液。在本發(fā)明的另一種實施方式中，所述Hp-ELISA酶標板可拆分為ELISA酶標板和Hp抗體試劑，在此種情況下，所述Hp-ELISA酶標板可在需要時由操作人員自行制備。在本發(fā)明的又一種實施方式中，所述磁珠-AAL可拆分為磁珠、AAL及其制備相關試劑，在此種情況下，所述磁珠-AAL可在需要時由操作人員自行制備。進一步，本發(fā)明可根據每個血清樣品中Hp結合AAL的實際OD值與相同血清樣品中Hp蛋白的實際OD值的比值結合臨床統(tǒng)計數據來預測和診斷肝癌。優(yōu)選地，所述基于凝集素磁珠的結合珠蛋白異質體診斷肝癌試劑盒還包括HCC預測模型：P＝exp(-2.554+2.009×Fuc-Hp)/[1+exp(-2.554+2.009×Fuc-Hp)]；Fuc-Hp值的計算方法為：每個血清樣品中Hp結合AAL的實際OD值與相同血清樣品中Hp蛋白的實際OD值的比值，所述血清樣品中Hp結合AAL的實際OD值通過磁珠-AAL-Hp-ELISA檢測得到，血清樣品中Hp蛋白的實際OD值通過常規(guī)Hp-ELISA檢測得到，該模型區(qū)分肝癌病人和正常人的閾值為1.0154，大于1.015...